Инфекционная безопасность донорской крови определяет предупреждение передачи гемоконтактных инфекций от донора реципиенту. Скрининговая диагностика вирусного гепатита B (hepatitis B virus, HBV) привела к значительному снижению заболеваемости этой инфекцией [1]. Однако, несмотря на доступность чувствительных тест-систем для обнаружения поверхностного антигена HBV (HBsAg), по-прежнему имеют место случаи посттрансфузионного гепатита В [2, 3]. Это связано с тем, что вирус может длительное время находиться в латентном состоянии в ткани печени, а в некоторых случаях — и в крови HBsAg-отрицательных пациентов [4, 5]. Поэтому оккультный (латентный) гепатит В представляет опасность при донорстве крови и трансплантации органов [6]. Описаны случаи обнаружения ДНК HBV у реципиентов, получавших HBs-негативную кровь от доноров, имевших скрытую HBV-инфекцию. Таким образом, латентный гепатит B представляет реальную угрозу распространения вируса в популяции и его активации в организме человека в условиях иммуносупрессии [5].

Целью нашего исследования явилась диагностика скрытой формы HBV-инфекции, выявленной при тестировании донорской крови.

МАТЕРИАЛЫ  И МЕТОДЫ

Исследование провели на базе Республиканского центра крови (РЦК) в г. Казани. Были проанализированы данные 61 155 донора, полученные в 2010–2014 гг.: результаты тестирования на HBsAg, антитела к ядерному антигену суммарные (anti-HBc-total), иммуноглобулины класса M к ядерному антигену (anti-HBc IgM), ДНК HBV.

Определение HBsAg, anti-HBc-total и anti-HBc IgM проводили методом иммуноферментного анализа с использованием коммерческих реагентов фирмы «Вектор-Бест» (Россия) с чувствительностью 0,01 ME/мл. ДНК HBV выявляли методом полимеразной цепной реакции в «реальном времени» на приборе COBAS S 201 (Roshe, Швейцария) c использованием набора реагентов Сobas TaqScreen MPX Test, v2.0 и CobasTaqScreen MPX ControlKit, v.2.0 (Roche).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

HBsAg — скрининговый маркер HBV-инфекции. Регистрация данного маркера при тестировании донорской крови подтверждает наличие активных источников инфекции. Лиц, в крови которых обнаруживают HBsAg, отводят от донорства, в отношении них проводят необходимые противоэпидемические мероприятия. В казанском РЦК в 2010–2014 гг. было зафиксировано от 6 до 25 случаев выявления маркера в год (рис. 1), при этом отмечена тенденция к снижению числа таких случаев.

Положительные результаты на anti-HBc-total регистрировали ежегодно в 3,5–6,9 % случаев, т е. кровь от 400 до 900 доноров не могла быть использована в дальнейшем (рис. 2). При выявлении этого маркера проводится также дополнительная диагностика на anti-HBc IgM. В 2010–2014 гг. иммуноглобулины класса M обнаруживались в 2,5–9,9 % образцов крови доноров с признаками присутствия в организме HBV-нфекции в латентной форме (образцов с положительным результатом по anti-HBc-total) (рис. 3). Anti-HBc IgM — маркер активности вируса в организме, который указывает на необходимость детального обследования человека.

ДНК HBV в сыворотке крови — основной показатель репликациируса. Примерно в 20 % случаев обнаружение латентной HBV-инфекции в сыворотке крови возможно только с помощью ДНК-диагностики [7]. В РЦК ПЦР в «реальном времени» проводится для подтверждения отсутсвия инфекции у доноров с отрицательными результатами по классическим маркерам. Такое дополнительное исследование крови также позволяет выявлять активные формы HBV-инфекции среди случаев латентного гепатита B (рис. 4).

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

В России далеко не во всех лечебно-профилактических учреждениях исследуют кровь доноров на наличие антител к вирусу гепатита В (с помощью маркеров anti-HBc-total или anti-HBc IgM), что затрудняет своевременное выявление латентной формы HBV-инфекции. Полученные нами данные позволяют заключить, что отсутствие в крови HBsAg не является гарантией инфекционной безопасности донорской крови, поскольку положительный результат на anti-HBc-total указывает на наличие контакта с вирусом в прошлом, а на anti-HBc IgM — на активную инфекцию. В HBsAg-негативной фазе ДНК вируса может присутствовать в организме на низком уровне: с определением в печени и редко — в сыворотке крови [8]. Поэтому эта фаза не означает полного выздоровления, т. к. в любой момент может наступить рецидив заболевания — стадия реактивации [9, 10]. У пациентов с латентной HBV-инфекцией было выявлено сохранение эффективного иммунологического ответа (анти-HBc total), что может привести к реактивации HBV с повторным появлением HBsAg [11].

Трудность выявления оккультного гепатита B объясняется отсутствием обязательного исследования крови на маркеры латентной HBV-инфекции и дальнейшего обследования донора. В эпидемиологическую службу поступают сведения о донорах с положительным результатом только по одному маркеру — HBsAg. Для своевременной реализации профилактических и противоэпидемических мероприятий необходимо дополнительно обследовать и наблюдать диспансерно лиц, в крови которых обнаружены anti-HBc-total и anti-HBc IgM. В противном случае использование крови доноров с оккультным гепатитом B увеличивает риск инфицирования при гемотрансфузиях и способствует циркуляции вируса в популяции [12, 13].

ВЫВОДЫ

Ежегодно среди доноров выявляются лица с положительными результатами тестирования на маркеры HBV-инфекции (HBsAg, anti-HBc-total, anti-HBc IgM, ДНК HBV). Введение в стандарт диагностики вирусного гепатита B в центрах крови определения anti-HBc-total позволит повысить выявляемость латентной HBV-инфекции [14, 15]. Организация преемственности работы специалистов центров крови и других лечебно-профилактических учреждений обеспечит раннее выявление активных форм инфекции и предупреждение хронизации процесса, а также поможет предотвратить заражение других лиц.