Оригинальное исследование Использование комбинации рибосомного и фагового дисплеев для быстрого отбора высокоаффинных VHH-фрагментов антител альпак
Ю. Е. Кравченко, С. В. Иванов, Д. С. Кравченко, Е. И. Фролова, С. П. Чумаков
Селекция антител с помощью фагового дисплея предполагает предварительное клонирование репертуара последовательностей, кодирующих антигенсвязывающие участки, в фагмиду, что считается «бутылочным горлышком» метода, ограничивающим итоговое разнообразие библиотек и ведущим к потере слабо представленных вариантов еще до начала процедуры селекции. Отбор в бесклеточных условиях при помощи рибосомного дисплея лишен этого недостатка, однако отличается высокой чувствительностью к артефактам ПЦР и присутствию РНКаз. Целью работы было исследование эффективности сочетания двух методов: проведения предварительной селекции в бесклеточной системе для обогащения исходной библиотеки с последующим клонированием и заключительной селекцией при помощи фагового дисплея. Предполагалось, что такой режим селекции позволит устранить недостатки каждого из методов и повысить эффективность отбора. Для селекции использовали последовательности VHH-антител альпаки, удобные для построения иммунной библиотеки из-за отсутствия VL-доменов. Анализ иммунных библиотек из генов семейств VH3, VHH3 и VH4 показал, что в группах генов VH3 и VH4 доля VHH-антител незначительна, и селекция из комбинированной библиотеки менее эффективна, чем из библиотеки последовательностей семейства VHH3. Мы установили, что комбинация рибосомного и фагового дисплеев приводит к более высокому обогащению высокоаффинными фрагментами и позволяет избежать потери исходного разнообразия при клонировании. Комбинированный метод позволил получить большее количество различных высокоаффинных последовательностей, а все протестированные VHH-фрагменты оказались способными специфично распознавать мишень, в том числе в тотальных белковых экстрактах клеточных культур.
Статья получена: 08.12.2018
Опубликовано online: 24.02.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.002
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6925
Оригинальное исследование Оценка диастолической функции миокарда у пациентов с болевым синдромом в грудной клетке и ангиографически неизменными коронарными артериями методом синхронизированной с ЭКГ однофотонной эмиссионной компьютерной томографии
Э. А. Хачирова, Л. Е. Самойленко, О. П. Шевченко
На протяжении многих лет остается актуальной тема диагностики и тактики ведения пациентов с ангиографически неизмененными или малоизмененными коронарными артериями (КА). Целью исследования было оценить диастолическую функцию у пациентов с болевым синдромом в грудной клетке и неизмененными/малоизмененными КА (Н/МКА) по данным синхронизированной с ЭКГ однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (С-ОЭКТ/КТ). В исследование вошли 49 пациентов с болевым синдромом в области грудной клетки, положительными результатами нагрузочного теста и Н/МКА по данным коронароангиографии (КАГ). Всем пациентам выполнили С-ОЭКТ/КТ миокарда по двухдневному протоколу. После исследования пациенты были разделены на три группы: 17 пациентов с микрососудистой стенокардией составили группу 1; 22 пациента с пограничной артериальной гипертензией (АГ), или гипертонической болезнью (ГБ) I стадии, ассоциирующейся с вторичной микрососудистой дисфункцией — группу 2. Группу контроля, или группу 3, составили 10 практически здоровых лиц, у которых при КАГ были исключены заболевания со стороны сердечно-сосудистой системы, сопровождающиеся изменениями коронарных артерий и нарушениями перфузии миокарда при проведении ОЭКТ. У большинства пациентов в группах 1 и 2 были выявлены нарушения диастолической функции, при этом в группе 2 они глубже и усугубляются при нагрузке. Наиболее чувствительный параметр диастолической функции — средняя скорость наполнения ЛЖ в первую треть диастолы (MFR/3) — изменен практически у всех пациентов групп 1 и 2. У пациентов группы контроля изменения не выявлены. Таким образом, у пациентов с болью в груди, положительным стресс-тестом и Н\ МКА выявлены признаки диастолической дисфункции ЛЖ (ДДФ) и дальнейшее ее ухудшение при нагрузке. Эти пациенты могут представлять собой группу риска развития сердечной недостаточности с сохраненной фракцией выброса.
Статья получена: 17.09.2018
Опубликовано online: 23.02.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2019.001
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 7181
Обзор Лабораторная диагностика как основа медицины 5П
С. Н. Щербо, Д. С. Щербо
В рамках модернизации системы здравоохранения в настоящее время происходит изменение старых и становление новых направлений современной медицины: персонализированной, предиктивной, превентивной, партисипативной, прецизионной, мобильной и цифровой. Вместе с тем, в научной литературе и медицинском сообществе имеются различные мнения о целях, области применения и задачах указанных направлений здравоохранения и роли в них лабораторной диагностики. Прежде всего это относится к прецизионной медицине, которая воспринимается только как более современное название персонализированной медицины. В обзоре проанализирована и обобщена имеющаяся на сегодняшний день информация и представлены примеры применения подходов медицины 5П в клинической практике.
Статья получена: 30.01.2019
Опубликовано online: 14.02.2019
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.095
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 7784
Мнение Использование моноклональных антител для терапии аутоиммунных заболеваний
Е. М. Мерзляк, Д. С. Сырко, Е. А. Мусаткина, М. А. Израельсон
В последнее время в терапии аутоиммунных заболеваний стали применять моноклональные антитела. Мишенью этих антител являются провоспалительные цитокины и собственно Т и В -клетки потенциально участвующие в патогенезе заболевания. В данной статье проведена попытка систематизировать используемые препараты и привести основные механизмы, лежащие в основе такого рода терапии, описаны нежелательные побочные действия. Потенциальными путями и перспективами развития биологиксов в лечении аутоиммунных заболеваний, по нашему мнению, являются моноклональные антитела, которые узнают и элиминируют клоны Т и В-клеток, обусловливающие патогенез аутоиммунного заболевания. Поиск аутореактивных клонов  является сложной и актуальной задачей современной  биомедицины.      
Статья получена: 06.12.2018
Опубликовано online: 31.12.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.094
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 10306
Мнение Современное состояние хирургии аневризм: «промикрохирургический» взгляд
А. В. Дубовой, А. В. Бервицкий, А. Спаллоне
Современные способы лечения внутричерепных аневризм являются предметом дискуссий между сторонниками «традиционной» микрохирургической техники и относительно нового эндоваскулярного лечения. В статье представлен опыт нейрохирургов ― сторонников  открытой микрохирургии. Сложные аневризмы задней циркуляции в настоящее время, как правило, оперируются эндоваскулярно, в то время как аневризмы переднего бассейна могут быть вылечены обоими методами, а для аневризм средней мозговой артерии (СМА) и дистальных аневризм передней мозговой артерии (ПМА) лучше подходит микрохирургия. Техническое усовершенствование и, вероятно, снижение стоимости эндоваскулярных устройств будут способствовать тенденции к использованию эндоваскулярного метода. Однако потребность в хорошо подготовленных микрососудистых хирургах останется, и надлежащая подготовка будущих поколений таких специалистов в условиях снижения числа пациентов и случаев открытых хирургических вмешательств представляет собой серьезную проблему для нейрохирургического сообщества, решение которой предстоит найти.
Статья получена: 28.06.2018
Опубликовано online: 31.12.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.093
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6391
Мнение Разработка липосомальных форм лекарственных препаратов: методы оценки и показатели
Е. В. Мельникова, Д. В. Горячев, А. А. Чапленко, М. А. Водякова, А. Р. Сайфутдинова, В. А. Меркулов
Одним из трендов фармации на сегодняшний день является применение наноструктурных компонентов для производства лекарств, в частности для направленной доставки лекарственных средств в заданную область организма, органа или клетки. К нанопрепаратам относятся препараты, содержащие дендримеры, нанокристаллы, мицеллы, липосомы, а также полимерные наночастицы. В настоящее время липосомы ― одни из наиболее исследованных наночастиц, которые рассматриваются как современные и эффективные средства доставки различных препаратов. Однако увеличение сложности структуры препарата неизбежно приводит к увеличению числа критических точек производства, а также к расширению списка показателей качества. Наряду с классическими показателями и методами контроля качества, оценивают также физико-химические свойства липосомальной фракции: форму, размер и заряд частиц; эффективность конъюгации маркеров; равномерность распределения действующего вещества. Для оценки ключевых параметров липосом используют динамическое и лазерное светорассеяние в сочетании с электрофорезом, дифференциальную сканирующую калориметрию, криорасщепляющую электронную микроскопию, ядерный магнитный резонанс, лазерную дифракцию и гель-фильтрацию.
Статья получена: 29.06.2018
Опубликовано online: 31.12.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.092
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 7842
Оригинальное исследование Экспрессия химерного антигенного рецептора в натуральных киллерах линии NK-92 путем трансдукции лентивирусными частицами, псевдотипированными поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори
Ю. Е. Кравченко, Д. И. Гагаринская, Е. И. Фролова, С. П. Чумаков
Клеточная иммунотерапия с использованием химерных антигенных рецепторов является одним из перспективных направлений развития современной онкологии. Собственные Т-лимфоциты пациента с приданной специфичностью в отношении неоантигенов опухолей за счет экспрессии химерного антигенного рецептора демонстрируют клиническую эффективность, однако стоимость такой терапии чрезвычайно высока. В качестве более доступной альтернативы могут быть использованы унифицированные носители химерных антигенных рецепторов на основе линии клеток натуральных киллеров NK-92. Эта культура отличается устойчивостью к лентивирусной трансдукции; однако для трансдукции первичных иммунных клеток недавно начали успешно применять лентивирусные векторы, псевдотипированные поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори. Целью работы было определить эффективность трансдукции клеток NK-92 лентивирусами, псевдотипированными гликопротеинами F и H вируса кори, а также условий селекции NK-92, трансдуцированных химерным рецептором против CD20 и оценить их цитотоксическое действие.  Результаты исследования показали, что максимальный трансфекционный титр достигается при использовании варианта белка H (H∆18) в сочетании с вариантом белка F (F∆30), а применение BX795 (ингибитора TBK1/IKKɛ) дополнительно позволяет добиться трехкратного увеличения инфекционного титра. ХАР-экспрессирующие клетки NK-92 оказались способными подавлять пролиферацию CD20+- клеток линии Raji в меньшей дозе, по сравнению с немодифицированными клетками NK-92.
Статья получена: 27.11.2018
Опубликовано online: 31.12.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.091
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 7914
Мнение Наночастицы золота для диагностики и терапии онкологических заболеваний
П. Б. Курапов, Е. Ю. Бахтенко
Химическая стабильность, низкая токсичность, относительная простота методов синтеза и модификации наночастиц (НЧ) золота способствуют их использованию в различных областях биомедицины, таких как диагностика in vitro, адресная доставка лекарств, фототермическая и фотодинамическая терапия. Высокое соотношение площади поверхности к объему этих НЧ существенно облегчает создание на их основе комплексных наноплатформ, используемых сразу в нескольких терапевтических и диагностических направлениях. Уникальные электрические и оптические свойства НЧ золота, известные как локализованный поверхностный плазмонный резонанс особенно актуальны для диагностики различных заболеваний. Рассмотрены основные методы синтеза и модификации НЧ золота, в частности методами «зеленой химии», фармакологические аспекты их применения и использования в качестве диагностических агентов. По нашему мнению, именно благодаря своим уникальным свойствам наноплатформы для адресной доставки лекарственных препаратов и тераностики, созданные на основе НЧ золота, имеют неоспоримые преимущества перед другими типами наночастиц.
Статья получена: 29.11.2018
Опубликовано online: 31.12.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.090
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 8348