Метод Детекция Salmonella enterica петлевой изотермальной амплификацией ДНК с использованием флуоресцентно меченого петлевого праймера
Д. В. Шамовская, М. А. Гордукова, М. А. Смертина, Е. В. Галеева, И. П. Оскорбин, Е. А. Храпов, У. А. Боярских, М. Л. Филипенко
Сальмонеллез остается одной из ведущих причин бактериальных кишечных инфекций человека и животных. Молекулярная диагностика радикально трансформировала диагностический ландшафт сальмонеллезной инфекции, однако остается времени- и ресурсозатратной. Изотермическая амплификация ДНК, например, петлевая изотермальная амплификация (LAMP), выполняемая при постоянной температуре, является основой разработки быстрых диагностических тестов, которые могут быть адаптированы к формату point-of-care (PoC) и выполнены в условиях ограниченных ресурсов и вдали от централизованных лабораторий. Целью исследования было разработать и валидировать новый метод детекции Salmonella enterica в образцах кала человека методом LAMP, в котором мониторинг результатов амплификации достигается с помощью петлевого флуоресцентномеченного праймера, несущего также внутренний гаситель флуоресценции. Предложенный метод имеет предел обнаружения (LoD 95%) 250 копий на реакцию, чувствительность 86,84% (95% ДИ: 71,91–95,59%) и специфичность — 96,49% (95% ДИ: 87,89–99,57%) относительно qPCR, а также показал большую устойчивость к ингибиторам амплификации ДНК в образцах фекалий. Введение разных флуоресцентных меток в петлевые праймеры для FLP-LAMP с разными мишенями потенциально обеспечивает возможность мультиплексирования и одновременного выявления нескольких патогенов, что увеличивает диагностические возможности изотермальной амплификации.
Статья получена: 23.11.2025
Опубликовано online: 22.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.066
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 557
Оригинальное исследование Экспрессия эктонуклеотидаз CD39 и CD73 в крови больных разными формами метаболически ассоциированной жировой болезни печени
Г. А. Жулай, И. В. Курбатова, О. П. Дуданова
Экспериментальные исследования показали защитную роль экспрессии эктонуклеотидаз, в частности CD39 и CD73, в ограничении воспаления при патологии печени, но их экспрессия у больных метаболически ассоциированной жировой болезнью печени (МАЖБП) мало изучена. Целью работы было оценить уровни мРНК генов ENTPD1 и NT5E, кодирующих CD39 и CD73 соответственно, у пациентов с разными формами МАЖБП: стеатозом печени (СП) и метаболически ассоциированным стеатогепатитом (МАСГ), а также оценить содержание CD39- и CD73-экспрессирующих клеток при активации иммунных клеток in vitro. Обследовали 29 здоровых доноров и 56 пациентов с МАЖБП. Проводили оценку уровня мРНК генов ENTPD1 и NT5E, уровня провоспалительных цитокинов (ИЛ-6, ФНОα), уровня фрагментированного цитокератина-18 и содержания CD39+ клеток в крови обследованных людей. Кроме того, оценивали влияние активации иммунных клеток на содержание CD39+ и CD73+-клеток у пациентов с МАСГ и здоровых доноров in vitro. Установлено, что экспрессия гена ENTPD1 (p = 0,007 при сравнении c контролем; p = 0,010 — с СП) и содержание CD39+-клеток в популяции моноцитов (p = 0,004 — c контролем; p = 0,003 — с СП) и лимфоцитов (p = 0,034 — с контролем) снижены при МАСГ относительно групп контроля и СП. Показано, что активация клеток пациентов с МАСГ увеличивает уровень CD39+-лимфоцитов, но не CD14+-моноцитов, а CD73+-клеток — среди лимфоцитов и CD14+-моноцитов. Таким образом, представляется перспективным дальнейшее изучение CD39 и CD73 в механизмах прогрессирования МАЖБП.
Статья получена: 11.11.2025
Опубликовано online: 21.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.079
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 619
Оригинальное исследование Определение мишеней для персонализированной мультитаргетной неинвазивной стимуляции лобно-теменной сети контроля
А. Г. Пойдашева, Д. О. Синицын, И. С. Бакулин, А. Х. Забирова, Д. Ю. Лагода, Н. А. Супонева, М. А. Пирадов
Персонализация выбора мишени для рТМС — актуальная задача, решение которой может значительно увеличить эффективность метода. Один из подходов к персонализации — стимуляция ключевых хабов индивидуальных сетей покоя. Цель исследования — разработка методологии персонализации рТМС на основе выделения индивидуальных хабов фронто-париетальной контрольной сети (FPCN) с оценкой вариабельности их локализации. Для определения хабов FPCN были построены индивидуальные карты с использованием в качестве seed групповой маски сети FPCN. С помощью алгоритма прожектора с радиусом сферы 5 мм были выбраны мишени в пределах дорсолатеральной префронтальной коры (ДЛПФК) и задней теменной коры (ЗТК). Анализировали вариабельность пространственной локализации мишеней и корректность применения рутинного «правила 5 см» для локализации ДЛПФК. У 24 здоровых добровольцев (9 мужчин, средний возраст 29±7 лет) продемонстрирована высокая межиндивидуальная вариабельность мишеней. Ни в одной из областей не существует универсального положения стимулирующей катушки, позволившего бы эффективно стимулировать мишени у всех добровольцев. Пространственный разброс точек выше в ДЛПФК (объемы многогранников, содержащих множества точек равны 2095 мм3 в ДЛПФК и 739 мм3 в ЗТК). Все индивидуальные мишени в ДЛПФК лежат в пределах маски FPCN, а для ЗТК ряд мишеней находится вне этой маски. Среднее расстояние между зоной кисти первичной моторной коры (М1) и ДЛПКК составило 64±13 мм. У 75% участников это расстояние превышало 5 см, что подтверждает некорректность применения рутинного «правила 5 см» позиционирования катушки для большинства испытуемых. Разработан алгоритм выбора персонализированных мишеней для рТМС по данным фМРТ покоя в ДЛПФК и ЗТК, которые являются ключевыми хабами FPCN.
Статья получена: 14.11.2025
Опубликовано online: 20.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.081
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 755
Оригинальное исследование Оценка уровня катехоламинов и серотонина в крови при тревожно-депрессивных расстройствах
Н. В. Соловьева, Н. А. Чупрова, К. В. Кочергина, А. А. Митрофанов, С. В. Чаусова, И. В. Кичук
В психиатрической практике существует необходимость разработки простых, патогенетически обоснованных и надежных биомаркеров для прогноза аффективного статуса пациентов в текущий момент и в ближайшей перспективе. Целью работы было провести анализ ассоциации аффективного статуса пациентов с непсихотическими расстройствами с уровнями катехоламинов и серотонина в периферической крови. Для оценки аффективного статуса использовали Госпитальную шкалу тревоги и депрессии (HADS). Концентрацию катехоламинов (адреналина, норадреналина и дофамина) в плазме и серотонина в сыворотке крови оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В исследование вошли 114 человек с непсихотическими расстройствами, средний возраст составил 34,57 (SD = 10,36) лет, доля женщин — 64%. Мы не выявили достоверных прогностических эффектов уровней нейромедиаторов в периферической крови в отношении текущего аффективного статуса. Единственным маркером на уровне тенденции оказалось соотношение «серотонин / норадреналин», повышение значения которого снижает риск статуса клинической депрессии по HADS-D с учетом пола и возраста пациентов (p = 0,059). У пациентов с диагнозом рекуррентное депрессивное расстройство или депрессивный эпизод отмечено небольшое снижение уровня серотонина (p = 0,068) по сравнению с пациентами с диагнозами вне категории аффективных расстройств. В этой же группе обнаружена отрицательная корреляция между баллами по HADS-A (тревога) и уровнем норадреналина (Rs = –0,410, p < 0,05). Полученные результаты дают основания предполагать, что на расширенных клинически гомогенных выборках будет возможность подтверждения полученных предварительных результатов и получения новых данных.
Статья получена: 30.10.2025
Опубликовано online: 19.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.080
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 689
Оригинальное исследование Разработка и исследование материала на основе костного аллотрансплантата для DLP-3D-печати
А. Р. Билялов, С. С. Чугунов, И. Ш. Ахатов, А. А. Тихонов, О. Р. Шангина, В. Н. Павлов, К. В. Данилко, М. Ф. Галаутдинов, В. Н. Акбашев
Использование аллогенного костного материала как керамического наполнителя для DLP-печати позволяет получать индивидуализированные имплантаты сложной формы, совмещающие биомиметичную природу матрицы с преимуществами аддитивных технологий. Целью работы было оценить возможность использования прокаленного порошка кортикального костного аллотрансплантата в составе фотополимеризуемой суспензии для DLP-печати и получения после спекания биокерамики с характеристиками, сопоставимыми с синтетическим гидроксиапатитом. Костный аллотрансплантат подвергали многоэтапной специализированной обработке с полным удалением клеток при сохранении структуры межклеточного матрикса и коллагеновых волокон. Прокаленный медицинский аллотрансплантат измельчали, вводили в фотополимеризуемую матрицу и использовали для DLP-печати образцов, которые затем спекали и анализировали методами рентгеновской дифракции и энергодисперсионной спектроскопии до и после аддитивного производства. Относительная плотность спеченного материала составила 81,5%, прочность на сжатие — 75,8 МПа, прочность на растяжение — 12 МПа, модуль Юнга — 3,08 ГПа и твердость по Виккерсу — 0,55 ГПа, что находится в диапазоне значений для пористого гидроксиапатита. Фазовый и элементный состав образцов после DLP-печати и спекания не претерпевал существенных изменений по сравнению с исходным прокаленным материалом. Прокаленный порошок костного аллотрансплантата пригоден для приготовления фотополимеризуемых суспензий и последующей DLP-печати керамических образцов без ухудшения фазовой и химической стабильности материала. Полученные механические свойства позволяют рассматривать данный аллогенный костный материал в качестве перспективного кандидата для изготовления индивидуализированных имплантатов сложной геометрии.
Статья получена: 03.11.2025
Опубликовано online: 18.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.068
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 641
Метод Подготовка и алгоритм исследования адгезированных на поверхности биокерамики клеток методом сканирующей электронной микроскопии
К. В. Данилко, В. А. Солнцев, Р. В. Плотницкий, А. В. Михайлова, А. Р. Билялов, С. С. Чугунов, М. Ф. Галаутдинов, В. Н. Акбашев, И. Ш. Ахатов
Метод сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) в настоящее время позволяет анализировать поверхности различных материалов, в том числе эукариотических клеток. Способность клеток различных тканей организма прикрепляться и расти на поверхности материалов для имплантации служит важной характеристикой их биосовместимости. СЭМ позволяет напрямую визуализировать характер контакта клеток с поверхностью. Однако методика подготовки проб к анализу традиционно требует высокой степени обезвоживания образца и применения токсичного тетраоксида осмия. Целью работы было провести оптимизацию методики подготовки животных клеток, растущих на поверхности биокерамических образцов, к анализу с помощью СЭМ. В работе предложена методика подготовки мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человека, выращенных на поверхности трех типов биокерамических образцов, к анализу с помощью СЭМ. Она включает фиксацию с помощью альдегида, спиртовое обезвоживание, подкрашивание красителем Гимзы и высушивание с последующим напылением золота. Предложен также алгоритм поиска прикрепленных клеток на поверхности пористого и шероховатого материала. Данный подход позволяет быстро подготовить клетки к СЭМ-анализу без использования высокотоксичных реагентов.
Статья получена: 13.11.2025
Опубликовано online: 17.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.072
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 680
Оригинальное исследование Транскрипционная киназа CDK8, но не CDK19 способствует развитию атеросклеротических поражений у мышей
А. Н. Незнамов, Ю. П. Байкова, Е. Н. Коршунов, Е. М. Исаева, А. В. Брутер, М. В. Кубекина
Атеросклероз, являющийся основной причиной инфаркта миокарда и инсульта, остается глобальной медико-социальной проблемой. Несмотря на его признание в качестве хронического воспалительного заболевания, внутриклеточные молекулярные механизмы, управляющие прогрессированием болезни, изучены недостаточно. Циклин-зависимые киназы CDK8 и CDK19, являющиеся ключевыми регуляторами транскрипции и воспаления, потенциально могут играть значительную роль в патогенезе атеросклероза. Целью исследования было изучить влияние нокаута генов Cdk8 и Cdk19 на развитие атеросклеротических поражений у мышей с дефицитом аполипопротеина E (ApoE⁻/⁻). Показано, что как эндотелиоспецифичный, так и системный нокаут Cdk8 достоверно снижает площадь атеросклеротических поражений аорты, причем тотальный нокаут оказывает более выраженный антиатерогенный эффект. Это свидетельствует о плейотропной роли CDK8 в патогенезе атеросклероза, опосредованной его функцией не только в эндотелиальных клетках, но и, вероятно, в макрофагах. В отличие от Cdk8, системный нокаут Cdk19 не оказал значимого влияния на развитие атеросклероза. Таким образом, CDK8, но не CDK19, идентифицирован в качестве проатерогенного регулятора, что делает его перспективной мишенью для разработки новых терапевтических стратегий.
Статья получена: 31.10.2025
Опубликовано online: 16.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.078
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 653
Оригинальное исследование Особенности системного воспалительного статуса пациенток при эндометрит-ассоциированном бесплодии
О. Е. Савельева, Т. А. Криволесова, А. С. Жигалина, Л. П. Сигарева, А. В. Сабуров, В. А. Резник
Среди заболеваний эндометрия, снижающих его репродуктивный потенциал, ведущую роль играет хронический эндометрит (ХЭ). Патогенетически значимые воспалительные маркеры, такие как цитокины, воспалительные белки и гематологические индексы пока не нашли широкого применения в медицинской практике для диагностики ХЭ. Цель исследования — оценить показатели системного воспалительного статуса, включая гематологические лабораторные параметры и воспалительные индексы, у пациенток с бесплодием и определить их диагностическую значимость при ХЭ. Представлены данные исследования 50 пациенток с бесплодием. Подсчет количества лейкоцитов крови проводили стандартным гематологическим методом. На основе клеточного состава крови рассчитывали воспалительные индексы NLR, MLR, PLR и SII. Концентрацию СРБ в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа. У пациенток с бесплодием, ассоциированным с ХЭ, абсолютное и относительное количество лимфоцитов было ниже (p = 0,0451 и p = 0,0089 соответственно), а относительное количество моноцитов и базофилов было выше (p = 0,0469 и p = 0,0005 соответственно), чем у пациенток без ХЭ. У пациенток из исследуемой группы концентрация СРБ в крови была почти в 4 раза выше, чем у пациенток из группы сравнения (p = 0,0191). При этом все показатели оставались в пределах нормальных значений. Сравнительный анализ индексов NLR, MLR, PLR и SII показал их статистически значимое повышение при бесплодии, ассоциированном с ХЭ (p = 0,0387, p = 0,0058, p = 0,0335 и p = 0,0333 соответственно). ROC- анализ позволил установить предиктивную значимость у индексов NLR (0,871 (95% ДИ: 0,767–0,974); p < 0,0001) и MLR (0,848 (95% ДИ: 0,737–0,958); p < 0,0001) для выявления ХЭ у пациенток с бесплодием.
Статья получена: 29.10.2025
Опубликовано online: 15.12.2025
DOI: 10.24075/vrgmu.2025.071
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 694