Оригинальное исследование Экспрессия MTCO1 в культурах клеток пациентов с синдромом Ли при действии AAV9-SURF1
М. А. Адрианов, М. С. Готье, А. В. Дегтярева, М. В. Марей, Л. А. Манухова, С. М. Расторгуев, В. С. Симонов, Л. В. Ушакова, М. Ю. Высоких
Самым частым биохимическим дефектом при синдроме Ли является нарушение белков, которые участвуют в сборке субъединиц IV комплекса электронтранспортной цепи — цитохром-с-оксидазы (COX). Среди них наиболее часто встречаются мутации гена SURF1. Белок SURF1 встроен во внутреннюю мембрану митохондрии и играет решающую роль в сборке СОХ-комплекса. Все мутации в гене SURF1 приводят к биосинтезу укороченного белка и повреждениям СОХ-комплекса. Для терапии данного заболевания исследуют возможность использования аденоассоциированных вирусных векторов (AAV9), в геном которых внесен немутированный SURF1 (AAV9-SURF1). Целью исследования было дать оценку уровня экспрессии белков SURF1, MTCO1 в цельной крови пациентов с синдромом Ли на фоне полученных референсных значений для пула пациентов без мутаций, а также оценку экспрессии субъединицы цитохром-с-оксидазы MTCO1 в культурах фибробластов кожи пациентов с синдромом Ли при действии AAV9-SURF1. Для моделирования генотерапевтического воздействия к фибробластам, полученным из кожи пациента, и к контрольным фибробластам кожи был добавлен AAV9-SURF1 в подобранной оптимальной дозе, не приводящей к ухудшению жизнеспособности клеток в МТТ-тесте. Методами вестерн-блота и количественной ПЦР мы оценили изменения в относительном количестве исследуемых белков после добавления AAV9-SURF1 на контрольные клетки и клетки, полученные от пациента. Нами были выявлены существенные компенсаторные изменения для фибробластов кожи пациента с мутацией SURF1.
Статья получена: 12.12.2025
Опубликовано online: 29.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.083
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 303
Оригинальное исследование Дифференцировка иПСК в предшественники эпителия роговицы в трехмерных условиях in vitro
Е. Б. Жигмитова, А. В. Косых, Н. Г. Гурская
Заболевания, связанные с дефицитом лимбальных стволовых клеток (хронические эрозии, рубцевание роговицы), требуют новых подходов регенеративной медицины. Цель исследования ― разработать протокол получения клеток-предшественников эпителия лимба и роговицы из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК). Использовали метод дифференцировки иПСК в направлении органоида глаза для получения трехмерных гетерогенных структур за три недели. Полученные органоиды содержат клетки-предшественники эпителия роговицы, экспрессирующие кератин 3 и коллаген 7, что подтверждает возможность генерации функционального эпителия in vitro. Протокол позволяет создавать изогенные пациент-специфичные линии для терапии лимбальной недостаточности и дистрофического буллезного эпидермолиза, в том числе после предварительного редактирования генома иПСК.
Статья получена: 25.11.2025
Опубликовано online: 27.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.070
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 346
Оригинальное исследование Противовирусная активность мРНК, кодирующих внутриклеточные scFv-фрагменты антител к консервативным эпитопам вируса гриппа
М. А. Плотникова, В. А. Олейник, С. А. Клотченко
Один из перспективных подходов к эффективной борьбе с гриппом — терапия с использованием моноклональных антител. Целью работы было провести оценку противовирусного действия внутриклеточных scFv-фрагментов антител, которые были трансфицированы в клетку в виде экзогенной мРНК, транслировались и были способны к высокоаффинному связыванию с вирусными антигенами непосредственно внутри клетки. В качестве вирусных мишеней были выбраны два белка вируса гриппа — гемагглютинин (антитело FI6) и нуклеопротеин (антитело 2/3). Каждый из scFv-фрагментов, кодируемых мРНК, был получен в двух формах: с сигнальным пептидом (SP) для секреции во внеклеточное пространство (scFv-SP) и без него (scFv-WO) — для внутриклеточного функционирования в цитозоле. Показана различная локализация этих белков в клетке: scFv-SP обнаруживались в областях, характерных для эндоплазматического ретикулума и комплекса Гольджи, в то время как scFv-WO были диффузно распределены по цитоплазме. Продемонстрировано, что мРНК, кодирующие scFv-FI6-SP и scFv-2/3-SP, а также мРНК, кодирующая scFv-2/3-WO, проявляли противовирусное действие в отношении вируса гриппа А на клеточной модели. Наибольшим противовирусным эффектом обладала мРНК scFv-FI6-SP: она приводила к снижению вирусной нагрузки относительно контроля примерно в 10 раз. В отношении вируса гриппа В обе мРНК, кодирующие scFv-2/3 (как с SP, так и без него), приводили к снижению вирусной нагрузки в среднем на 50% относительно контроля. Таким образом, показано, что внутриклеточные антитела обладают высоким противовирусным потенциалом и открывают возможности для воздействия на новые, перспективные вирусные мишени, которые ранее были недоступны для лекарственной терапии.
Статья получена: 27.11.2025
Опубликовано online: 26.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.077
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 583
Оригинальное исследование Этиологическая структура энтеровирусной инфекции у детей в Московском регионе
В. А. Полякова, Е. Е. Давыдова, А. Р. Лупарев, А. Д. Мацвай, Н. И. Гнусарева, М. А. Гордукова, Е. В. Галеева, А. А. Толоконцева, Г. А. Шипулин
Разнообразие и смена эпидемически значимых энтеровирусов (EV) приводит к постоянному изменению характера клинической картины и уровня заболеваемости. Цель работы — изучить случаи энтеровирусной инфекции (ЭВИ) у госпитализированных детей в период восстановление эпидемического процесса после пандемии COVID-19. Был собран клинический материал от 156 пациентов с ЭВИ различных возрастных групп. Проведено генотипирование вирусов методом секвенирования по Сэнгеру 5’UTR-VP2 и VP1 фрагментов генома. Выявлено 16 типов энтеровирусов, для одного удалось установить только вид (EV-C). Доминирующим типом EV оказался Коксаки CV-А6 — доля составила 80,6% (95% ДИ: 66,7–95,5) в 2021 г. и 36,1% (95% ДИ: 27,5–44,6) в 2022 г. Чаще всего CV-А6 вызывал кожные поражения (экзантемы и энтеровирусный везикулярный стоматит с экзантемой) и респираторные инфекции.  В 2022 г. наблюдался рост доли CV-A10  —  27,0%  (95% ДИ: 19,2–34,9) в 2022 г. против 6,4%  (95% ДИ: 0–15,1) в 2021 г., наиболее частым проявлением CV-A10 была герпетическая ангина. Самые тяжелые случаи ЭВИ наблюдались при ЕСНО 6 и далее — у четверых из 11 пациентов диагностирован менингит, у остальных проявлялись неврологические симптомы (менингизм, интенсивная головная боль, рвота) на фоне лихорадки. Отмечено большое количество случаев ЭВИ, сопровождающихся присутствием в биоматериале других инфекционных агентов, что может быть связано с ослаблением иммунитета при развитии ЭВИ, чаще всего выявляли вирус герпеса 6-го типа. Нуклеотидные последовательности охарактеризованных энтеровирусов размещены в базе NCBI для возможности последующего эпидемиологического анализа циркуляции энтеровирусов на территории РФ.
Статья получена: 24.11.2025
Опубликовано online: 25.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.082
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 473
Оригинальное исследование Однонуклеотидный вариант rs293795 OGG1 как генетический фактор риска диабетической нефропатии
Е. В. Семикина, Ю. Э. Азарова, С. А. Паничев, О. И. Басарева, Н. В. Джанчатова, Е. Ю. Алферова, А. В. Полоников
Диабетическая нефропатия (ДНФ) — грозное осложнение сахарного диабета 2-го типа (СД2), приводящее к ранней инвалидности и смертности от терминальной почечной недостаточности. В экспериментальных и клинических исследованиях показана ведущая роль индуцированных окислительным стрессом повреждений макромолекул, в том числе ДНК,  в развитии и прогрессировании ДНФ на фоне гипергликемии. Воcстановление этих повреждений служит сигналом для прекращения продолжающегося окислительного стресса. Ключевым ферментом репарации ДНК является 8-оксогуанин-ДНК-гликозилаза, кодируемая геном OGG1. Целью работы было провести анализ ассоциаций пяти полиморфных вариантов rs2072668, rs1052133, rs293795, rs2304277, rs6443265 гена OGG1 с риском развития ДНФ у пациентов с СД2. В исследование включен 1461 пациент с СД2, у 577 из которых диагностирована ДНФ. Генотипирование ДНК выполнено методом полимеразно-цепной реакции в реальном времени с использованием аллель-специфичных флуоресцентно-меченых зондов. Установлены ассоциации генотипа rs293795-G/G (OR = 1,97, 95% CI = 1,23-3,16; p = 0,007) и гаплотипа rs2072668C-rs1052133C-rs293795G-rs2304277G-rs6443265C (OR = 1,30, 95% CI = 1,06-1,60; p = 0,012) гена OGG1 с предрасположенностью к ДНФ на фоне СД2. Кроме того, установлено шесть диплотипов OGG1, ассоциированных с повышенным риском ДНФ и один диплотип, ассоциированный с пониженным риском ДНФ у пациентов с СД2. Таким образом, в проведенном исследовании представлены данные об ассоциации полиморфизма гена OGG1 с ДНФ, что  создает научный потенциал для дальнейших работ по изучению вклада нарушений системы репарации окислительных повреждений ДНК в развитие микрососудистых осложнений СД2.
Статья получена: 21.11.2025
Опубликовано online: 24.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.084
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 628
Мнение Фолликулярные T-клетки периферической крови: нарастающая сложность и первоочередные вопросы
И. Л. Григорова
Фолликулярные T-хелперы (Tfh) и фолликулярные регуляторные T-клетки (Tfr) играют ключевую роль в индукции и контроле B-клеточных ответов, включая формирование высокоаффинного гуморального иммунитета, переключение классов антител и предотвращение аутореактивности. Успешный ответ Tfh ассоциирован с эффективной выработкой нейтрализующих антител после вакцинации и эффективной элиминацией различных патогенов. В то же время дизрегуляция фолликулярных T-клеток часто связана с аутоиммунными заболеваниями и аллергическими реакциями. Нарушение их нормального функционирования связано также с формированием эктопических лимфоидных структур (ЭЛС), способствует развитию некоторых сосудистых патологий и имеет прогностическое значение при ряде онкологических заболеваний. В связи с этим анализ субпопуляций фолликулярных T-клеток в периферической крови человека все чаще используют при изучении механизмов различных заболеваний. В данной статье обсуждаются современные данные о разных типах фолликулярных T-клеток, их функциях и методах анализа субпопуляций фолликулярных T-клеток, циркулирующих в крови человека. Согласно мнению автора, центральными нерешенными вопросами остаются точное фенотипическое определение циркулирующих субпопуляций Tfr-клеток, выяснение иерархии их развития от клеток-предшественников до зрелых регуляторных форм и установление их анатомических ниш дифференцировки. Накопление необходимых сведений и их преобразование в надежные сигнатуры для клеток периферической крови необходимо для развития подходов прогнозирования исхода заболевания у отдельных пациентов и разработки персонализированных терапевтических подходов.
Статья получена: 10.12.2025
Опубликовано online: 23.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.076
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 563
Метод Детекция Salmonella enterica петлевой изотермальной амплификацией ДНК с использованием флуоресцентно меченого петлевого праймера
Д. В. Шамовская, М. А. Гордукова, М. А. Смертина, Е. В. Галеева, И. П. Оскорбин, Е. А. Храпов, У. А. Боярских, М. Л. Филипенко
Сальмонеллез остается одной из ведущих причин бактериальных кишечных инфекций человека и животных. Молекулярная диагностика радикально трансформировала диагностический ландшафт сальмонеллезной инфекции, однако остается времени- и ресурсозатратной. Изотермическая амплификация ДНК, например, петлевая изотермальная амплификация (LAMP), выполняемая при постоянной температуре, является основой разработки быстрых диагностических тестов, которые могут быть адаптированы к формату point-of-care (PoC) и выполнены в условиях ограниченных ресурсов и вдали от централизованных лабораторий. Целью исследования было разработать и валидировать новый метод детекции Salmonella enterica в образцах кала человека методом LAMP, в котором мониторинг результатов амплификации достигается с помощью петлевого флуоресцентномеченного праймера, несущего также внутренний гаситель флуоресценции. Предложенный метод имеет предел обнаружения (LoD 95%) 250 копий на реакцию, чувствительность 86,84% (95% ДИ: 71,91–95,59%) и специфичность — 96,49% (95% ДИ: 87,89–99,57%) относительно qPCR, а также показал большую устойчивость к ингибиторам амплификации ДНК в образцах фекалий. Введение разных флуоресцентных меток в петлевые праймеры для FLP-LAMP с разными мишенями потенциально обеспечивает возможность мультиплексирования и одновременного выявления нескольких патогенов, что увеличивает диагностические возможности изотермальной амплификации.
Статья получена: 23.11.2025
Опубликовано online: 22.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.066
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 302
Оригинальное исследование Экспрессия эктонуклеотидаз CD39 и CD73 в крови больных разными формами метаболически ассоциированной жировой болезни печени
Г. А. Жулай, И. В. Курбатова, О. П. Дуданова
Экспериментальные исследования показали защитную роль экспрессии эктонуклеотидаз, в частности CD39 и CD73, в ограничении воспаления при патологии печени, но их экспрессия у больных метаболически ассоциированной жировой болезнью печени (МАЖБП) мало изучена. Целью работы было оценить уровни мРНК генов ENTPD1 и NT5E, кодирующих CD39 и CD73 соответственно, у пациентов с разными формами МАЖБП: стеатозом печени (СП) и метаболически ассоциированным стеатогепатитом (МАСГ), а также оценить содержание CD39- и CD73-экспрессирующих клеток при активации иммунных клеток in vitro. Обследовали 29 здоровых доноров и 56 пациентов с МАЖБП. Проводили оценку уровня мРНК генов ENTPD1 и NT5E, уровня провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ФНОα), уровня фрагментированного цитокератина-18 и содержания CD39+ клеток в крови обследованных людей. Кроме того, оценивали влияние активации иммунных клеток на содержание CD39+ и CD73+-клеток у пациентов с МАСГ и здоровых доноров in vitro. Установлено, что экспрессия гена ENTPD1 (p = 0,007 при сравнении c контролем; p = 0,010 — с СП) и содержание CD39+-клеток в популяции моноцитов (p = 0,004 — c контролем; p = 0,003 — с СП) и лимфоцитов (p = 0,034 — с контролем) снижены при МАСГ относительно групп контроля и СП. Показано, что активация клеток пациентов с МАСГ увеличивает уровень CD39+-лимфоцитов, но не CD14+-моноцитов, а CD73+-клеток — среди лимфоцитов и CD14+-моноцитов. Таким образом, представляется перспективным дальнейшее изучение CD39 и CD73 в механизмах прогрессирования МАЖБП.
Статья получена: 11.11.2025
Опубликовано online: 21.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.079
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 370