Вестник РГМУ

Acinetobacter baumannii представляет собой патоген высокого приоритета, быстро приобретающий множественную лекарственную устойчивость. Ограниченное временное разрешение на протеомном и транскриптомном уровнях затрудняет углубленное исследование процессов приобретения резистентности в режиме реального времени, что усложняет разработку эффективных стратегий преодоления устойчивости. Целью работы было исследовать процессы приобретения резистентности на 45 клинических штаммах A. baumannii из трех географических зон в течение 72 ч путем воздействия карбапенемами, аминогликозидами и β-лактамными антибиотиками в субингибирующей концентрации. Процесс приобретения кинетической резистентности одновременно отслеживали посредством вестерн-блоттинга для определения уровня экспрессии белков резистентности (β-лактамаз, эффлюксных насосов, поринов) и количественной ПЦР (ОТ-ПЦР) мРНК с использованием специально разработанных зондов TaqMan с максимально высоким временным разрешением (13 временных точек с интервалом 6 ч). Анализ методом вестерн-блоттинга выявил ранее не известную двухфазную индукцию белков резистентности: раннюю фазу (0–18 ч) с 3,4-кратной индукцией OXA-23 и позднюю фазу (24–72 ч) с 7,8-кратной индукцией NDM-1. Результаты применения ОТ-ПЦР показали, что уровень мРНК достигает максимума за 4–8 ч до достижения максимальной экспрессии белка, что говорит о существовании полноценной посттранскрипционной регуляции. Обнаружено, что уровень белка семейства эффлюксных насосов AdeB повысился в 12,6 раз при повышении уровня мРНК лишь в 2,1 раза, что свидетельствует о значительном усилении трансляции с соотношением белок/ мРНК, равным 6,1. Алгоритм машинного обучения разделил результаты воздействия на три различные категории, что имеет большое клиническое значение: эффект достигнут рано (воздействие неэффективно в 89% случаев); эффект достигнут поздно (воздействие неэффективно в 45% случаев); имеет место конститутивная экспрессия (воздействие неэффективно в 67% случаев). Таким образом, интегративный анализ выявил новые параметры временной динамики развития резистентности, основные «окна» для вмешательства продолжительностью 4–8 ч до момента, когда резистентность становится необратимой. Посттранкрипционная регуляция намного более важна, чем принято считать. Ее можно использовать для разработки новой комплексной терапии и персонализированной противомикробной терапии.