Оригинальное исследование Мутант фототоксичного белка KillerRed, не формирующий DsRed-подобного хромофора
Д. А. Горбачев, К. С. Саркисян
Генетически кодируемые фотосенсибилизаторы на основе флуоресцентных белков способны производить активные формы кислорода при облучении светом, и потому их широко используют в качестве оптогенетических инструментов. Разработанные на сегодняшний день фотосенсибилизаторы с зеленой флуоресценцией обладают неоптимальными свойствами. Целью настоящей работы был поиск новых вариантов флуоресцентных белков с эффективным созреванием хромофора и высокой фототоксичностью. С помощью случайного мутагенеза фототоксичного флуоресцентного белка KillerRed и направленной эволюции в E. coli получен белок с хромофором на основе тирозина, флуоресцирующий в зеленой области спектра. Новый белок, несущий мутации I64L, D114G и T115S, не формирует DsRed-подобного хромофора и может быть использован как базовый генотип для разработки новых спектрально отличных от KillerRed генетически кодируемых фотосенсибилизаторов.
Статья получена: 08.12.2019
Опубликовано online: 20.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.084
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6238
Мнение Автономные биолюминесцентные системы: перспективы использования в имиджинге живых организмов
З. М. Осипова, А. С. Щеглов, И. В. Ямпольский
Биолюминесцентные системы все чаще применяют для разработки высокочувствительных оптических методов имиджинга in vivo. Однако при использовании популярных систем необходимо инъекционно вводить дорогие и малостабильные синтетические субстраты (люциферины) перед каждым анализом. Автономные системы бактерий и грибов, которые недавно стали доступны для работы с эукариотическими клетками, по нашему мнению, могут развиться в полноценный инструмент для создания новых технологий биолюминесцентного имиджинга.
Статья получена: 03.12.2019
Опубликовано online: 19.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.083
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 7342
Мнение Возможности применения CD4+-регуляторных Т-клеток в терапии аутоиммунных заболеваний
А. В. Чуров, А. И. Сюткина, К. Ы. Мамашов, Е. К. Олейник
На сегодняшний день достигнуты значительные успехи в терапии аутоиммунных патологий, однако существующие методы сопряжены с риском возникновения тяжелых побочных эффектов. Применение Treg-клеток, на наш взгляд, представляет значительную перспективу в терапии состояний, связанных с нарушением аутотолерантности. В работе дана оценка возможных трудностей использования клинического подхода на основе Treg-клеток и предложены пути решения научно-технических задач, возникающих при применении Treg в терапии аутоиммунных заболеваний.
Статья получена: 25.11.2019
Опубликовано online: 18.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.082
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6659
Метод Обратный меридиональный циклодиализ ab interno в лечении открытоугольной глаукомы — предварительные результаты
В. Кумар, М. А. Фролов, Г. Н. Душина, А. С. Шрадка, А. И. Беззаботнов, К. А. Абу Заалан
Увеосклеральный путь оттока внутриглазной жидкости (ВГЖ) представляет большой интерес в хирургическом лечении глаукомы. Суть операции циклодиализа заключается в создании прямого сообщения между передней камерой (ПК) глаза и супрахориоидальным пространством (СХП), главным звеном увеосклерального пути оттока ВГЖ. Целью нашего исследования было оценить безопасность и эффективность обратного меридионального циклодиализа ab interno (ОМЦai) в снижении внутриглазного давления (ВГД) у пациентов с первичной открытоугольной глаукомой (ПОУГ) и рефрактерной глаукомой (РГ). У 14 пациентов с ПОУГ (11 мужчин и 3 женщины в возрасте 77,3 ± 7,8 лет) был проведен ОМЦai с помощью специально разработанного шпателя. Шпателем создавали циклодиализную щель шириной 2,0–2,5 мм и глубиной 6,0–6,5 мм. Критериями оценки успеха операции были динамика ВГД, потребность в дополнительной гипотензивной терапии и повторном хирургическом вмешательстве, а также наличие осложнений. Успех считали полным, если ВГД снижалось более чем на 20% и оставалось в переделах 6–21 мм рт. ст. без применения гипотензивных средств. Признанный успех связывали с потребностью в гипотензивной терапии. Лечение считали неудачным, если возникала необходимость в повторном хирургическом вмешательстве. Пациенты оставались под наблюдением не менее трех месяцев. Исходное ВГД и количество используемых гипотензивных препаратов составляли 22,0 ± 8,5 мм рт. ст. и 2,6 ± 0,9 соответственно. Через 3, 6, 12, 18 и 24 месяца после операции полный успех был достигнут в 64,3, 77,8, 55,6, 37,5 и 40% случаев соответственно, признанный — в 14,3, 22,2, 44,4, 50 и 60% случаев. Повторная операция потребовалась 4 пациентам. Причиной неудачи стала фиброзная облитерация циклодиализной щели. Было установлено, что ОМЦai безопасен и эффективен в снижении ВГД у пациентов с ПОУГ и РГ.
Статья получена: 27.11.2019
Опубликовано online: 16.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.081
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6342
Оригинальное исследование Оценка качества жизни по международной классификации функционирования при множественных церебральных аневризмах после эндоваскулярного лечения
А. А. Олейник, Н. Е. Иванова, Е. А. Олейник, А. Ю. Иванов
Аневризматическое субарахноидальное кровоизлияние (САК) ассоциировано с высокой летальностью и инвалидизацией больных. Пациенты с множественными церебральными аневризмами (МА) чаще подвержены неоднократным оперативным вмешательствам, у них имеется вероятность образования аневризм de novo и их разрыва. Целью исследования было оценить качество жизни (КЖ) пациентов с помощью Международной классификации функционирования (МКФ) в отдаленном послеоперационном периоде после эндоваскулярного лечения МА для определения пути оптимизации реабилитации. В исследовании приняли участие оперированные эндоваскулярно пациенты с множественными (> 2) церебральными аневризмами (141 человек). Всем пациентам было выполнено 1–6 эндоваскулярных операций, осложнения лечения возникли в 7,1% (10/141). КЖ определяли в сроки от 6 до 24 месяцев после операции, используя МКФ. Выявлено, что в отдаленном послеоперационном периоде результаты были хуже по доменам, связанным с болью, памятью, координацией движений, силой конечностей. При геморрагическом типе течения результаты по доменам, связанным с передвижением, были хуже по сравнению с другими типами течения (p < 0,05), а при псевдоопухолевом — по доменам, связанным с нарушением функции черепно-мозговых нервов, отвечающих за иннервацию мышц глаза (p < 0,001). По сравнению с показателями дооперационного периода в отдаленном послеоперационном периоде выявлено повышение активности и участия больных с геморрагическим типом течения (p < 0,05). На выраженность нарушений активности влияли осложнения операций, возраст больных (p < 0,05), осложнения острого периода САК (p < 0,001).
Статья получена: 19.11.2019
Опубликовано online: 13.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.080
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6412
Оригинальное исследование Получение рекомбинантного штамма Herpesvirus saimiri путем совместной культивации трансфицированной и пермиссивной клеточных культур
А. Хамад, С. П. Чумаков
Рекомбинантные герпесвирусы можно применять в качестве терапевтических агентов-онколитиков, а также в качестве векторов большой емкости для доставки протяженных экспрессионных конструкций в клетки. Гамма-герпесвирус беличьих обезьян Herpesvirus saimiri обладает уникальной способностью инфицировать человеческие лимфоциты и вызывать их иммортализацию при сохранении зрелого фенотипа и функциональной активности. Проведение рекомбинации генома Herpesvirus saimiri в пермиссивной клеточной культуре затруднено из-за ее устойчивости к химической трансфекции и электропорации. Целью работы являлась разработка эффективного способа введения экспрессионных кассет в геном Herpesvirus saimiri без проведения трансфекции пермиссивной клеточной культуры. Для этого мы использовали совместную культивацию трансфицированных клеток HEK-293T, экспрессирующих также гликопротеины вакцинного штамма вируса кори, и инфицированных Herpesvirus saimiri пермиссивных клеток линии ОМК. Слияние клеток и образование синцитиев привели к запуску рекомбинации между вирусным геномом и экспрессионной кассетой, что позволило получить рекомбинантный вариант Herpesvirus saimiri без необходимости проведения химической трансфекции пермиссивных клеток. Трансгенный вариант вируса характеризовался стабильной экспрессией селективного маркера и сохранял способность персистировать в клеточной культуре в латентной форме, а также вызывать иммортализацию первичных лимфоидных клеток. Примененный метод позволяет в короткие сроки получать рекомбинантные варианты Herpesvirus saimiri с введенными в геном разнообразными экспрессионными кассетами.
Статья получена: 11.11.2019
Опубликовано online: 11.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.079
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6701
Оригинальное исследование Технология интерфейса мозг-компьютер как контролируемый идеомоторный тренинг в реабилитации больных после инсульта
Ю. В. Бушкова, Г. Е. Иванова, Л. В. Стаховская, А. А. Фролов
Восстановление функции руки у пациентов после инсульта является приоритетным направлением в нейрореабилитации. Развитие технологии интерфейса мозг-компьютер-экзоскелет кисти (ИМКЭ) качественно улучшило реабилитацию в этом направлении. Целью данного исследования было изучить факторы, влияющие на двигательное восстановление верхней конечности у пациентов после инсульта на фоне применения технологии ИМКЭ. Исследовали 24 пациента (14 мужчин, 10 женщин) в возрасте от 51 до 62 лет с единичным очагом инсультной этиологии, супратенториальной локализации. В 11 (45,6%) случаях левополушарное поражение, в 13 (54,4%) случаях — правополушарное. Давность инсульта — 4,0 (3,0; 12,0) месяца. Медиана МоСА — 25,0 (23,0; 27,0). Курс занятий ИМКЭ включал 9,5 (8,0; 10,0) процедур. Выявлена значимая умеренная корреляция между успешностью моторного представления (MIQ-RS) и эффективностью взаимодействия пациентов с ИМКЭ кисти. Пациенты с высокими показателями MIQ-RS 47,5 (32,0; 54,0) достоверно лучше взаимодействовали с ИМКЭ 63,0 (54,0; 67,0), R = 0,67 (p < 0,05). У пациентов с высокими показателями MIQ-RS динамика двигательного восстановления была более выраженной: медиана ΔFugl-Meyer Assessment (FMA) составила 14 (8,0; 16,0) баллов против группы пациентов с низкими показателями MIQ-RS, ΔFMA — 10 (6,0; 13,0), но при этом не достигла статистически значимого уровня. Таким образом, выявлена взаимосвязь между способностью пациентов к моторному представлению (MIQ-RS) и эффективностью взаимодействия пациентов с ИМКЭ. Для выявления влияния этих факторов на динамику двигательного восстановления руки, вероятно, требуется продолжить исследование с большей выборкой.
Статья получена: 12.11.2019
Опубликовано online: 07.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.078
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 7407
Оригинальное исследование Ассоциация SNP генов белков урокиназной системы с развитием плацентарной недостаточности
Д. Б. Ревина, А. В. Балацкий, Е. Б. Ларина, Н. А. Олейникова, Г. А. Мишуровский, П. Г. Мальков, Л. М. Самоходская, О. Б. Панина, В. А. Ткачук
Плацентарная недостаточность (ПН) и ее осложнения — многофакторные заболевания, ведущие к перинатальной заболеваемости и смертности. Урокиназная система задействована в формировании плаценты и может быть рассмотрена как участник патогенеза ПН. Целью работы было исследовать ассоциацию однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) генов белков урокиназной системы с развитием ПН, их влияние на экспрессию соответствующих белков в плаценте и ее строение. Обследованы 114 женщин с физиологическим течением беременности и родов и 48 пациенток с преэклампсией и/или задержкой роста плода (ЗРП), 95 новорожденных детей (беременность с преэклампсией и/или ЗРП — 60, физиологическое течение беременности и родов — 35). Проведено генотипирование при помощи ПЦР в реальном времени, морфометрическое и иммуногистохимическое исследования фрагментов плацент. Выявлены ассоциации между развитием ПН и наличием у матери — аллеля C rs4065 (в группе ПН — СС-СТ 64,1%, TT 35,9%, в контрольной группе — СС-СТ 25,6%, TT 74,49%, ОШ (95% ДИ) — 6,83 (2,63–17,79)), аллеля A rs2302524 (GG-GA 20,5%, AA 79,5% против GG-GA 48,1%, AA 51,9%, ОШ (95% ДИ) — 0,27 (0,1–0,71)), у плода — аллеля C rs4065 (СС-СТ 76,4 %, TT 23,6% против СС-СТ 69,6%, TT 30,4%, ОШ (95% ДИ) — 1,37 (0,45–4,17)), аллеля C rs344781 (TT-TC 69,1%, СС 30,9% против TT-TC 95,7%, СС 4,3%, ОШ (95% ДИ) — 5,02 (1,07–23,6)). Многофакторный анализ подтвердил значимость генотипа плода по rs4065. Экспрессия uPA была ниже при ПН (медиана (95% ДИ) — 116,45 (100,5; 128,74) против 126,09 (113,76; 139,19); р < 0,05). Ассоциации SNP c экспрессией белков выявлено не было. Васкуляризация зависела от генотипа матери по rs4065 (стромально- сосудистое соотношение при генотипе CC — 0,17 (0,15; 0,19), CT — 0,18 (0,15; 0,21), TT — 0,23 (0,2; 0,27); p < 0,05). Таким образом, высокий уровень uPA в плаценте и наличие генотипа rs4065 TT у плода носят протективный характер в отношении развития ПН.
Статья получена: 31.10.2019
Опубликовано online: 07.12.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.076
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6944