2020 / 05

Следующая статья
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.057

ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Теломеризованные фибробласты как потенциальный объект для 3D-моделирования патологических гипертрофических рубцов in vitro

В. С. Шадрин, П. М. Кожин, О. О. Шошина, Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов
Информация об авторах

Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В. Н. Ореховича, Москва, Россия

Для корреспонденции: Валериан Сергеевич Шадрин
ул. Погодинская, д. 10, стр. 8, г. Москва, 119121; moc.liamg@nirdahsnairelav

Информация о статье

Финансирование: работа выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации в рамках ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014–2020 годы» (соглашение № 05.604.21.0219, Уникальный идентификатор проекта RFMEFI60419X0219).

Вклад авторов: Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов — концепция и дизайн исследования; В. С. Шадрин, П. М. Кожин, О. О. Шошина, Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов — анализ литературы, анализ и интерпретация полученных данных, редактирование рукописи; В. С. Шадрин, П. М. Кожин — планирование и проведение исследования; В. С. Шадрин — написание статьи.

Статья получена: 28.08.2020 Статья принята к печати: 02.09.2020 Опубликовано online: 27.09.2020
|
Рис. 1. Характеристики клеток НФ и Фб-hTERT в 2D-культуре. А. Внешний вид клеток НФ и Фб-hTERT. Световая микроскопия, ув. ×100. Б. Метаболическая активность клеток НФ и Фб-hTERT в зависимости от концентрации TGFβ1 (МТТ-тест). * — статистически значимые отличия от предыдущей дозы воздействия TGFβ1 (p < 0,05); # — статистически значимые отличия от группы клеток НФ при той же дозе воздействия TGFβ1 (p < 0,05). Примечание: здесь и далее на рисунках НФ — нормальные фибробласты кожи крайней плоти человека, Фб-hTERT — теломеризованные постнатальные фибробласты кожи человека
Рис. 2. Исследование базовой (контроль) и стимулированной TGFβ1 скорости закрытия дефекта монослоя клетками НФ и Фб-hTERT (скрэтч-тест, TGFβ1 введен в питательную среду в концентрации 1 нг/мл). * — статистически значимые отличия от базовой скорости закрытия дефекта монослоя (p < 0,05); # — статистически значимые отличия от группы Фб-hTERT при тех же условиях культивирования (p < 0,05)
Рис. 3. Формирование сфероидов НФ и Фб-hTERT. А. Динамика изменения среднего диаметра сфероидов НФ и Фб-hTERT в процессе культивирования в зависимости от количества клеток, использованных при их формировании (M ± σ). Б. Внешний вид сфероидов НФ (20 тыс. клеток) и Фб-hTERT (10 тыс. клеток). Световая микроскопия, ув. ×40
Рис. 4. Средний диаметр сфероидов, сформированных из НФ и Фб-hTERT в зависимости от времени инкубирования в условиях добавления в питательную среду TGFβ1 (1 нг/мл) и без (контроль). Для получения исходных сфероидов сопоставимого размера при их формировании использовали 20 тыс. клеток — для НФ и 10 тыс. клеток — для Фб-hTERT. * — статистически значимые отличия от группы контроля при том же сроке инкубации (p < 0,05)
Рис. 5. Уровень экспрессии генов, ассоциированных с развитием гиперпластических процессов, в клетках НФ и ПФ-hTert в интактном состоянии и при воздействии TGFβ1 (1 нг/мл). * — статистически значимые отличия в экспрессии гена в клетках Фб-hTERT от НФ при том же воздействии TGFβ1 (p < 0,05); # — статистически значимые различия в экспрессии гена в линиях клеток при воздействии TGFβ1 и без (p < 0,05)
Рис. 6. Продукция коллагена I в сфероидах, сформированных из клеток НФ и Фб-hTERT при воздействии TGFβ1 в концентрации 1 нг/мл. А. Иммунофлуоресценция, лазерная конфокальная микроскопия, ув. ×100; синий — окраска ядер Dapi, зеленый — коллаген I. Б. Относительная интенсивность флуоресценции коллагена I в сфероидах НФ и Фб-hTERT при воздействии TGFβ1 (1 нг/мл). * — статистически значимые различия в интенсивности флуоресценции коллагена I в сфероидах при воздействии TGFβ1 и без (p < 0,05); # — статистически значимые отличия в интенсивности флуоресценции коллагена I в сфероидах Фб-hTERT от НФ при том же воздействии TGFβ1 (p < 0,05)