Оригинальное исследование Оценка терапевтического потенциала РНК-интерференции интерстициальной коллагеназы для лечения псориаза
Ю. А. Могулевцева, А. В. Мезенцев, С. А. Брускин
Матриксные металлопротеиназы играют важную роль в поддержании гомеостаза кожи, заживлении ран и инициации воспалительного процесса. При псориазе матриксные металлопротеиназы участвуют в структурных перестройках эпидермиса и регуляции проницаемости микрокапилляров дермы, способствуя инфильтрации кожи клетками иммунной системы. В силу этого умение контролировать активность матриксных металлопротеиназ представляется необходимым для успешного лечения псориаза. Целью данной работы являлась оценка возможных изменений в патогенезе псориаза в результате РНК-интерференции интерстициальной коллагеназы в эпидермальных кератиноцитах. Для этого клетки трансдуцировали лентивирусными частицами, кодирующими в геноме малую интерферирующую РНК. Для анализа уровней экспрессии генов использовали метод полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени». Ферментативную активность определяли методом зимографии. Согласно полученным результатам РНК-интерференция привела к снижению уровня экспрессии гена и ферментативной активности интерстициальной коллагеназы в 20 и 4 раза соответственно. При этом экспрессия гомологичных генов (MMP2, -9 и -12) менялась незначительно. Напротив, нами были показаны изменения в уровнях экспрессии генов цитокератинов (KRT1: 16,89 ± 0,97; KRT14: 2,36 ± 0,19; KRT17: 0,12 ± 0,01; KRT18: 0,56 ± 0,02), инволюкрина (0,79 ± 0,11) и филаггрина (6.99 ± 0,97). Помимо этого, РНК-интерференция вызвала существенное снижение скорости миграции клеток, хотя практически не повлияла на их пролиферацию. Таким образом, терапевтический потенциал малых интерферирующих РНК, специфичных к интерстициальной коллагеназе, заключается в нормализации экспрессии важных для патогенеза псориаза генов (IVL, FLG, KRT1, -14 -17 и -18).
Статья получена: 17.02.2017
Опубликовано online: 19.07.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-03-04
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 5119
Оригинальное исследование Распределение таргетных малых интерферирующих РНК после внутривенного введения
А. Ю. Кузеванова, А. С. Лунева, М. А. Маслов, А. В. Карпухин, А. А. Алимов
Создание лекарственных средств на основе РНК-интерференции предполагает решение ряда задач, включая получение сведений о распределении по органам реципиента вводимых в его организм экзогенных малых интерферирующих РНК (миРНК). Имеющиеся данные по этому направлению исследований не являются полными и получены при помощи изотопных/флуоресцентных меток, которые не позволяют судить о сохранении первичной структуры введенного полимера. Использованный в данной работе метод анализа на основе количественной полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени» позволяет решить эту проблему. Показано, что введенные внутривенно миРНК к гену LIVIN неравномерно распределяются между тканями и демонстрируют зависимое от дозы накопление в органах (исследование проводили на мышах, используя дозы 2,5 и 7,5 мг/кг). Максимальное накопление выявлено в печени и селезенке. Впервые обнаружено, что в этих органах концентрация анализируемой миРНК возрастает во временном интервале между 48 и 96 ч после введения. Это указывает на длительный период циркуляции миРНК в комплексе с катионными липосомами в организме. Полученные сведения актуальны для поиска эффективной терапевтической дозы, схем лечения, а также планирования доклинических и клинических исследований при разработке лекарственных препаратов на основе терапевтических миРНК.
Статья получена: 20.06.2017
Опубликовано online: 19.07.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-03-03
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 4806
Метод Нокдаун генов с использованием малых интерферирующих РНК
Ю. В. Вяхирева, А. Ю. Филатова, И. А. Кривошеева, М. Ю. Скоблов
РНК-интерференция активно используется для решения различных исследовательских задач в биологии и медицине, в частности, для исследования функции генов. Один из распространенных подходов — нокдаун генов с помощью малых интерферирующих РНК (siРНК). Однако единого протокола для этого метода не существует, и данные, получаемые при использовании различных его вариаций, часто обладают низкой воспроизводимостью. В работе обсуждаются теоретические основы указанного метода и приводятся практические рекомендации для постановки экспериментов по нокдауну генов с siРНК.
Статья получена: 25.06.2017
Опубликовано online: 19.07.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-03-02
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 5964
Обзор Длинные некодирующие РНК — перспективная мишень для терапии различных заболеваний
А. Ю. Филатова, П. А. Спарбер, И. А. Кривошеева, М. Ю. Скоблов
На сегодняшний день в мире проводится около 2,5 тысяч клинических исследований препаратов для генной терапии. Несколько из них уже одобрены для клинического применения. Мишенями подавляющего большинства таких препаратов являются хорошо охарактеризованные белок-кодирующие гены. Однако в последние годы появляется всё больше исследований, посвященных длинным некодирующим РНК (днРНК) и их участию в различных клеточных процессах. Из 16 тысяч генов днРНК человека функционально охарактеризовано только около двух сотен. Но уже сейчас показана их возможная роль в развитии более 200 различных заболеваний, при этом в некоторых случаях они являются одним из ключевых звеньев патогенеза. Это делает длинные некодирующие РНК перспективной мишенью для генной терапии. Существующий арсенал молекулярно-биологических методов уже успешно применяют для разработки днРНК-направленных подходов к лечению различных заболеваний. В обзоре рассказывается об основных подходах к генной терапии с использованием днРНК.
Статья получена: 25.06.2017
Опубликовано online: 18.07.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-03-01
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 5538
Оригинальное исследование Возможна ли биолюминесценция у растений?
Е. Б. Гугля, А. А. Котлобай, Е. К. Секретова, П. В. Волкова, И. В. Ямпольский
На основе открытого недавно механизма биолюминесценции высших грибов и сходства структуры люциферина грибов и некоторых метаболитов растений поставлена задача поиска растений, содержащих субстрат(ы) реакции грибной люминесценции. В результате скрининга коллекции растений европейской части России обнаружено 10 видов, экстракты листьев которых проявляют биолюминесцентную активность. Установлено, что изученные виды растений синтезируют не одно, а множество активных соединений. Все люминесцентные субстраты, содержащиеся в растениях, не идентичны грибному люциферину (3-гидроксигиспидину) и химически нестабильны, что препятствует выделению индивидуальных соединений. Данное исследование можно считать первым шагом в создании автономно люминесцентного растения на базе фермент-субстратной системы высших грибов.
Статья получена: 19.02.2017
Опубликовано online: 04.06.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-02-10
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 4868
Клинический случай ИАГ-лазерная пункция при премакулярном кровоизлиянии на обоих глазах у пациента с острым миелобластным лейкозом
И. А. Малов, Н. В. Стренев, Х. П. Тахчиди
Премакулярные кровоизлияния могут возникать по различным причинам и вызывают внезапное одно- или двустороннее снижение зрения. Одним из признанных вариантов лечения является ИАГ-лазерная пункция задней гиалоидной мембраны в зоне кровоизлияния. Авторы представляют случай успешной ИАГ-лазерной пункции премакулярных кровоизлияний на обоих глазах с различной локализацией точки пунктирования у 23-летнего пациента с острым миелобластным лейкозом.
Статья получена: 10.04.2017
Опубликовано online: 02.06.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-02-09
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 4676
Оригинальное исследование Эффективность и безопасность применения отечественного цепэгинтерферона альфа-2b в терапии хронического гепатита С. Опыт реальной клинической практики
С. В. Ткачева, Э. Р. Манапова, Ю. М. Созинова, Ф. М. Якупова, Ю. В. Фазылова
В настоящее время для лечения хронического гепатита С (ХГС) используют как безинтерфероновые, так и интерферонсодержащие схемы противовирусной терапии. Последние достаточно широко используются в России за счет доступности препаратов интерферона широким слоям населения. С 2013 г. в клинической практике используется оригинальный российский препарат — цепэгинтерферон альфа-2b (цепэгИФН альфа-2b; торговая марка «Альгерон», «Биокад», Россия). Целью настоящего исследования являлась оценка эффективности и безопасности цепэгИФН альфа-2b при его применении с рибавирином для лечения пациентов с ХГС. Исследование было проведено в 2014–2016 гг., в нем приняли участие 37 пациентов с ХГС (генотип вируса 1): 22 мужчины и 15 женщин (средний возраст — 42,0 ± 5,2 года). Все они впервые получали комбинированную противовирусную терапию (ПВТ): цепэгИФН альфа-2b в дозе 1,5 мкг/кг/нед. и рибавирин в дозе 15мг/кг/сут. в течение 48 недель. Эффективность ПВТ оценивали по частоте достижения устойчивого вирусологического ответа (УВО) — авиремии через 24 недели после ПВТ. В нашем исследовании УВО достигли 26 пациентов (70,3 %). Зарегистрированные на фоне ПВТ нежелательные явления были характерными для интерферона и рибавирина. Дозу цепэгИФН альфа-2b в связи с развитием нейтропении корректировали 2 пациентам, дозу рибавирина в связи с развитием анемии — 3 пациентам. Полученные результаты позволяют рекомендовать цепэгИФН альфа-2b для включения в схемы комбинированной противовирусной терапии для лечения больных с ХГС.
Статья получена: 09.02.2017
Опубликовано online: 02.06.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-02-08
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 4219
Оригинальное исследование Преобладание Lactobacillus iners в микробиоценозе влагалища женщин с умеренным дисбиозом ассоциировано с наличием клинических признаков инфекционно-воспалительной патологии влагалища
Е. С. Ворошилина, Е. Э. Плотко, Л. В. Хаютин, Н. А. Тищенко, Д. Л. Зорников
Умеренный дисбиоз влагалища является переходным типом вагинального микробиоценоза, для которого характерно увеличение количества и доли условно-патогенных микроорганизмов при сохранении высокой доли лактофлоры — на уровне 20–80 % от общей микробной биомассы. У части женщин данное состояние микробиоценоза не сопровождается клиническими признаками инфекционно-воспалительной патологии влагалища (ИВП), и возникает вопрос о целесообразности коррекции умеренного дисбиоза в этом случае. В исследовании оценивали взаимосвязь между отдельными микробиологическими показателями и наличием клинических проявлений ИВП у пациенток с умеренным дисбиозом вагинальной микробиоты. Были сформированы две группы участниц: группа 1 — пациентки с клиническими признаками ИВП (n = 91), группа 2 — клинически здоровые женщины (n = 44). Средний возраст женщин составил 26,9 ± 6,9 лет. Микробиоценоз исследовали методом полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени». Провели количественную оценку 6 видов лактобацилл в вагинальном отделяемом: Lactobacillus crispatus, L. iners, L. jensenii, L. gasseri, L. johnsonii, L. vaginalis. Было установлено, что L. iners преобладает в микробиоценозе 45 (49,5 %) пациенток с признаками ИВП, тогда как у клинически здоровых женщин преобладание данного вида лактобацилл зафиксировали в 9 (20,5 %) случаях (p = 0,002). L. gasseri, наоборот, достоверно чаще преобладал в образцах, полученных от клинически здоровых пациенток: 23 (52,3 %) случая против 21 (23,1 %) в группе пациенток с клиническими признаками ИВП (p = 0,001).
Статья получена: 09.04.2017
Опубликовано online: 01.06.2017
DOI: 10.24075/brsmu.2017-02-07
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 5695