ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Тестирование моноклональных антител к Т-клеточному рецептору, ассоциированному с анкилозирующим спондилитом

М. А. Израельсон1,3, А. В. Степанов2, Д. Б. Староверов1,3, И. А. Шагина1, А. К. Мисорин4, А. В. Евстратьева4, Е. М. Мерзляк1,3, Е. А. Богданова1, О. В. Британова3, С. А. Лукьянов1
Информация об авторах

1 Отдел молекулярных технологий, Институт трансляционной медицины,
Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва

2 Отдел пептидно-белковых технологий, Институт биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Москва

3 Отдел геномики адаптивного иммунитета, Институт биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Москва

4 BIOCAD, Санкт-Петербург

Для корреспонденции: Ольга Владимировна Британова
ул. Миклухо-Маклая, д. 16/10, г. Москва, 117997; moc.liamg@natirblo

Информация о статье

Финансирование: работа выполнена при поддержке Минобрнауки России, идентификатор соглашения RFMEFI60716X0158.

Статья получена: 13.09.2018 Статья принята к печати: 11.10.2018 Опубликовано online: 04.12.2018
|
Рис. 1. Двухпараметрические гистограммы распределения клеток мононуклеарной фракции крови при окрашивании с помощью антитела против CD3-eFluor405 и 4 вариантов химерных антител против TRBV9, меченых FITC (МА-K1, МА-К2, МА-K3, МА-K4). Каждый вариант моноклонального антитела против TRBV9 был использован в двух концентрациях 3 мкг/мл (А) или 200 нг/мл (Б) на 106 клеток. Специфическая популяция CD3+TRBV9+ обозначена маленьким квадратом. Процент TRBV9+CD3+ клеток показан от всех CD3+ лимфоцитов. В. Окрашивание клеток разными концентрациями химерного антитела МА-К2: 2 нг/мл, 20 нг/мл, 50 нг/мл, 200 нг/мл (сверху вниз)
Рис. 2. А. Схема эксперимента по определению специфического взаимодействия химерного антитела MA-K2 с ТКР при помощи клеточной сортировки и последующего анализа репертуара ТКР сортированных Т-клеток. Две популяции Т-лимфоцитов были собраны: TRBV9+ (синий цвет) и TRBV9- (красный цвет), далее проведен анализ репертуара ТКР этих популяций. Результаты анализа представлены в долевом отношении от всех ТКР, определенных секвенированием в образце. Б. Анализ цитотоксической активности химерного антитела MA-K2 с помощью цитометрического анализа. Показана гейтированная популяция по маркерам CD45+CD3+, прямоугольником показана популяция CD45+ CD3+TRBV9+. В. Определение полуэффективной ЕС50 концентрации MA-K2 в цитотоксическом тесте. Г. Процент мертвых клеток (%TO-Pro3readyflow+) при добавлении 100 нг/мл антитела MA-K2 к PBMC человека и окрашивании реактивом TO-Pro3readyflow. На параметрических гистограммах показаны гейтированные популяции CD4+CD3+- и CD8+CD3+-лимфоцитов. Популяция мертвых клеток выделена черным прямоугольником
Таблица. Взаимодействие исследуемых антител МА-К1, МА-К2, МА-К3, МА-К4 с различными комплексами ТКР. Приведены константы связывания и диссоциации образующихся комплексов. Данные получены с помощью прибора ForteBio Octet RED384