МЕТОД
Анализ соматических мутаций в генах RAS-каскада свободно циркулирущей ДНК плазмы крови пациентов с колоректальным раком методом усиленной аллель-специфической
Лаборатория молекулярной биологии и цитогенетики,Российский научный центр рентгенорадиологии, Москва
Для корреспонденции: Снигирева Галина Петровна
ул. Профсоюзная, д. 86, г. Москва, 117997; ur.liam@lag_ins
Благодарности: авторы благодарят Андрея Зарецкого из компании «Евроген» (Москва) за помощь и ценные советы при проведении молекулярно- генетического исследования.
Вклад авторов в работу: Е. Н. Телышева — анализ литературы, планирование исследования, сбор, анализ и интерпретация данных, подготовка черновика рукописи; Г. П. Снигирева — планирование исследования, интерпретация данных, подготовка черновика рукописи.
Анализ внеклеточной ДНК (жидкостная биопсия) — перспективное направление в современной медицине, особенно в онкологии. В статье представлены результаты исследования соматических онкоспецифических мутаций в свободно циркулирующей ДНК (сцДНК) плазмы крови пациентов с колоректальным раком стадий I–IV методом усиленной аллель-специфической полимеразной цепной реакции в «реальном времени». Названный метод был разработан специально для анализа биологических образцов, содержащих небольшое количество мутантной опу- холевой ДНК. В исследование включили 46 человек (18 женщин, 28 мужчин) в возрасте 48–86 лет (средний возраст — 67,1 ± 8,8 года). Все пациенты получили хирургическое лечение (радикальное — в 85 % случаев). Молекулярно-генетическое исследование сцДНК плазмы крови проводили на основе результатов стандартного исследования образцов опухолевой ткани. Кровь отбирали до операции и на 5 день после нее. Анализировали мутации в генах KRAS и BRAF, которые были выявлены в ткани опухоли. Результаты исследования показали, что изучаемый метод позволяет выявлять мутации в генах RAS-каскада чаще на стадиях II–IV заболевания, а порог его чувствительности составляет 0,1 %. Исследование сцДНК до и после операции предположительно может давать дополнительную информацию о качестве хирургического вмешательства, появлении метастазов или существовании недиагностированных метастазов. Метод усиленной аллель-специфической ПЦР в «реальном времени» должен быть валидирован и оценен в различных клинических ситуациях.
Ключевые слова: онкология, внеклеточная ДНК, жидкостная биопсия, свободно циркулирующая ДНК, циркулирующая опухолевая ДНК, соматические мутации, неинвазивная диагностика