Оригинальное исследование Методика ускоренного получения модельных кишечных барьеров in vitro
С. В. Никулин, А. А. Полозников, Д. А. Сахаров
Для повышения эффективности разработки лекарственных препаратов необходимо увеличивать производительность экспериментов, проводимых на доклинической стадии. Существенным недостатком используемых на сегодняшний день in vitro моделей кишечного барьера является скорость образования функционального монослоя энтероцитов со сформировавшимися плотными контактами. Целью работы было провести комплексный подбор параметров (различные покрытия и плотность клеток) для быстрого и эффективного получения пригодного к проведению экспериментов монослоя клеток Caco-2. Для оценки состояния культуры клеток при различных условиях применяли прижизненную микроскопию и импедансную спектроскопию. Для определения возможного биологического механизма действия различных белковых субстратов на энтероциты использовали транскриптомный анализ. Показано, что покрытие субстрата для роста клеток коллагеном IV существенно повышает скорость пролиферации и миграции клеток линии Caco-2. Такое воздействие позволяет в течение 24 ч сформировать функциональный монослой эпителиальных клеток с плотными контактами. С целью получения пригодного для проведения экспериментов кишечного барьера in vitro в течение 24 ч начальная плотность клеток должна лежать в диапазоне 90–200 тыс. клеток на 1 см2. Обнаружено, что клетки Caco-2 слабо экспрессируют коллаген IV, при этом рецепторы к коллагену IV у данных клеток экспрессированы на достаточно высоком уровне. Показано также, что еще один компонент базальной мембраны ламинин 332 не оказывает заметного влияния на скорость формирования функционального монослоя эпителиальных клеток. Таким образом, в работе были определены оптимальные параметры, позволяющие существенно повысить производительность экспериментов с in vitro моделями кишки.
Статья получена: 09.11.2020
Опубликовано online: 15.12.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.077
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 3522
Оригинальное исследование Структура и нейрометаболический потенциал микробиоты кишечника у здоровых детей разного возраста
А. С. Ковтун, О. В. Аверина, Е. У. Полуэктова, Г. П. Костюк, В. Н. Даниленко
В последние годы большое внимание уделяется изучению влияния кишечной микробиоты на здоровье детей, в том числе психическое. Целью данной работы было определить изменения в таксономическом составе и содержании бактериальных генов, кодирующих ферменты, участвующие в метаболизме нейроактивных соединений, в метагеноме микробиоты кишечника детей младшего и подросткового возраста. Данные для анализа были получены при помощи секвенирования полного метагенома. Для определения изменения представленности бактериальных генов и метагеномных сигнатур использовали разработанный биоинформатический алгоритм и каталог гомологов генов. В результате построена коровая нейрометаболическая сигнатура кишечной микробиоты здоровых детей младшего возраста, включающая в себя виды Bacteroides uniformis, Faecalibacterium prausnitzii и Lachnospiraceae bacterium и гены, участвующие в образовании уксусной, пропионовой и масляной кислот, глутамата и ферментов с антиоксидантной активностью. Сравнение метагеномов детей разных возрастных групп показало статистически значимое (P-value < 0,1) изменение представленности для 3 родов бактерий и 18 видов. Альфа-разнообразие микробиоты подростков выше как на родовом, так и на видовом уровнях. Кроме того, в микробиоте подростков повышена (P-value < 0,1) представленность генов, кодирующих ферменты, участвующие в образовании короткоцепочечных жирных кислот, глутамата, триптофана и ферментов с антиоксидантной активностью и деградации гистидина, конъюгации линолевой кислоты. Полученные результаты подтверждают имеющиеся данные об увеличении биоразнообразия и развитии функциональных свойств кишечного микробного сообщества со взрослением человека.
Статья получена: 13.11.2020
Опубликовано online: 11.12.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.076
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 3996
Оригинальное исследование Паттерны атрофии головного мозга при лобно-височной деменции: данные воксель-ориентированной морфометрии
Д. Р. Ахмадуллина, Р. Н. Коновалов, Ю. А. Шпилюкова, Д. А. Гришина, Е. С. Бердникович, С. С. Фоменко, Е. Ю. Федотова, С. Н. Иллариошкин
Лобно-височная деменция (ЛВД) — нейродегенеративное заболевание, вторая по частоте деменция с ранним началом, проявляющаяся речевыми и поведенческими нарушениями. Выявление паттернов атрофии важно для диагностики данной патологии. Однако визуальная оценка данных магнитно- резонансной томографии может быть недостаточно чувствительной, что требует использования объективного метода определения объема серого вещества (СВ). Целью исследования было оценить паттерн атрофии СВ у пациентов с ЛВД в сравнении с контрольной группой при помощи воксель- ориентированной морфометрии (ВОМ). В исследование включены 16 пациентов с ЛВД (12 — с аграмматическим вариантом первичной прогрессирующей афазии (авППА), три — с поведенческим вариантом ЛВД, один — с логопеническим вариантом ППА) и 10 здоровых добровольцев. При проведении ВОМ в группе ЛВД и контрольной группе выявлено три статистически значимые (pFWE-corr < 0,05) зоны атрофии — в левой нижней лобной извилине, левой фузиформной и левой надкраевой извилинах. В связи с преобладанием в группе ЛВД пациентов с авППА дополнительно проводили ВОМ в этой группе и группе контроля, при которой был выявлен иной паттерн атрофии: уменьшение объема СВ обнаружено в левой нижней лобной и левой средней лобной извилинах (pFWE-corr < 0,05). Полученные результаты показывают, что для ЛВД независимо от клинического варианта характерен свой определенный паттетрн атрофии, захватывающий как лобно-височные отделы, так и теменную долю. На примере авППА было показано, что у каждого из вариантов заболевания локализация атрофического процесса имеет отличный от других характер.
Статья получена: 21.10.2020
Опубликовано online: 08.12.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.075
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 4030
Оригинальное исследование Взаимосвязь изменения экспрессии микроРНК и мРНК в клетках линии нт-29 в условиях гипоксии
С. А. Нерсисян, А. В. Галатенко, Д. В. Мальцева, Ю. А. Ушкарев, А. Г. Тоневицкий
Гипоксия возникает в различных патофизиологических процессах, включая прогрессирование опухолевых заболеваний и метастазирование. Один из механизмов молекулярного ответа клеток на гипоксию состоит в рекрутировании специфичных микроРНК, регулирующих экспрессию своих генов-мишеней. Целью работы было оценить изменения экспрессии микроРНК и их генов-мишеней в клеточной линии колоректальной аденокарциномы человека HT-29 в ответ на гипоксию с помощью интегрированного секвенирования микроРНК и мРНК. Для моделирования условий гипоксии клетки обрабатывали хлоридом кобальта (II). Было обнаружено достоверное изменение экспрессии 16 человеческих микроРНК, шесть из них (hsa-miR- 18a-5p, hsa-miR-22-3p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-182-5p, hsa-miR- 215-5p, hsa-miR-425-5p) имели статистически значимую долю генов-мишеней с противоположным направлением изменения экспрессии. На основании биоинформатического анализа взаимодействий дифференциально экспрессированных факторов транскрипции и микроРНК была построена возможная регуляторная сеть, основыми узлами которой оказались HIF-1α, p65, с-Myc и Egr1 (кодируемые генами HIF1A, RELA, MYC и EGR1).
Статья получена: 26.10.2020
Опубликовано online: 07.12.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.074
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 3752
Оригинальное исследование Качество жизни пациентов в резидуальном периоде ишемического инсульта и определяющие его факторы
Е. Е. Молчанова, В. В. Полунина, Б. А. Поляев, В. П. Плотников, А. Н. Лобов, С. А. Парастаев
Инсульт остается одной из основных причин серьезной инвалидизации, поэтому изучение факторов, влияющих на качество жизни постинсультных больных, и совершенствование реабилитационных технологий, способных улучшить его, сохраняет актуальность. Целью исследования было изучить возможные факторы, определяющие качество жизни больных, перенесших ишемический инсульт, в резидуальном периоде. Анкетирование проводили с помощью опросника MOS SF-36 у 210 пациентов, проходивших курс ранней реабилитации в условиях первичного сосудистого отделения. Исследование показало достоверное ухудшение ряда показателей качества жизни с увеличением возраста пациентов и тяжести инсульта (с коэффициентом корреляции –0,5; р < 0,01). У женщин оказались более низкими как физический (p < 0,01), так и психический (p < 0,001) компоненты качества жизни. Более высокие значения большинства субшкал качества жизни (p < 0,05) получены в группе пациентов, перенесших вертебробазилярный инсульт, по сравнению с пациентами, у которых была каротидная локализация очага. Оптимизация ранней реабилитации включением методов рефлексотерапии в остром периоде инсульта и продолжение реабилитационного процесса в условиях «Больницы восстановительного лечения» способствовали повышению (р < 0,05) качества жизни пациентов в периоде отдаленных последствий.
Статья получена: 20.10.2020
Опубликовано online: 05.12.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.073
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 3579
Оригинальное исследование Взаимодействие генофондов русского и финноязычного населения Тверской области: анализ 4 млн SNP-маркеров
О. П. Балановский, И. О. Горин, Ю. С. Записецкая, А. А. Голубева, Е. С. Кострюкова, Е. В. Балановская
Генофонды популяций Тверской области (русских и карел) изучены по широкогеномной панели из 4 млн аутосомных SNP-маркеров, типированной на суммарной выборке из 41 образца. Эти данные по популяции тверских карел (n = 11) и русских из западных, центральных и восточных районов Тверской области (n = 30) проанализированы на широком фоне русских популяций соседних областей, карел Карелии и других популяций Северо-Восточной Европы с целью изучения феномена взаимопроникновения генофондов славянского и финноязычного населения. Такое изучение генофондов населения России по наиболее обширной из существующих широкогеномных панелей важно для каталогизации геномного разнообразия населения России и характеристики региональных генофондов и имеет практическое применение в фармакогеномике и судебной медицине. Методами главных компонент, ADMIXTURE, d- и f3-статистик показано, что генофонд тверских карел, несмотря на их проживание среди преобладающего русского населения в течение 3–5 веков и 20-кратное сокращение численности в течение последнего столетия, сохраняет наибольшую близость к генофонду карел Карелии. Но при этом генофонд тверских карел более сходен с русским генофондом, чем генофонд других карельских популяций. Сближение генофондов русских и карел Тверской области происходит за счет более интенсивного потока генов от русских к карелам и при малозаметном потоке генов от карел к русским: тверские русские оказались столь же генетически отличны от карел, как, например, псковские. Сходство тверских карел с карелами Карелии по аутосомным маркерам (при небольшом смещении в сторону русского генофонда) согласуется с опубликованными данными по Y-хромосоме (отсутствие детектированного смешения тверских карел с русскими).
Статья получена: 10.10.2020
Опубликовано online: 26.11.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.072
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 5714
Оригинальное исследование Диссомнические расстройства при ювенильном ревматоидном артрите: влияние на качество жизни
А. А. Елезаров, А. С. Кучерявый, Л. Н. Гуменюк, Л. Е. Сорокина, С. Р. Арифджанова, О. Ю. Гербали
Диссомнические расстройства (ДР) при ювенильном ревматоидном артрите (ЮРА) — одно из наиболее распространенных, тяжело переносимых и дезадаптирующих состояний. Цель исследования — оценить распространенность и структуру ДР, их взаимосвязь с клиническими особенностями, вклад в снижение качества жизни у больных ЮРА. На I этапе оценивали распространенность ДР в сплошной выборке больных ЮРА и здоровых детей 8–16 лет. На II этапе у больных ЮРА с верифицированными ДР оценивали их структуру, гендерно-возрастные особенности, взаимосвязь с основными клиническими характеристиками ЮРА, качеством жизни больных. Применяли шкалу для оценки качества сна SDSC, опросник качества жизни — PedsQL 4.0, индекс Ричи. У больных ЮРА ДР встречаются в 3,3 раза чаще, чем у здоровых детей (у 178 (72,3%) и у 93 (22,2%) соответственно). Спектр ДР был представлен расстройствами инициации и поддержания сна — 54 (22,0%), расстройствами дыхания — 32 (13,0%), расстройствами перехода сна в бодрствование — 31 (12,6%), расстройствами чрезмерной сонливости — 38 (15,4%) и их сочетаниями — 23 (9,3%). У девочек больше выражены расстройства инициации и поддержания сна (р = 0,003), у мальчиков — расстройства чрезмерной сонливости (р = 0,008). Тяжесть ДР нарастает по мере увеличения возраста больных (r = 0,69; p = 0,001) и возраста дебюта ЮРА (r = 0,71; p = 0,001), при полиартикулярном варианте (r = 0,32; p = 0,048). Уточнена связь ДР с показателями воспалительного (r = 0,56; p = 0,001), суставного индексов (r = 0,44; p = 0,005) и продолжительностью утренней скованности (r = 0,49; p = 0,029). Наличие взаимосвязи ДР и ЮРА диктует необходимость проведения рутинной диагностики ДР у данной категории больных, при этом для ведения ДР необходимо применять скорее персонифицированный лечебно-диагностический подход, чем расценивать его в качестве одного из синдромов ЮРА.
Статья получена: 05.10.2020
Опубликовано online: 14.11.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.071
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 4264
Оригинальное исследование Локальный антиоксидантный эффект оригинальной дермальной пленки c мелатонином при термической травме
М. В. Осиков, Е. В. Симонян, А. А. Агеева, Ю. И. Агеев, А. А. Федосов, А. И. Синицкий
Эскалация оксидативного стресса (ОС) при термической травме (ТТ) и плейотропные эффекты мелатонина (МТ) являются предпосылкой для изучения его протекторных свойств в составе новой дермальной пленки (ДП) при ожогах кожи. Цель работы — оценить содержание маркеров ОС в коже при экспериментальной ТТ и применении ДП с МТ. ТТ IIIА степени площадью 3,5% моделировали погружением участка кожи в кипящую воду. ДП площадью 12 см2 с МТ в концентрации 5 мг/г наносили ежедневно в течение 5 сут. Вычисляли площадь раны и скорость ее эпителизации. В ожоговой ране определяли продукты пероксидного окисления липидов (ПОЛ) в гептановой и изопропанольной фазах липидного экстракта, продукты окислительной модификации белков (ОМБ) в спонтанном и металл-зависимом режимах. При ТТ в ране на 5-е и 10-е сут. увеличилось содержание вторичных и конечных продуктов ПОЛ в гептановой и изопропанольной фазах, суммарное содержание продуктов ОМБ за счет первичных продуктов нейтрального характера на 5-е сут., первичных и вторичных продуктов нейтрального характера на 10-е сут. Применение ДП при ТТ уменьшило площадь ожога, увеличило скорость эпителизации раны (на 10-е сут. по медиане с 1,90% до 6,57%; р < 0,05), снизило содержание в изопропанольной фазе вторичных и конечных (на 10-е сут. по медиане с 0,007 до 0,004 е.и.о.; р < 0,05) продуктов ПОЛ, снизило суммарное содержание продуктов ОМБ на 5-е сут. за счет первичных продуктов нейтрального характера, на 10-е сут. за счет первичных и вторичных продуктов нейтрального характера. При ТТ в условиях применения МТ площадь ожога ассоциирована с содержанием в ране вторичных продуктов ПОЛ в гептановой и изопропанольной фазах, конечных продуктов ПОЛ в изопропанольной фазе, суммарным содержанием продуктов ОМБ, содержанием первичных, вторичных, основного и нейтрального характера продуктов ОМБ.
Статья получена: 03.10.2020
Опубликовано online: 11.11.2020
DOI: 10.24075/vrgmu.2020.070
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 3740