Оригинальное исследование Определение доли плодовой ДНК в плазме крови беременной женщины с помощью высокопроизводительного секвенирования набора частотных однонуклеотидных полиморфизмов
Е. Шубина , Т. Янкевич, А. Ю. Гольцов, И. С. Мукосей, Т. О. Кочеткова, А. А. Быстрицкий, И. Ю. Барков, Н. К. Тетруашвили, Л. В. Ким, Д. Ю. Трофимов
Неинвазивный пренатальный ДНК-скрининг (НИПС) анеуплоидий по крови матери применяется для выявления хромосомных анеуплоидий (ХА) с 2011 г. Многочисленные клинические исследования показали, что важным параметром при проведении НИПС является доля плодовой ДНК. Целью работы была разработка тест-системы для оценки доли плодовой ДНК с помощью таргетного секвенирования однонуклеотидных полиморфизмов (SNP). По данным исследований международного проекта HAPMAP были отобраны полиморфизмы с высокой частотой встречаемости гетерозиготного генотипа. Для оценки частоты встречаемости отобранных полиморфизмов в российской популяции использовали 827 образцов ДНК доноров. С целью определения доли плодовой ДНК исследовали 87 образцов плазмы крови беременных женщин. Секвенирование проводили на приборах Ion Proton и Ion S5. В ходе работы были определены частоты встречаемости по данным секвенирования пулированных образцов. Проведено сравнение данных о 53 SNP в 87 отдельных образцах. Медиана разницы, полученой различными способами, составила 3,4%. Результаты определения доли плодовой ДНК с помощью SNP сравнивали с данными по Y-хромосоме, корреляция составила 0,7. Таким образом, разработанную тест-систему можно применять для определения доли плодовой ДНК с помощью SNP вне зависимости от пола плода.
Статья получена: 15.04.2018
Опубликовано online: 11.08.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.031
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6103
Клинический случай Множественная реплантация зубов
А. В. Иващенко, И. М. Федяев, А. Е. Яблоков, И. Н. Колганов, Е. И. Баландин, В. П. Тлустенко
В настоящее время одной из альтернатив операции удаления зуба является реплантация. Методика позволяет сохранить зуб, подлежащий удалению, который в последующем может служить опорой для различных ортопедических конструкций. Показаниями к реплантации зуба являются: наличие очага инфекции в периапикальной области при неэффективности консервативных методов лечения, невозможность проведения резекции верхушки корня и т. д. У пациентки С., обратившейся с жалобами на частичное отсутствие зубов, были выявлены значительные разрушения коронковой части зубов верхней и нижней челюстей. После удаления с последующей реплантацией через 3 месяца была выполнена ортопантомограмма. На рентгенографии выявлено равномерное заполнение корневых каналов цементом по всей длине и состоятельная трабекулярная костная ткань в области верхушек корней реплантированных зубов. С опорой на реплантируемые зубы были установлены несъемные металлокерамические конструкции. В последующем проведено протезирование съемными ортопедическими протезами. По результатам проведенного лечения и анализа рентгенологических данных за двухлетний срок наблюдения нами было установлено отсутствие патологической подвижности у реплантированных зубов, состоятельность костной ткани в области их верхушек и стабильность ортопедических конструкций, опорой для которых послужили реплантированные зубы.
Статья получена: 04.04.2018
Опубликовано online: 02.08.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.030
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6042
Оригинальное исследование Влияние полиморфизма NOS3 786C/T на уровень оксида азота у коморбидных больных бронхиальной астмой и гипертонической болезнью
А. В. Шаханов, О. М. Урясьев
В патогенезе бронхиальной астмы и гипертонической болезни значимую роль играет оксид азота, в синтезе которого участвуют ферменты NO-синтазы. Нуклеотидный состав генов может оказывать влияние на активность фермента, поэтому представляется актуальным изучение влияния полиморфизма гена NOS3 786C/T (rs2070744) на уровни оксида азота в крови и выдыхаемом воздухе у больных, страдающих бронхиальной астмой и гипертонической болезнью. В исследовании участвовал 71 пациент. В основную группу входили 24 пациента, страдающих одновременно бронхиальной астмой и гипертонической болезнью. Еще две группы сравнения включали больных с изолированной бронхиальной астмой и больных с изолированной гипертонической болезнью. У всех пациентов определяли полиморфизм NOS3 786C/T, измеряли уровень суммарных метаболитов оксида азота в крови фотоколориметрическим методом в реакции с реактивом Грисса и выявляли уровень выдыхаемой фракции оксида азота электрохимическим методом с помощью портативной тест-системы NObreath. Уровень метаболитов оксида азота в крови пациентов — носителей генотипа CC полиморфизма NOS3 786C/T составил 69,7 (60,0; 70,4) мкмоль/л, генотипа CT — 68,9 (57,7; 77,4) мкмоль/л, генотипа TT — 67,7 (59,7; 79,3) мкмоль/л (p = 0,843). В отдельных исследуемых группах была отмечена отчетливая связь полиморфизма NOS3 786C/T и уровня оксида азота в крови. У больных бронхиальной астмой и больных гипертонической болезнью уровень метаболитов оксида азота в крови достоверно нарастает в ряду CC < CT < TT (p = 0,033 и p = 0,024 соответственно). Таким образом, C-аллель полиморфизма NOS3 786C/T ассоциирована с более низким уровнем метаболитов оксида азота в крови больных, страдающих бронхиальной астмой и гипертонической болезнью.
Статья получена: 20.04.2018
Опубликовано online: 29.07.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.029
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6146
Оригинальное исследование Изучение морфофункциональных изменений фолликулов щитовидной железы крыс в норме и при гипотиреозе после воздействия среднеинтенсивного лазерного излучения
И. В. Смелова, Е. С. Головнева
Проблема гипотиреоза в последнее время не теряет своей актуальности. При лечении тиреопатий успешно используется лазерное облучение щитовидной железы. Эффективность лазерного воздействия зависит от применяемой дозы излучения. Изменение формы и объема структурно-функциональных единиц органа (тиреоцитов и фолликулов) является дозозависимым процессом и отражает их функциональное состояние, влияющее на синтез, накопление и секрецию тиреоидных гормонов. Целью исследования было изучение влияния инфракрасного лазерного облучения средней интенсивности при суммарной плотности дозы с поверхности кожи 112 Дж/см2 и 450 Дж/см2 на морфофункциональное состояние тиреоцитов и фолликулов щитовидной железы в норме и при гипотиреозе. Эксперимент проведен на лабораторных крысах самцах. Показано, что лазерное воздействие изменяет состояние тиреоцитов и фолликулов как интактной щитовидной железы, так и при гипотиреозе. При сравнении эффектов двух изучаемых режимов лазерного воздействия на щитовидную железу с экспериментальным гипотиреозом повышение функции и регенеративных процессов железы отмечено при плотности дозы с поверхности кожи 112 Дж/см2, и торможение при плотности дозы 450 Дж/см2. Полученные результаты могут быть использованы для коррекции гипотиреоза в эксперименте.
Статья получена: 15.02.2018
Опубликовано online: 28.07.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.028
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 10850
Оригинальное исследование Активация CD4+CD39+Т-клеток при колоректальном раке
Г. А. Жулай, А. В. Чуров, Е. К. Олейник, А. А. Романов, П. Н. Семакова, В. М. Олейник
Патогенез колоректального рака (КРР) сопровождается значительными изменениями в состоянии иммунной системы. Однако роль аденозин-A2AR-опосредованного иммуносупрессорного механизма и в частности экспрессии молекулы эктонуклеозидтрифосфат-дифосфогидролазы-1 (ENTPD1), или CD39, в его развитии до конца не изучена. Целью работы было исследование роли СD4+ Т-клеток, прежде всего экспрессирующих CD39 регуляторных Т-лимфоцитов (Treg), в формировании иммунной супрессии при КРР, а также у больных острым панкреатитом (ОП). Экспрессию молекул лимфоцитами крови и опухоль-инфильтрирующими лимфоцитами (ОИЛ) анализировали методом проточной цитометрии. Содержание матричной РНК (мРНК) CD39 в лейкоцитах периферической крови определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени. В результате исследования показано, что у больных КРР накопление периферических CD4+CD39+ клеток происходит на поздних стадиях развития опухоли. Среди ОИЛ количество CD4+ Т-клеток, экспрессирующих молекулу CD39, выше, чем в крови тех же больных. Значительно повышен уровень экспрессии этой молекулы у регуляторных Т-клеток (Treg) больных КРР как на периферии, так и среди ОИЛ. Установлены достоверные связи между содержанием CD4+CD39+ T-клеток и показателями клеточного иммунитета больных КРР. Обнаружено, что уровень мРНК гена CD39 также увеличивался в процессе развития КРР. У больных ОП, напротив, содержание мРНК гена CD39 оставалось на уровне контроля, так же как и количество CD4+CD39+ Т-клеток в периферической крови. Таким образом, можно заключить, что активация CD4+CD39+ Т-клеток в процессе канцерогенеза играет важную роль и требует дальнейшего изучения.
Статья получена: 25.01.2018
Опубликовано online: 25.07.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.027
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6131
Оригинальное исследование Энтеровирусы человека проявляют избирательную онколитическую активность на модели ксенотрансплантатов мультиформной глиобластомы человека в иммунодефицитных мышах
А. О. Желтухин, А. В. Соболева, А. О. Сосновцева, Т. Х. Ле, Г. В. Ильинская, Д. В. Кочетков, А. В. Липатова, П. М. Чумаков
Основным источником возникновения рецидивов мультиформной глиобластомы после хирургического вмешательства являются стволовые клетки, успевающие проникнуть глубоко в ткани мозга. В настоящее время актуален поиск новых подходов для борьбы с ними, в том числе с помощью онколитических вирусов. Целью работы было определение чувствительности к непатогенным энтеровирусам клеток мультиформной глиобластомы человека, поддерживаемых in vitro и в модели мышиных ксенотрансплантатов. Культуры опухолевых клеток глиобластом испытывали на чувствительность к полиовирусу 1 типа (штамм вакцины Сэбина), вирусу Коксаки A7 (штамм ЖЭВ8), Коксаки A9 (штамм ЖЭВ9) и Коксаки B5 (Штамм ЖЭВ12). Количественную оценку репродукции вирусов и их цитолитическую активность проводили заражением монослойных культур клеток глиобластомы. Эффективность уничтожения стволовых клеток глиобластомы определяли по способности клеточных культур глиобластом, обогащенных опухолевыми стволовыми клетками, формировать подкожные опухоли у иммунодефицитных мышей после обработки вирусами. По результатам исследования наиболее выраженная онколитическая и репликационная активность выявлена у вируса Коксаки A7 и полиовируса 1 типа при тестировании в модели культур клеток глиобластом, инфицированных вирусами in vitro, а также in vivo, в модели подкожных опухолевых ксенотрансплантатов на иммунодефицитных мышах. Полиовирус 1 типа и вирус Коксакси A7 предотвращали образование опухолей после того как нейросферные культуры клеток глиобластом преинкубировали с вирусами перед подкожным введением. Вирус Коксаки В5 вызывал лишь частичное сокращение числа опухолей, а Коксаки A9 не влиял на опухолеобразование. Таким образом, ряд штаммов непатогенных энтеровирусов способен уничтожать стволовые клетки глиобластом и представляется перспективным при разработке терапевтических средств для безрецидивного лечения глиобластом.
Статья получена: 26.06.2018
Опубликовано online: 13.07.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.026
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6225
Оригинальное исследование Изменения чувствительности клеток глиобластом человека к онколитическим энтеровирусам при пассировании в культуре
А. В. Соболева, А. В. Липатова, Д. В. Кочетков, П. М. Чумаков
Современная терапия мультиформных глиобластом не приводит к излечению пациентов. В качестве альтернативы перспективны онколитические вирусы (ОВ): они способны уничтожать опухолевые стволовые клетки, источники рецидивов. Однако каждый отдельный штамм ОВ эффективен только в ряде случаев. Для подбора подходящего штамма требуется тестирование чувствительности на живых опухолевых клетках пациента. Целью исследования было изучение изменения чувствительности к вирусам в процессе пассирования опухолевых клеток пациента в культуре. Органные и первичные культуры клеток глиобластом получали из операционного материала больных. Проводили сравнение чувствительности к четырем штаммам непатогенных энтеровирусов (вакцинный штамм полиовируса 1 типа, вирус Коксаки А7, Эховирусы 1 и 12) на первичных культурах, и на клетках, прошедших около 700 удвоений при пассировании. Чувствительность к вирусам оценивали по измерению доли жизнеспособных клеток с помощью МТТ теста через 72 ч после заражения серийными десятикратными разведениями вирусных препаратов. Клетки каждого из четырех пациентов имели строго индивидуальные спектры чувствительности к испытанным вирусным штаммам. Различия в минимальной инфекционной дозе, необходимой для заражения культур, составляли до 105. При пассировании происходили изменения в чувствительности, которые могли приводить к повышению чувствительности к одному вирусу, и понижению — к другому. Различия в чувствительности коррелировали со способностью зараженных клеток продуцировать инфекционный вирус. На основании полученных данных можно заключить, что испытание индивидуальной чувствительности опухолевых клеток пациентов следует проводить на как можно более ранних этапах пассирования, предпочтительно — на первичных культурах.
Статья получена: 16.06.2018
Опубликовано online: 08.07.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.025
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6184
Оригинальное исследование Консервативность последовательностей генов помпы множественной лекарственной устойчивости AcrAB-TolC Escherichia coli как признак вовлеченности в перманентную «уборку» бактериальной клетки
М. В. Каракозова, П. А. Назаров
Помпы множественной лекарственной устойчивсти (МЛУ) помогают бактериям защищаться от неблагоприятного воздействия окружающей среды. Считается, что гены, кодирующие помпы МЛУ, вариабельны и относятся к так называемым генам «роскоши», т. е. предназначены для адаптации бактерий к изменению окружающих условий. Целью работы было проверить насколько консервативны последовательности генов помпы МЛУ. Для этого проводили анализ последовательностей белков AcrA, AcrB и TolC для различных лабораторных штаммов Escherichia coli. Методом выравнивания последовательностей было показано, что штаммы из разных стран, культивируемые в лабораториях уже долгое время, имеют удивительную консервативность последовательностей белков помпы AcrAB-TolC. Она напоминает консервативность генов «домашнего хозяйства», что, по-видимому, говорит о вовлеченности помпы МЛУ AcrAB-TolC в перманентную «уборку» клетки от различных веществ биотического и абиотического происхождения.
Статья получена: 19.02.2018
Опубликовано online: 06.07.2018
DOI: 10.24075/vrgmu.2018.024
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 6288