Оригинальное исследование Исследование теплового воздействия фемтосекундных лазерных импульсов на эмбрионы мыши в рамках процедуры вспомогательного хетчинга
М. В. Кубекина, М. А. Филатов, Ю. Ю. Силаева, Д. С. Ситников
Одной из причин бесплодия является нарушение хетчинга — процесса вылупления эмбриона из специальной защитной оболочки (ZP, zona pellucida,) непосредственно перед имплантацией. Часто нарушение хетчинга обусловлено уплотнением или утолщением ZP. Для преодоления бесплодия в таких случаях прибегают к процедуре вспомогательного лазерного хетчинга, когда с помощью лазера в ZP делают отверстие, облегчая выход эмбриона из нее. Вопрос безопасности применения лазера для проведения процедуры вспомогательного хетчинга остается открытым, поскольку лазерное излучение способно нагревать окружающую среду и потенциально вызывать у эмбрионов термический шок. Целью настоящей работы было оценить безопасность фемтосекундного лазерного воздействия на эмбрионы мыши в рамках процедуры вспомогательного хетчинга, используя методы исследования жизнеспособности эмбрионов и уровней экспрессии генов HSP. Для диссекции ZP в работе использовали новый тип источника лазерных импульсов фемтосекундной длительности. Энергия указанных импульсов на два порядка ниже энергии миллисекундных лазерных диссекторов, применяемых в клиниках в настоящий момент. Для оценки фемтосекундного лазерного воздействия на эмбрион производили окрашивание эмбрионов домовой мыши (Mus musculus) флуоресцентными красителями, а также оценивали уровни экспрессии генов, кодирующих белки теплового шока: Hsp90aa1 и Hspa5. После выполнения процедуры вспомогательного лазерного хетчинга с использованием фемтосекундного лазера клетки эмбрионов сохраняли жизнеспособность, а уровни экспрессии генов, кодирующих белки теплового шока, повышались незначительно по сравнению с группой отрицательного контроля (p = 0,408).
Статья получена: 07.11.2023
Опубликовано online: 26.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.046
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1959
Оригинальное исследование Взаимосвязь уровней провоспалительных цитокинов с составом бактериальной ДНК крови у детей с ожирением
С. А. Румянцев, И. В. Кирилина, А. М. Гапонов, Д. Р. Хуснутдинова, Т. В. Григорьева, Е. Д. Теплякова, В. В. Макаров, С. М. Юдин, А. В. Шестопалов
Жировая ткань как источник развития хронического низкоинтенсивного воспаления активизирует клетки иммунной системы путем выработки цитокинов и хемокинов. Баланс между про- и противовоспалительными молекулами и их связь с бактериальной ДНК крови при ожирении у детей и подростков недостаточно исследованы. Цель исследования — нахождение паттернов взаимодействия между долями семейств бактериальной ДНК у здоровых детей и с ожирением, анализ уровней цитокинов и их связь с бактериальной ДНК крови, оценка альфа-разнообразия микробиома крови и сходства микробиомов крови и кала. Обследовано 163 человека (дети и подростки), которых разделили на 2 группы: 80 человек с ожирением I–III степени и 83 здоровых. Материал исследования — венозная кровь. Критерии включения в группы — отсутствие приема антибиотиков, про- и пребиотиков в течение трех месяцев. Методы — мультиплексный ИФА (иммуноферментный анализ); секвенирование участка v3-v4 гена 16S рРНК. Выявлены различия в микробиоме крови на уровне семейств как по доле, так и по частоте выделения бактериальной ДНК. Более 3/4 ДНК крови в обеих группах приходилось на 19 семейств. Значимо больший вклад в альфа-разнообразие у детей с ожирением принадлежал бактериальной ДНК Ruminococcaceae, однако в группе здоровых детей эта роль принадлежала Bacteroidaceae. Анализ бета-разнообразия крови позволил выявить у детей с ожирением значимую отдаленность микробиома крови и кала, что свидетельствует о преимущественно внекишечной транслокации бактериальной ДНК. Выявлено увеличение содержания ИЛ-17А (p = 0,017) и PD-L1 (p = 0,021) у детей с ожирением, а также различия в микробиоме крови в группах. Определены паттерны взаимодействия между долями бактериальной ДНК, оценены уровни цитокинов.
Статья получена: 13.10.2023
Опубликовано online: 23.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.049
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1358
Оригинальное исследование Возможности использования профилирования экспрессии мРНК для прогноза прогрессирования локальных стадий колоректального рака
С. В. Гончаров, В. К. Боженко, М. В. Захаренко, А. А. Чаптыков, Т. М. Кулинич, В. А. Солодкий
Оценка прогрессирования позволяет реализовать меры третичной профилактики колоректального рака (КРР), направленные на раннее выявление и своевременное лечение метастатической болезни. Целью исследования было разработать модель прогрессирования КРР с использованием патоморфологических и молекулярно-генетических характеристик опухоли. У 223 пациентов с КРР в стадиях T1-4N0-2M0 в образцах из опухоли были определены относительные уровни экспрессии мРНК 63 генов из разных функциональных групп. Медиана наблюдения 42 месяца. Сформированы логистические модели бинарного выбора, в которых целевой переменной служила вероятность прогрессирования в течение 36 месяцев от момента установки диагноза КРР. Объясняющими переменными были дифференцировка опухоли, ангиолимфатическая инвазия, соотношение числа метастатических лимфоузлов к их общему числу в операционном препарате, возраст пациента и локализация опухоли, а также показатели экспрессии генов CCNB1, Ki67, GRB7, IGF1, Il2, Il6, Il8, GATA3. Точность прогноза в модели с использованием клинико-морфологических показателей составила 56,6%. Включение в модель профиля экспрессии генов CCNB1, Ki67, GRB7, IGF1, Il2, Il6, Il8, GATA3 повышает точность до 80,6%. Таким образом, прогнозирование прогрессирования КРР для персонализации лечения требует дополнительных показателей, выходящих за пределы информации, получаемой в рамках традиционной морфологической классификации TNM. Использование молекулярных маркеров в качестве предикторов значительно повышает точность прогнозирования прогрессирования КРР. Необходимы дальнейшие исследования для валидации и улучшения качества прогностических моделей.
Статья получена: 13.09.2023
Опубликовано online: 23.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.050
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1308
Клинический случай Комбинированные методы лечения метастатической увеальной меланомы
К. В. Коломиец, Э. С. Пономарева, Я. Р. Посыпина, И. И. Михайлов, Ч. Б. Манджиев, Е. В. Поветкина, Р. Р. Тугуз, С. М. Булгаков, В. И. Репунова
Увеальная меланома (УМ) — редкая первичная злокачественная опухоль, формирующаяся из меланоцитов увеального тракта (хориоидеи (90%), цилиарного тела (6%), радужной оболочки (4%)) глазного яблока. По совокупным данным, уровень заболеваемости составляет 5,2 случая на 1 млн населения. В России этот показатель в разных регионах варьирует от 6,23 до 8 случаев на 1 млн взрослого населения. Наиболее часто (89–93%) УМ метастазирует в печень. Представлен клинический случай использования методики трансартериальной химиэмболизации (кароплатин) в комбинации с иммунотерапией (ниволумаб + ипилимумаб) у пациента с метастатическим поражением печени увеальной меланомой. Был достигнут контроль заболевания на протяжении 12 месяцев, что, в свою очередь, демонстрирует возможность и эффективность мультидисциплинарного подхода.
Статья получена: 22.10.2023
Опубликовано online: 22.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.051
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 2144
Оригинальное исследование Сравнительный биоинформатический анализ состава генов антимикробной устойчивости в геномах представителей рода Corynebacterium
Т. А. Кульшань, И. О. Бугаева, Е. Ф. Соболева, М. С. Аллянова, Д. А. Попов, И. Г. Швиденко
В настоящее время множественная антимикробная резистентность бактериальных инфекционных агентов представляет серьезную угрозу для мирового здравоохранения. Особое значение в развитии инфекций, в том числе госпитальных, играют следующие виды коринебактерий: C. amycolatum, C. urealyticum, C. striatum, C. jeikeium, C. aurimucosum, C. genitalium, которые устойчивы к большому арсеналу антимикробных препаратов. Целью исследования было проведение биоинформатического анализа спектра генов устойчивости к антимикробным препаратам в опубликованных геномах некоторых представителей рода Corynebacterium. Исследованы данные о нуклеотидных последовательностях полных геномов 22 штаммов коринебактерий, представленных в свободном доступе в NCBI GenBank. Биоинформатический анализ полногеномных последовательностей с целью поиска генов антимикробной устойчивости в указанных геномах осуществляли с помощью онлайн-ресурса PATRIC. Установлено, что представленные геномы в различных комбинациях содержали 25 генов устойчивости к антимикробным препаратам. У некоторых штаммов коринебактерий выявлены аминокислотные замены в GyrA (позиции 87, 88 и 91), с которыми может быть связана реализация устойчивости к хинолонам/фторхинолонам.
Статья получена: 20.10.2023
Опубликовано online: 19.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.047
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1962
Оригинальное исследование Создание генетически кодируемого светоиндуцируемого сенсора для визуализации ядрышка
П. А. Журлова, З. В. Беседовская, Е. Л. Соколинская, Л. В. Путляева
Ядрышки участвуют в усилении продукции рРНК и поддержании биогенеза рибосом в опухолевых клетках, что делает их желанной мишенью в генетических и онкологических исследованиях. Наиболее удобным методом визуализации ядрышка благодаря своей эффективности и доступности является флуоресцентная микроскопия. В настоящее время методы визуализации ядрышек либо неточны, либо непригодны для живых клеток, либо требуют постоянного окрашивания для живого мониторинга. Целью исследования было создать генетически кодируемую систему фотоиндуцируемых сенсоров (light-activated nucleolus sensor, LANS) для визуализации ядрышка в реальном времени. Комбинация домена eMag для светоиндуцируемой димеризации и ридерного домена белка DPF3 позволяет системе LANS эффективно осуществлять направленное перемещение целевого белка в ядрышко посредством облучения клетки короткими импульсами синего света, не влияя на морфологию клеток. Данная система позволяет увеличить представленность пробы LANS2 в ядрышке в 1,5 раза относительно значений интенсивности флуоресценции, полученных до облучения ядрышка. Созданная система сенсоров LANS позволит ускорить поиск новых лекарств и улучшить первичный скрининг лекарственных соединений в моделях in vivo.
Статья получена: 27.11.2023
Опубликовано online: 17.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.048
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1414
Оригинальное исследование Частотно-зависимый эффект транскраниальной стимуляции тета-вспышками префронтальной коры на когнитивные функции
Н. А. Супонева, И. С. Бакулин, А. Г. Пойдашева, Д. О. Синицын, А. Х. Забирова, Д. Ю. Лагода, М. А. Пирадов
Стимуляция тета-вспышками (TBS) находит широкое применение благодаря индукции долговременных эффектов при короткой длительности протокола. Для уменьшения вариабельности эффекта исследуют подходы к ее персонализации, например, по частотам тета-гамма сопряжения (ТГС). Целью исследования было разработать протокол персонализированной по ТГС навигационной стимуляции интермиттирующими тета-вспышками (iTBS-ind) и сравнить его со стандартным (iTBS-5/50) и имитацией стимуляции (iTBS-sham). В исследование включены 16 здоровых добровольцев (М — 7; 29,6 лет), которым в случайном порядке проводили по одной сессии каждого протокола iTBS левой дорсолатеральной префронтальной коры. Эффект оценивали с помощью тестов n-back c одновременным предъявлением вербальных и пространственных стимулов (n = 2,3), Digit span, Corsi blocks, Tower of London; тестирование проводили до, сразу и через 60 мин после стимуляции. Серьезных нежелательных явлений не зарегистрировали. Статистически значимый эффект получен при оценке через 60 мин для iTBS-5/50 на тест n-back с пространственными стимулами (n = 3) (pcorr = 0,018), для всех протоколов — на тест Tower of London (pcorr = 0,039 для iTBS-5/50, pcorr = 0,045 для iTBS-ind и pcorr = 0,003 для iTBS-sham). Эффект iTBS-5/50 был статистически значимо выше по сравнению с iTBS-sham в отношении пространственного теста n-back (n = 3) (pcorr = 0,039), но ниже по сравнению с iTBS-ind и iTBSsham в отношении теста Corsi blocks (pcorr = 0,038 и 0,048 соответственно). Таким образом, не удалось подтвердить эффективность и преимущества персонализированного протокола по сравнению со стандартным и имитацией стимуляции. В связи с полученным эффектом стандартного протокола может быть перспективным дальнейшее его изучение.
Статья получена: 07.10.2023
Опубликовано online: 07.12.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.045
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 2502
Оригинальное исследование Эффективность устранения костных дефектов челюстей
Г. В. Порядин, Д. А. Еремин, Н. М. Хелминская, В. И. Кравец, И. В. Житарева, А. В. Посадская, Н. М. Краснов, П. А. Шень, М. А. Гурешидзе
Методы регенеративной медицины в России и за рубежом активно развиваются в связи с актуальностью этого направления, особенно в вопросах костной пластики челюстей. Для нормализации и стимуляции остеогенеза традиционно применяют ауто-, алло- и ксенопластиченские материалы, а также синтетические препараты на основе кальций-фосфатной керамики, но результаты лечения не всегда однозначны. Целью исследования было обосновать применение биокомплекса плазмы крови, богатой факторами роста PRGF, и ксенопластического материала для повышения эффективности остеогенеза костных дефектов челюстей. В исследовании участвовало 136 пациентов (105 женщин и 31 мужчина, в возрасте 21–67 лет), в зависимости от метода замещения костного дефекта разделенных на четыре группы. В 1-й группе остеопластические материалы не применяли, во 2-й пластику проводили фибриновым гелем PRGF, в 3-й — материалом Osteobiol Gen-Os, в 4-й — материалом Osteobiol Gen-Os совместно с препаратом плазмы, богатой факторами роста PRGF. Для динамической оценки процесса остеогенеза проводили компьютерную томографию с цифровой денситометрией до операции и через 3, 6, 12 месяцев после нее. Через год восстановление утраченного объема костной ткани в 4-й группе зафиксировано у 100% пациентов, в 3-й — у 70,27%, во 2-й — у 43,47%, а в 1-й у — 37,5%, точный критерий Фишера выявил статистически значимые различия результатов костной пластики в 3-й и 4-й группах (p = 0,00002). Статистически значимо различаются показатели плотности костной ткани у пациентов 1-й и 2-й групп через 12 месяцев после операции (p = 0,044), у 3-й и 4-й групп — через 3 (p = 0,004), 6 (p = 0,0001) и 12 (p = 0,0001). Полученные результаты говорят об эффективности применения предложенной нами методики.
Статья получена: 02.10.2023
Опубликовано online: 21.11.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.044
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 2007