Оригинальное исследование Применение гистохимических красителей для флуоресцентного выявления амилоидных скоплений в тканях человека
В. В. Гусельникова, Д. А. Суфиева, Д. Л. Цыба, Д. Э. Коржевский
В последнее время метод флуоресцентной микроскопии приобретает все большее распространение, открывая новые возможности для решения целого ряда задач экспериментальной биологии и медицины. Целью настоящей работы было оценить эффективность применения метода флуоресцентной микроскопии для идентификации амилоидных скоплений в тканях человека. В качестве материала для исследования были использованы фрагменты миокарда (n = 12) и коры головного мозга (n = 8) людей обоих полов в возрасте от 60 до 98 лет с верифицированным амилоидозом. Препараты окрашивали с применением 11 разных гистохимических красителей с последующим анализом методами световой и флуоресцентной микроскопии. Проведенные качественный и количественный анализ показали, что тиофлавин Т является наиболее эффективным красителем для флуоресцентного выявления β- и транстиретинового амилоида в тканях человека. Методика окраски конго красным обладает высокой эффективностью в отношении транстиретинового амилоидоза, но плохо подходит для идентификации β-амилоидных бляшек. Установлено, что способность конго красного флуоресцировать при связывании с амилоидными фибриллами может быть использована для верификации амилоидных скоплений вместо традиционной поляризационной микроскопии. Впервые отмечено, что краситель метиловый фиолетовый обладает способностью специфично связываться с β-амилоидными скоплениями с формированием флуоресцирующего комплекса, одновременно подавляя автофлуоресценцию нервной ткани. Это делает методику окраски метиловым фиолетовым перспективной для диагностики патологии альцгеймеровского типа.
Статья получена: 12.07.2021
Опубликовано online: 31.07.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.034
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 31
Оригинальное исследование Оценка жизнеспособности SARS-CoV-2 на экспериментальных поверхностях во времени
М. А. Никифорова, А. Э. Синявин, Е. В. Шидловская, Н. А. Кузнецова, В. А. Гущин
Заражение вирусом SARS-CoV-2 происходит не только при непосредственном контакте с инфицированным человеком, но и через поверхности, с которыми соприкасался больной. Вопрос сохранения инфекционного вируса, способного заразить спустя время, остается открытым. Целью исследования было изучить жизнеспособность SARS-CoV-2 на различных модельных поверхностях с течением времени. В качестве модельных материалов были использованы керамическая плитка, металл (алюминиевая фольга), дерево (ДСП), пластик и ткань (полотенце). В ходе исследования проводили оценку наличия РНК SARS-CoV-2 методом количественной ОТ-ПЦР. Жизнеспособность вируса определяли на клеточной линии 293T/ACE2. Показано, что РНК SARS-CoV-2 продолжала детектироваться спустя 360 мин, но значительное снижение РНК на 1 log10 копий/мл обнаружено после контакта вируса с тканью (полотенцем). Жизнеспособный вирус практически полностью отсутствовал через 120 мин. На жизнеспособность вируса значительно влияет тип экспериментальной поверхности.
Статья получена: 25.06.2021
Опубликовано online: 13.07.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.033
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 167
Оригинальное исследование Изменение аминокислотного профиля плазмы пуповинной крови и амниотической жидкости от матерей с COVID-19
Н. А. Ломова, В. В. Чаговец, Е. Л. Долгополова, А. В. Новоселова, У. Л. Петрова, Р. Г. Шмаков, В. Е. Франкевич
Новорожденные от матерей с COVID-19 подвержены риску заражения, могут иметь высокий риск осложнений в раннем неонатальном периоде и отдаленные последствия для здоровья. Цель исследования — определить аминокислотный профиль пуповинной плазмы и амниотической жидкости пациентов с COVID-19 для анализа связи влияния перенесенного антенатально COVID-19 на изменения в метаболоме «внутриутробного пациента». Для оценки уровня 31 аминокислоты в образцах амниотической жидкости и пуповинной плазмы беременных с COVID-19, полученных при родоразрешении, применяли высокоэффективную жидкостную хроматографию с масс-спектрометрической детекцией. Основную группу составили 29 пациенток с подтвержденным диагнозом COVID-19; контрольную — 17 соматически здоровых женщин с беременностью без осложнений. Концентрации восьми аминокислот в амниотической жидкости статистически значимо (p < 0,05) различались между исследуемыми группами. Разработаны модели логистической регрессии (чувствительность 0,84; специфичность — 1), позволяющие определять, что анализируемая амниотическая жидкость взята от пациенток, перенесших COVID-19. В плазме пуповинной крови значимые различия обнаружены для четырех аминокислот. Построенные модели позволяют выявлять принадлежность исследуемой пуповинной плазмы пациентам группы контроля или COVID-19 (чувствительность и специфичность — 1). Одновременно в двух точках (амниотическая жидкость и пуповинная плазма), комплексно отображающих метаболом плода, были выявлены и статистически значимо отличались при COVID-19 три аминокислоты. Воздействие вируса на организм приводит к выраженным изменениям в метаболоме амниотической жидкости и пуповинной плазмы плода, что может привести к нарушению программирования производства белковых молекул, но не проявляется при рождении.
Статья получена: 24.05.2021
Опубликовано online: 29.06.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.032
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 190
Оригинальное исследование Производное бензимидазола как противоопухолевое средство в отношении экспериментальной злокачественной опухоли легкого
Е. Ф. Комарова, О. Н. Жуковская, Е. А. Лукбанова, М. А. Енгибарян, Л. Н. Ващенко, Д. А. Харагезов, В. В. Позднякова, Н. Д. Ушакова, Ю. С. Шатова, Ю. В. Пржедецкий
Значительное число применяемых в клинике противоопухолевых средств недостаточно эффективно и безопасно, что обусловливает поиск новых лекарственных субстанций. Цель работы — изучить влияние дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-a]бензимидазола (РУ185) на рост и метастазирование перевиваемой экспериментальной опухоли легкого Льюис (LLC). LLC прививали 55 мышам-самкам C57/Bl6 массой 18–20 г подкожно. Внутрижелудочное (0,5 мл в сут.) введение препарата начинали через 48 ч после перевивки опухоли 1 раз в сутки 10 дней в разовых дозах 50, 220, 500 мг/кг (группы 1, 2 и 3 соответственно). Мышам контрольной группы вводили физиологический раствор. При внутрижелудочном введении субстанции происходило достоверное увеличение продолжительности жизни животных только в группе 2 (162,3%), а также значимое уменьшение объемов опухоли уже на 1-е сутки после окончания лечения. На 7-е и 14-е сутки от момента окончания лечения размеры опухоли в группах 2 и 3 были снижены по сравнению с контрольной группой в 3,4 и 1,3 раза (на 7-е сутки) и в 2,2 и 1,3 раза (на 14-е сутки) соответственно (р < 0,05). Индекс торможения роста опухоли сохранился в группе 2 к 14-м суткам после окончания лечения и у 20% животных отмечен регресс опухоли. Число метастазов в легких в группах 1 и 2 было снижено относительно контроля в 2,6 и 3,1 раза соответственно, а индекс ингибирования метастазирования составил 68,1 и 80% соответственно. Исследованный РУ-185 оказывает противоопухолевое действие, что выражено в увеличении продолжительности жизни животных, снижении скорости роста первичной опухоли, а также частоты развития и количества легочных метастазов экспериментальной эпидермоидной карциномы легкого Льюис мышей.
Статья получена: 01.06.2021
Опубликовано online: 25.06.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.031
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 203
Оригинальное исследование Изменение концентрации сфинголипидов в плазме крови на фоне гиполипидемической терапии у пациентов с ранним атеросклерозом
А. А. Рогожина, А. В. Алесенко, И. Н. Курочкин, Л. О. Минушкина, У. А. Гутнер, М. А. Шупик, О. А. Малошицкая, А. Т. Лебедев, Д. А. Затейщиков
Гиполипидемические препараты влияют на стандартные липопротеины, но как изменяются при лечении другие липиды плазмы — не известно. Целью работы было оценить динамику холестерина (ХС), липопротеинов высокой и низкой плотности (ЛВП и ЛНП), триглицеридов (ТГ) и сфинголипидов у пациентов с преждевременно развившейся ишемической болезнью сердца, атеросклерозом и гиперхолистеринемией на фоне гиполипидемической терапии. В исследование включено 18 больных  (средний возраст 53 ± 6,7 года): в 1-й группе 6 пациентов получили стартовые дозы статинов; во 2-ю группу вошли 6 пациентов, не достигших на фоне стартовой терапии статинами целевых уровней ЛНП и принимавших увеличенные дозы статинов; 7 пациентов 3-й группы не достигли целевых уровней ЛНП на фоне терапии максимально переносимыми дозами статинов и эзетимиба и получали алирокумаб. Исследование уровня сфинголипидов проводили методом масс-спектрометрии. В 1-й группе отмечено снижение уровня церамида Cer 14:1 (p = 0,046) и сфингомиелинов SM 22:1, SM 22:0, SM 24:0 (p = 0,028). Уровни общего ХС (ОХС), ХС ЛНП, ХС ЛВП и ТГ  существенно не изменились. Во 2-й группе отмечено достоверное снижение уровня ОХC (p = 0,028), ЛНП (p = 0,043), сфингомиелинов SM 18:1, SM 24:1 и SM 26:1, церамида Cer 16:1 (p = 0,028). Cer 22:1 достоверно увеличился (p = 0,028). В 3-й группе ОХС снизился на 36,2%, ХС  ЛНП (p = 0,018) — на 60,1% от исходных значений (ΔХС ЛНП = –2,67 ± 3,12), выявлено повышение уровня церамида Cer 22:1 (p = 0,028). Показано, что снижение содержания сфингомиелинов происходит на фоне терапии статинами и коррелирует со снижением уровня ХС ЛНП. Значимой динамики церамидов и церамидного риска на фоне терапии статинами не зарегистрировано, однако при добавлении к терапии ингибитора PCSK9 произошло уменьшение соотношения Cer 16:0/24:0.
Статья получена: 24.05.2021
Опубликовано online: 23.06.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.030
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 250
Обзор Персистенция коронавируса SARS-CoV-2 в телах умерших и меры защиты от инфицирования
А. И. Щеголев, У. Н. Туманова
Представлен анализ данных литературы о времени сохранения SARS-CoV-2 в телах умерших, путях заражения от трупов больных с COVID-19 и необходимых способах защиты от такого заражения. Показано, что для SARS-CoV-2 характерен достаточно длительный период персистенции в тканях и жидкостях тел умерших больных с COVID-19, а также на различных поверхностях, при этом наиболее долго вирус сохраняется на стальных и пластиковых изделиях, находившихся в соприкосновении с трупом. Согласно проанализированным данным, вскрытие тел умерших больных с COVID-19 должно проходить только в специально перепрофилированных отделениях с обязательным соблюдением мер, обеспечивающих биологическую безопасность, сотрудники патологоанатомических отделений и бюро судебно-медицинской экспертизы обязаны соблюдать при этом меры индивидуальной и коллективной защиты.
Статья получена: 31.05.2021
Опубликовано online: 18.06.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.029
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 223
Метод Исследование молекулярно-клеточных характеристик аутотрансплантатов нижней челюсти с помощью метода спектроскопии комбинационного рассеяния
Г. В. Максимов, Т. И. Сашкина, Д. К. Фасхутдинов, О. В. Слатинская, И. В. Салдусова, О. В. Зайченко
В настоящее время большой интерес представляют биофизические иссследования, результаты которых важны для формирования методологии диагностики состояния ткани и клеток в клинической практике. Целью данной работы было продиагностировать изменения состава и конформации молекул клеток и ткани нижней челюсти пациента с помощью оптического неинвазивного метода (спектроскопия комбинационного рассеяния (КР). Данный методический подход предложен для повывшения информативности и эффективности исследования состава аутотрансплантатов, полученных для аугментации альвеолярных отростков при дефиците костной ткани (планируемая костная пластика).  В исследовании использовали образцы костной ткани троих пациентов в возрасте 51–73 лет, двоих мужчин и одной женщины. В костной ткани обнаружены КР-сигналы, свидетельствующие о наличии фосфатных групп и карбонат-ионов (типа СО3–2) минеральных компонентов кости. Маркерами молекул околокостной ткани могут быть полосы, которые свидетельствуют о наличии коллагена, гемоглобина эритроцитов, белков (C–N-связи), липидов (С–Н-групп жирных кислот и фосфатных групп фосфолипидов), а также их ОН-групп. Показана принципиальная возможность исследования отдельных клеток аутотрансплантатов с помощью маркеров, свидетельствующих о наличии коллагена, гемоглобина, белков и липидов (С–Н-групп жирных кислот липидов; фосфатных групп фосфолипидов), и их ОН-групп. По мнению авторов, результаты могут служить основой для формирования новой методологии диагностики костных аутотрансплантатов с помощью совмещения КР-спектроскопии и световодов.
Статья получена: 13.05.2021
Опубликовано online: 17.06.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.028
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 159
Оригинальное исследование Структурно-функциональные биомаркеры эффективности навигационной ритмической транскраниальной магнитной стимуляции в лечении невралгии тройничного нерва
А. Г. Пойдашева, Д. О. Синицын, И. С. Бакулин, Н. А. Супонева, М. А. Пирадов
У пациентов с невралгией тройничного нерва (НТН), не отвечающих на фармакотерапию, в качестве альтернативы можно применять ритмическую транскраниальную магнитную стимуляцию (рТМС). Однако эффект рТМС вариабелен. Целью исследования был поиск нейровизуализационных биомаркеров клинической эффективности навигационной рТМС. Семнадцати пациентам с НТН (14 женщин; медиана возраста — 56 лет) проведено 10 сессий высокочастотной рТМС моторной коры полушария, контрлатерального локализации боли. Проводили анализ корреляций функциональной коннективности (ФК) и объема серого вещества головного мозга (СВГМ) со снижением интенсивности боли. Показана положительная корреляция между снижением средней интенсивности боли и объемом СВГМ в области хвостатых ядер (p(unc) = 0,03), мозжечка билатерально (p(unc) = 0,002) и контрлатеральной постцентральной извилине (p(unc) = 0,005); между снижением максимальной интенсивности боли и объемом СВГМ в области хвостатого ядра контрлатерально боли (p(unc) = 0,04) и мозжечка ипсилатерально (p(unc) = 0,03). Продемонстрирована положительная связь снижения средней интенсивности боли с ФК между таламусом (контрлатерально локализации боли) и ипсилатеральной постцентральной извилиной и покрышкой островка (p(FWE) = 0,018), между поясной корой и передними отделами поясной коры ипсилатерально боли (p(FWE) = 0,017), между контрлатеральной паратерминальной извилиной и мозжечком ипсилатерально (p(FWE) = 0,018); отрицательная корреляция для ФК между контрлатеральной скорлупой и затылочными долями обоих полушарий (p(FWE) = 0,001). Полученные результаты могут стать предпосылкой к разработке индивидуальных предикторов эффективности рТМС у пациентов с хроническими болевыми синдромами.
Статья получена: 18.05.2021
Опубликовано online: 12.06.2021
DOI: 10.24075/vrgmu.2021.027
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 143