Эндометриоз — одно из самых распространенных заболеваний у женщин репродуктивного возраста. Развитие эндометриоидных очагов связано с повторяющимися эпизодами внутрибрюшного кровотечения. Возникающий при этом локальный окислительный стресс является одним из патогенетических факторов прогрессирования эндометриоза [1, 2]. Трудности оценки уровней активных форм кислорода при данном заболевании приводят к необходимости исследования продуктов окислительного стресса [3]. Под влиянием продуктов окислительного стресса, в частности, продуктов окислительной модификации белков (ОМБ) происходит изменение клеточных функций. Продукты ОМБ играют роль воспалительного медиатора при различных хронических заболеваниях. Благодаря стабильности структуры продукты ОМБ могут быть использованы в оценке тяжести окислительного стресса при эндометриозе. Ранее было установлено повышенное содержание продуктов ОМБ в сыворотке крови, перитонеальной и фолликулярной жидкости у пациенток с наружным генитальным эндометриозом [3–5]. Но поскольку эндометриоидные очаги — основная патоморфологическая единица эндометриоза, изучение особенностей течения патологических процессов в эктопическом эндометрии является ключевым в изучении патогенеза и выявлении маркеров эндометриоза [6].

Цель исследования — оценить роль продуктов окислительной деструкции белков в патогенезе и прогрессировании распространенного наружного генитального эндометриоза.

ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ

Исследование проведено на базе гинекологического отделения ГБУЗ «Челябинская областная клиническая больница» с 03.02.2025 по 15.12.2025. Критерии включения в исследование: женский пол, возраст 18–45 лет, установленный по итогам проведенной лечебнодиагностической лапароскопии диагноз распространенного наружного генитального эндометриоза, наличие подписанного информированного согласия. Критерии исключения: беременность, кормление грудью, терапия системными глюкокортикостероидами, гормональная терапия эндометриоза в течение 3 месяцев до включения в исследование, предрак и рак шейки матки, гиперплазия эндометрия, полипы эндометрия, субмукозные миомы тела матки и гибридные миомы тела матки с деформацией полости, воспалительные заболевания органов малого таза; сахарный диабет 1-го и 2-го типов, заболевания щитовидной железы в стадии субкомпенсации и декомпенсации, эндогенный гиперкортицизм, гиперпаратиреоз, акромегалия, аутоиммунные ревматические заболевания, злокачественные новообразования.

В исследование включили 28 пациенток (средний возраст 31,8 ± 6,9 года), у которых была проведена лечебно-диагностическая лапароскопия. У всех женщин по результатам лапароскопии проведена оценка стадии наружного генитального эндометриоза по классификации Американской ассоциации гинекологов-лапароскопистов (AAGL) [7]: у 5 (17,85%), 5 (17,85%), и 18 (64,3%) пациенток установлена II, III, IV стадия соответственно. Участниц исследования разделили на две группы в зависимости от стадии наружного генитального эндометриоза по шкале AAGL с учетом тяжести и рисков проведения оперативного лечения [8]. Участниц исследования с II и III стадиями наружного генитального эндометриоза по классификации AAGL включили в группу 1 (n = 10), а пациенток с IV стадией — в группу 2 (n = 18). Возрастной состав и выраженность хронического болевого синдрома (оценка по визуально-аналоговой шкале) у женщин групп 1 и 2 были сопоставимы (p > 0,05). У всех пациенток диагноз эндометриоза подтвержден гистологически.

Во время лечебно-диагностических лапароскопий у пациенток проводили энуклеацию кист яичников, иссечение эндометриоидных гетеротопий и эндометриоидных инфильтратов. Для получения гомогенатов эктопического эндометрия отбирали части капсул кист, эктопических очагов и эндометриоидных инфильтратов при помощи «холодных» ножниц без использования энергий. Эктопический эндометрий гомогенизировали с 0,9%-м раствором натрия хлорида в течение 3 мин при температуре 4 °С (1 : 10). Содержание продуктов ОМБ в гомогенате эктопического эндометрия определяли на спектрофотометре «СФ-56» («ЛОМО-Спектр», Россия) по реакции карбонильных производных белков с 2,4-динитрофенилгидразином с последующей регистрацией ранних и поздних продуктов ОМБ — альдегид-динитрофенилгидразонов (АДНФГ) и кетон-динитрофенилгидразонов (КДНФГ) соответственно — в ультрафиолетовой части спектра и в области видимого света [9]. Карбонильные производные окисленных белков регистрировали на следующих длинах волн в ультрафиолетовой части спектра (продукты нейтрального происхождения): АДНФГ — 230, 254, 270, 280 и 356 нм; КДНФГ — 363 и 370 нм; в области видимого света (продукты основного происхождения): АДНФГ — 428 и 430 нм; КДНФГ — 434, 524, 530 и 535 нм. Результат выражали в единицах оптической плотности на массу белка (у.е./мг). Для оценки металл-индуцированной ОМБ активировали окисление белков гидроксильным радикалом ОН• в реакции Фентона, используя реакционную смесь, содержащую приготовленные ex tempore растворы FeSO₄ (10 мМ), перекиси водорода (0,3 мМ) и ЭДТА (10 мМ). Резервно-адаптационный потенциал (РАП) рассчитывали как отношение результатов измерения продуктов спонтанного окисления белков к индуцированному, принимая результаты измерения индуцированного окисления белков за 100%.

Статистический анализ проводили в программном обеспечении «jamovi», версия 2.7.17 (J. Love, D. Dropmann, R. Selker, Австралия). Поскольку оцениваемые показатели имели распределение, отличное от нормального, их цифровые значения представлены как Me (Q₂₅; Q₇₅), а значимость различий оценивали при помощи критерия Манна–Уитни. Для выявления связи между показателями проводили корреляционный анализ с использованием коэффициента корреляции Спирмена (R). Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Полученные значения содержания продуктов окислительной модификации белков и РАП в гомогенатах эктопического эндометрия у пациенток с распространенным наружным генитальным эндометриозом представлены в таблица.

При оценке содержания продуктов ОМБ в спонтанном режиме детекции у пациенток из группы 2 выявили статистически значимо более высокий уровень суммарного содержания продуктов ОМБ (р = 0,040), АДНФГ основного характера, КДНФГ нейтрального характера и общего количества КДНФГ, чем у женщин группы 1. Суммарное содержание АДНФГ нейтрального характера, общего количества АДНФГ и КДНФГ основного характера у пациенток групп 1 и 2 были сопоставимы. Статистически значимых различий в содержании различных продуктов ОМБ в металл-катализируемом режиме детекции у пациенток группы 1 по сравнению с женщинами группы 2 не обнаружено.

По результатам проведенного корреляционного анализа выявили пять значимых корреляционных связей между тяжестью наружного генитального эндометриоза и содержанием продуктов ОМБ в спонтанном режиме детекции. Четыре из них — прямые корреляционные связи стадии наружного генитального эндометриоза и суммарного содержания в спонтанном режиме детекции общего количества продуктов ОМБ, АДНФГ основного характера, общего количества КДНФГ и КДНФГ нейтрального характера. Пятая выявленная корреляционная связь — обратная связь РАП и тяжести наружного генитального эндометриоза. Значение коэффициента Спирмена и уровень статистической значимости выявленных значимых корреляционных связей представлены на рисунке (рисунок).

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Повышение содержания продуктов ОМБ в гомогенате эктопического эндометрия свидетельствует об участии окислительного стресса в патогенезе наружного генитального эндометриоза. Повышение суммарного содержания продуктов ОМБ в спонтанном режиме детекции может быть связано со значимой ролью митохондрий в формировании окислительного стресса непосредственно в очагах эндометриоза. В настоящее время подтверждено увеличение количества митохондрий в клетках эктопического эндометрия, а также наличие таких структурных изменений митохондрий, как удлинение, увеличение количества и плотности крист. Эти изменения ведут к повышенной биоэнергетической активности митохондрий в очагах эндометриоза, повышенной продукции активных форм кислорода и закислению среды [10]. Установлено, что в эндометрии пациенток с наружным генитальным эндометриозом увеличен синтез матричной NO-синтазы [11, 12], что приводит к повышению генерации оксида азота (II). Вследствие этого повышается содержание АДНФГ и КДНФГ в спонтанном режиме детекции ОМБ.

Повышенное содержание продуктов ОМБ в гомогенатах эндометрия может быть связано с окислительным стрессом, вызванным увеличением содержания свободного и накопленного в стромальных эндометриодных клетках железа [4–6].

Образование свободного железа в перитонеальной жидкости происходит при рефлюксе менструальной крови двумя путями: при разрушении гемоглобина гемоксигеназой-1 и образования токсичного гема при фагоцитозе эритроцитов привлеченными перитонеальными макрофагами. Свободное перитонеальное железо участвует в реакции Фентона и приводит к образованию свободных радикалов. Привлеченные перитонеальные макрофаги в свою очередь стимулируют миграцию к очагам эндометриоза других иммунных клеток, вместе с которыми активно продуцируют АФК, еще в большей степени усиливая активность окислительного стресса [12–15]. Накопление продуктов ОМБ в перитонеальной жидкости также стимулирует окислительный метаболизм нейтрофилов и моноцитов, что способствует еще большей продукции АФК [4].

В очагах эндометриоза установлено снижение синтеза железо-регулирующих протеинов 1 и 2 [16, 17], что приводит к накоплению железа и активации железозависимого окисления. Результатом этого становится гибель части эндометриоидных клеток, высвобождение цитокинов, фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и повторная активация пролиферации, адгезии и ангиогенеза в эндометриоидных очагах [14, 18–20].

Повышение общего количества КДНФГ в спонтанном режиме детекции, а также количества КДНФГ в ультрафиолетовой области спектра говорит о длительном течении окислительного стресса у пациенток с IV стадией эндометриоза по классификации AAGL [9]. В свою очередь, продолжительное воздействие продуктов ОМБ снижает уровень E-кадгерина, ответственного за ингибирование инвазии, повышает экспрессию генов р-ERK и р-Р38 в МАРК-пути и способствует пролиферации клеток в очагах эндометриоза [21].

Несмотря на отсутствие значимых различий в содержании продуктов ОМБ в металл-катализируемом режиме детекции, снижение РАП при IV стадии распространенного наружного генитального эндометриоза свидетельствует о снижении адаптации клеток эктопического эндометрия к окислительному стрессу по мере прогрессирования эндометриоидного процесса. В таком случае повышение активности окислительного стресса может приводить к повреждению клеток и, как следствие, активации сигнального пути NF-κB. Активация пути NF-κB может приводить к повышенному синтезу интерлейкина (ИЛ) 2, ИЛ-10, ИЛ-27 и VEGF, что будет увеличивать рост, пролиферацию и инвазию эндометриоидных клеток в окружающие ткани [11, 12, 22].

ВЫВОДЫ

Активность окислительного стресса при наружном генитальном эндометриозе коррелирует с тяжестью заболевания, что подтверждается повышением суммарного содержания продуктов ОМБ, АДНФГ основного характера, общего количества КДНФГ и КДНФГ нейтрального характера в спонтанном режиме детекции, а также снижением РАП. Повышение количества продуктов ОМБ может быть обусловлено изменением функции митохондрий клеток эктопического эндометрия, увеличением синтеза оксида азота (II) и накоплением железа в очагах эндометриоза, а также накоплением свободного железа в брюшной полости. Выявленные особенности редокс-статуса в очагах эндометриоза могут быть использованы как потенциальный сывороточный маркер наружного генитального эндометриоза. Для проверки данной гипотезы необходимы дальнейшие исследования.