Вульгарная пузырчатка — тяжелое аутоиммунное буллезное заболевание, обусловленное продукцией аутоантител к десмоглеину 3 (Dsg3). Для разработки отечественных диагностических тест-систем на основе иммуноферментного анализа (ИФА) необходим доступный стандартизированный антигенный компонент — рекомбинантный внеклеточный фрагмент Dsg3. Цель проведенного ретроспективного экспериментального исследования — получить рекомбинантный эктодомен Dsg3 (домены ЕС1-ЕС5) в гетерологичной системе экспрессии и оценить его иммунореактивность с аутоантителами пациентов с вульгарной пузырчаткой при использовании в качестве целевого антигена в ИФА. Синтетический ген, кодирующий домены ЕС1-ЕС5 Dsg3, клонировали в эукариотические экспрессионные векторы p1.1-Tr2 и p1.2-GS. Полученными конструкциями трансфицированы клетки линии CHO4BGD. Целевой белок очищали методом аффинной хроматографии на Ni-Sepharose FF сорбенте. Иммунореактивность рекомбинантного Dsg3 как антигенного субстрата оценивали методом ИФА с использованием сывороток пациентов с вульгарной пузырчаткой (n = 12) и здоровых доноров (n = 5) в двух буферных условиях: с ЭДТА (Dsg3-ЭДТА) и с добавлением ионов Ca²⁺ (Dsg3-Ca²⁺). Референсом служила коммерческая тест-система для ИФА Euroimmun (целевой антиген — эктодомен Dsg3). В результате получены транзиентные культуры клеток-продуцентов ЕС1-ЕС5 доменов Dsg3. Методом аффинной хроматографии выделен белок с чистотой > 90%. При ИФА-тестировании в буфере Dsg3-ЭДТА положительными были классифицированы 33,3% образцов, а в буфере Dsg3-Ca²⁺ — 50,0%; эффект добавления Ca²⁺ был гетерогенным: у 58,3% образцов отмечено повышение сигнала, у 41,7% — снижение. Результаты указывают на необходимость перехода к экспрессии Dsg3 в клетках человека (HEK293).