Авторские права: © 2018 принадлежат авторам. Лицензиат: РНИМУ им. Н.И. Пирогова.
Статья размещена в открытом доступе и распространяется на условиях лицензии Creative Commons Attribution (CC BY).

ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Тестирование моноклональных антител к Т-клеточному рецептору, ассоциированному с анкилозирующим спондилитом

М. А. Израельсон1,3 , А. В. Степанов2 , Д. Б. Староверов1,3 , И. А. Шагина1 , А. К. Мисорин4 , А. В. Евстратьева4 , Е. М. Мерзляк1,3 , Е. А. Богданова1 , О. В. Британова3 , С. А. Лукьянов1
Информация об авторах

1 Отдел молекулярных технологий, Институт трансляционной медицины,
Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва

2 Отдел пептидно-белковых технологий, Институт биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Москва

3 Отдел геномики адаптивного иммунитета, Институт биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Москва

4 BIOCAD, Санкт-Петербург

Для корреспонденции: Ольга Владимировна Британова
ул. Миклухо-Маклая, д. 16/10, г. Москва, 117997; moc.liamg@natirblo

Информация о статье

Финансирование: работа выполнена при поддержке Минобрнауки России, идентификатор соглашения RFMEFI60716X0158.

Статья получена: 13.09.2018 Статья принята к печати: 11.10.2018 Опубликовано online: 05.12.2018
|
Рис. 1. Двухпараметрические гистограммы распределения клеток мононуклеарной фракции крови при окрашивании с помощью антитела против CD3-eFluor405 и 4 вариантов химерных антител против TRBV9, меченых FITC (МА-K1, МА-К2, МА-K3, МА-K4). Каждый вариант моноклонального антитела против TRBV9 был использован в двух концентрациях 3 мкг/мл (А) или 200 нг/мл (Б) на 106 клеток. Специфическая популяция CD3+TRBV9+ обозначена маленьким квадратом. Процент TRBV9+CD3+ клеток показан от всех CD3+ лимфоцитов. В. Окрашивание клеток разными концентрациями химерного антитела МА-К2: 2 нг/мл, 20 нг/мл, 50 нг/мл, 200 нг/мл (сверху вниз)
Рис. 2. А. Схема эксперимента по определению специфического взаимодействия химерного антитела MA-K2 с ТКР при помощи клеточной сортировки и последующего анализа репертуара ТКР сортированных Т-клеток. Две популяции Т-лимфоцитов были собраны: TRBV9+ (синий цвет) и TRBV9- (красный цвет), далее проведен анализ репертуара ТКР этих популяций. Результаты анализа представлены в долевом отношении от всех ТКР, определенных секвенированием в образце. Б. Анализ цитотоксической активности химерного антитела MA-K2 с помощью цитометрического анализа. Показана гейтированная популяция по маркерам CD45+CD3+, прямоугольником показана популяция CD45+ CD3+TRBV9+. В. Определение полуэффективной ЕС50 концентрации MA-K2 в цитотоксическом тесте. Г. Процент мертвых клеток (%TO-Pro3readyflow+) при добавлении 100 нг/мл антитела MA-K2 к PBMC человека и окрашивании реактивом TO-Pro3readyflow. На параметрических гистограммах показаны гейтированные популяции CD4+CD3+- и CD8+CD3+-лимфоцитов. Популяция мертвых клеток выделена черным прямоугольником
Таблица. Взаимодействие исследуемых антител МА-К1, МА-К2, МА-К3, МА-К4 с различными комплексами ТКР. Приведены константы связывания и диссоциации образующихся комплексов. Данные получены с помощью прибора ForteBio Octet RED384