Оригинальное исследование Содержание CD4+-клеток с экспрессией эктонуклеотидаз CD39/CD73 у детей с воспалительными заболеваниями кишечника
Т. В. Радыгина, С. В. Петричук, Д. Г. Купцова, А. С. Потапов, А. С. Илларионов, А. О. Анушенко, О. В. Курбатова, Е. Л. Семикина
Изучение регуляции иммунного ответа на фоне терапии блокаторами TNF при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК) у детей остается актуальной проблемой. Целью исследования было изучить экспрессию CD39/CD73 в субпопуляциях лимфоцитов (регуляторных Т-клеток (Treg) — CD4+CD127lowCD25high; активированных Т-клеток (Tact) — CD4+CD25+CD127high; Th17-лимфоцитов — CD4+CD161+CD3+) периферической крови у детей с ВЗК (с болезнью Крона (БК), n = 34; с язвенным колитом — n = 33), принимавших блокаторы TNF,  и у 45 условно здоровых детей. Результаты представлены в виде медианы (Me) и квартилей (Q25–Q75). С помощью многоцветной цитометрии показано, что у детей с ВЗК наибольшее количество CD39+ выявлено в популяции Treg — 31% (15–38), наименьшее — в Tact 4% (1–7), а наибольшее количество CD73+ — в Tact 13% (8–21). Соотношение экспрессии CD39 и CD73 у пациентов с ВЗК, так же как и в группе сравнения, зависело от популяции клеток. Экспрессия CD39 в Treg, Tact и Th17 у пациентов с ВЗК не зависела от возраста ребенка. В группе детей с БК в обострении относительно группы сравнения получено снижение экспрессии CD39 в Treg (12% (9–23) против 35% (28–39), р = 0,000001). У детей в ремиссии БК экспрессия CD39 в Treg достоверно выше, чем при обострении (31% (27–40) против 12% (9–23); р = 0,000094)). Между группой пациентов в ремиссии и группой сравнения достоверных различий выявлено не было, за исключением снижения экспрессии CD73 в Treg при БК. Полученные результаты показывают, что экспрессия CD39 и CD73 в популяциях CD4+-лимфоцитов в значительной степени связана с течением заболевания, с обострением или ремиссией, и, соответственно, с эффективностью проводимой анти-TNF-терапии.
Статья получена: 22.06.2022
Опубликовано online: 31.07.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.039
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 105
Обзор Новейшие достижения в диагностике гипоксической ишемической энцефалопатии новорожденных
Н. Л. Стародубцева, Ч. М. Эльдаров, А. Р. Киртбая, Е. Н. Балашова, А. С. Грызунова, О. В. Ионов, В. В. Зубков, Д. Н. Силачев
Основной проблемой при гипоксической ишемической энцефалопатии новорожденных (ГИЭ) являются ранняя дифференциальная диагностика, прогнозирование и классификация заболевания, от результатов которых напрямую зависит дальнейший метод терапии, в частности, назначение терапевтической гипотермии. Существует прямая зависимость времени начала терапевтической гипотермии и долгосрочного неврологического исхода: чем раньше начата терапевтическая гипотермия, тем лучше прогноз для пациента. В обзоре проанализированы последние достижения в области системной биологии, направленные на раннюю дифференциальную диагностику ГИЭ в дополнение к клиническим: применение протеомных и метаболомных биомаркеров, а также внеклеточных везикул, для которых установлена связь с тяжестью ГИЭ и прогнозом исхода. Выявление селективных маркеров повреждения головного мозга у новорожденных в первые часы жизни затруднено из-за системного влияния гипоксии на весь организм. Особый интерес представляют метаболомные исследования крови новорожденных с использованием хромато-масс-спектрометрии, позволяющие анализировать сотни метаболитов на небольшом количестве биологического образца и определять паттерны, соответствующие повреждению мозга, что будет способствовать более точной и своевременной постановке диагноза ГИЭ для назначения терапевтической гипотермии.
Статья получена: 06.07.2022
Опубликовано online: 29.07.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.038
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 121
Оригинальное исследование In silico-моделирование в оптимизации алгоритмов фармакокинетических исследований [25MG2+] порфирин-фуллереновых наночастиц
В. В. Фурсов, Д. И. Зинченко, Д. Д. Наместникова, Д. А. Кузнецов
Поиск эффективных фармакофоров для лечения ишемического инсульта актуален в связи с высокой распространенностью и смертностью от этого заболевания. Оптимизация сценариев доклинических исследований перспективных нейопротекторов средствами математического моделирования с использованием информационно-компьютерных технологий представляет собой отдельную актуальную задачу. Целью исследования было разработать препаратоориентированную математическую модель в виде системы ОДУ, реализовать ее in silico в виде программного кода на языке MATLAB и адаптировать к экспериментальным данным, полученным in vivo на крысах. В работе проведено исследование in silico фармакокинетики порфиринфуллереновых нанокатионитов, высвобождающих 25Mg2+ типа РМС16. Разработана пятикомпартментная математическая модель, которую можно использовать для прогнозирования распределения наночастиц в органах и тканях, расчета оптимальных дозировок, периодичности введения и т. д. Представлены расчетные кривые распределения РМС16 в мозге, печени и сердце. Достигнуто хорошее соответствие полученных in silico фармакокинетических кривых c результатами экспериментов in vivo на крысах, у которых моделировали инсульт. Доказано преодоление наночастицами РМС16 гематоэнцефалического барьера. 
Статья получена: 05.07.2022
Опубликовано online: 22.07.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.037
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 161
Оригинальное исследование Новая стратегия поиска гормональной терапии пролиферативных процессов эндометрия у пациенток в постменопаузе
Г. М. Савельева, В. Г. Бреусенко, Е. Н. Карева, Г. Н. Голухов, Д. С. Гуторова, А. В. Овчинникова, Т. Н. Ивановская, К. В. Щербатюк
Причины неэффективности гормональной терапии пролиферативных процессов эндометрия (ППЭ) в постменопаузе остаются неясными. Влияние гормональной терапии ППЭ на активность иммунной системы достаточно не изучено. Целью работы было на основании результатов исследования экспрессии генов рецепторов эстрадиола и прогестерона в ткани эндометрия, клетках мононуклеарной фракции периферической крови (МНФК) определить целесообразность и возможность назначения гормональной терапии ППЭ у пациенток в постменопаузе. Обследовали 92 пациентки в постменопаузе с ППЭ: с железисто-фиброзными полипами — 37; с гиперплазией без атипии (ГЭ) — 7; атипической гиперплазией (АГЭ) — 8; умереннодифференцированной аденокарциномой — 31; высокодифференцированной аденокарциномой — 9. В МНФК и образцах ткани эндометрия исследовали экспрессию ER⍺, ERß, mER, PRA, PRB, mPR, PGRmC1 методом РТ-ПЦР. В эксперименте определяли изменение рецепторного профиля МНФК после инкубации клеток с прогестероном и мифепристоном у пациенток с полипами эндометрия и здоровых женщин. При анализе результатов в ткани ГЭ обнаружен высокий уровень ERα, ERβ, PRA, PRB, mPR, PGRmC1. В МНФК при АГЭ выявлен высокий уровень mER, ER⍺, PRA. Это может свидетельствовать о подавлении функции моноцитов, макрофагов, Т-лимфоцитов и натуральных киллеров. При аденокарциноме эндометрия рецепторный транскриптом в МНФК не нарушен, что может означать развитие автономности опухоли. В исследовании in vitro мифепристон снижает экспрессию ER⍺, ERß, mPR, PGRmC1, PRA, PRB в МНФК у пациенток с полипами эндометрия. На наш взгляд, это нивелирует негативное действие половых стероидных гормонов на иммунокомпетентные клетки.
Статья получена: 18.05.2022
Опубликовано online: 28.06.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.036
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 231
Оригинальное исследование Белок InlB, секретируемый Listeria monocytogenes, контролирует взаимодействие возбудителя с макрофагами
Я. М. Чаленко, М. М. Абдулкадиева, П. В. Сафарова, Е. В. Калинин, Д. А. Слонова, С. А. Ермолаева
Способность инфицировать и размножаться в непрофессиональных фагоцитах лежит в основе вирулентности грамположительной бактерии Listeria monocytogenes. В процессе протекания инфекции захваченные клетками системы мононуклеарных фагоцитов листерии устойчивы к перевариванию и могут размножаться внутри макрофагов. Один из ключевых факторов патогенности L. monocytogenes белок интерналин В (InlB) взаимодействует с рецепторами клеток млекопитающих c-Met и gC1qR. При его взаимодействии с рецепторами, находящимися на поверхности эпителиальных клеток, происходит активация рецепторов, перестройки цитоскелета и, как результат, активная инвазия бактерий внутрь непрофессиональных фагоцитов. На сегодняшний день ничего неизвестно о влиянии InlB на взаимодействие L. monocytogenes с макрофагами, в то время как оба таргетных рецептора экспрессируются на поверхности макрофагов и вовлечены в развитие иммунных реакций. Целью работы было определить потенциальное влияние InlB на взаимодействие L. monocytogenes с макрофагами. Установлено, что 1) наличие InlB в 3,5 раза достоверно улучшает поглощение L. monocytogenes макрофагами; 2) через 24 ч штаммы EGDe∆inlB, EGDe и EGDe∆inlB::pInlB увеличили свою численность внутри макрофагов в 182,5 ± 16,7, 96 ± 12 и 13,3 ± 3 раз соответственно; 3) Штамм EGDe∆inlB::pInlB, комплементированный плазмидной копией гена inlB, продуцировал InlB в 3,3 раза лучше, чем штамм EGDe. Таким образом мы предполагаем, что InlB влияет на выживаемость листерий внутри макрофагов. Полученные результаты углубляют понимание процессов взаимодействия возбудителя с макрофагами.
Статья получена: 11.05.2022
Опубликовано online: 24.06.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.034
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 459
Оригинальное исследование Выраженность когнитивных и неврологических нарушений у крыс после ишемического инсульта на фоне применения ксенона 0,5 МАК
И. А. Крюков, А. В. Ершов, Р. А. Черпаков, О. А. Гребенчиков
У подавляющего числа пациентов, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения, выявляются остаточные явления, из них у 50% — когнитивные нарушения, ограничивающие самообслуживание в быту, трудовую деятельность и социальную адаптацию в целом и приводящие к инвалидности даже при отсутствии значительных двигательных нарушений. Целью исследования было подобрать наиболее эффективную продолжительность ингаляции ксенона с 0,5 МАК (максимальной альвеолярной концентрацией) для снижения выраженности неврологических и когнитивных нарушений при экспериментальном инсульте. На 70 крысах смоделирована фокальная ишемия-реперфузия по методу Лонга с последующей ингаляцией ксенона 0,5 МАК в течение 30, 60 или 120 мин. Неврологический дефицит оценивали с помощью серии из семи тестов «Постановка конечности на опору», когнитивные функции — тестом «Водный лабиринт Морриса». Экспозиция ксенона 0,5 МАК в течение 30 мин приводила к росту числа баллов в тесте «Постановка конечности на опору» на 40% (р = 0,055) и уменьшению латентного времени в тесте «Водный лабиринт Морриса» на 17,6% (р = 0,08) по сравнению с контрольной группой, экспозиция в течение 60 мин — в 2 раза (р = 0,01) и на 44,4% (р = 0,04), в течение 120 мин — тоже в 2 раза (р = 0,01) в обоих тестах соответственно. Сделан вывод, что ингаляция ксенона 0,5 МАК при экспозиции 30 мин не приводит к значительному улучшению состояния животных и их способности к обучению, о чем свидетельствует отсутствие статистически значимых различий. Экспозиция же ксенона в течение 60 мин значительно уменьшает неврологический и когнитивный дефицит в группе исследования, а увеличение времени экспозиции ксенона до 120 мин оказывает сопоставимый эффект.
Статья получена: 21.05.2022
Опубликовано online: 24.06.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.035
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 188
Оригинальное исследование Сравнительный анализ эффективности общедоступных методов трансфекции модельных клеточных линий для задач биотехнологии
П. О. Воробьев, Д. В. Кочетков, К. В. Василенко, А. В. Липатова
Краткосрочная экспрессия генов является одним из самых широко используемых методов в молекулярной биологии, как в исследовательских проектах, так и для решения задач биотехнологической промышленности. Несмотря на то что существующие коммерческие трансфекционные агенты позволяют добиться эффективной трансфекции и высокой экспрессии целевых генов в клетках, масштабирование производственного процесса часто затруднительно из-за высокой стоимости таких агентов. Хорошо описанные методы катионной или кальций-фосфатной трансфекции доступны и дают воспроизводимые результаты при значительно меньшей себестоимости. Целью исследования было проверить методы кальций-фосфатной трансфекции, катионной трансфекции (PEI) и коммерчески доступного реагента TurboFect на эффективность монотрансфекции и котрансфекции на панели широко используемых клеточных линий, таких как HEK293T, HUH7, BHK-21, CHO, MRC5. Эффективность трансфекции плазмидными конструкциями, несущими различные флуоресцентные белки, оценивали путем проведения проточной цитофлуориметрии. Среди всех методов кальций-фосфатная трансфекция позволяет добиться максимально эффективной доставки плазмидной ДНК во всех клеточных линиях, использованных в нашем исследовании, кроме BHK21 — для нее катионная трансфекция с использованием PEI оказалась эффективнее, и сопоставима по эффективности с кальций-фосфатным методом в клеточных линиях CHO.
Статья получена: 22.04.2022
Опубликовано online: 23.06.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.031
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 195
Оригинальное исследование Изучение эффектов вариативности потенциалов мозга человека в интерфейсе мозг–компьютер на волне P300
И. П. Ганин, А. Я. Каплан
Технология интерфейс мозг–компьютер на волне P300 (ИМК-P300) позволяет пользователю выбирать команды при фокусировании на них внимания. Это возможно за счет регистрации в ЭЭГ потенциалов, связанных с событиями (ПСС), возникающих в ответ на многократно повторяемые внешние стимулы. Традиционно при выделении и анализе ПСС полагают, что реакции на отдельные стимулы идентичны, хотя в нейрофизиологии известен феномен вариативности во времени возникновения таких реакций. Поэтому есть предпосылки считать, что непринятие во внимание вариативности ПСС в ряде случаев может снижать наблюдаемые в эксперименте эффекты, а также точность работы ИМК. Целью работы было изучить эффекты вариативности ЭЭГ-реакций внимания пользователя к стимульным командам в ИМК-P300 и выявить возможности учета этих эффектов при классификации команд в интерфейсе. Здоровым испытуемым 21–22 лет (n = 12) необходимо было реагировать на целевые стимулы в модифицированной нами стимульной матрице ИМК-P300, которая могла двигаться с различными параметрами в пределах рабочего поля. В исследовании показано, что эффект вариативности ПСС присутствует в технологии ИМК-P300, а использованный метод коррекции латентности пиков в единичных реакциях привел к увеличению амплитуды компонентов ПСС в 1,5–2 раза, а также повышению точности классификации с 71–78% до 92–95% (p < 0,0005). Вариативность и повышение классификации после коррекции латентности были выше в более требовательном по ресурсам внимания режиме с наибольшей скоростью движения стимульной матрицы. В целом результаты показывают важность учета вариативности компонентов ПСС в ИМК-P300 для создания более эффективных систем нейроуправления.
Статья получена: 04.05.2022
Опубликовано online: 21.06.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.033
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 206