ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Сравнительный анализ эффективности общедоступных методов трансфекции модельных клеточных линий для задач биотехнологии

Информация об авторах

1 Институт молекулярной биологии имени В. А. Энгельгардта, Москва, Россия

2 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия

Для корреспонденции: Анастасия Валерьевна Липатова
ул. Вавилова, д. 32/1, г. Москва, 119991, Россия; moc.liamg@vnaavotapil

Информация о статье

Финансирование: проект был поддержан Российским научным фондом (Соглашение № 20-75-10157 от 14 августа 2020 г. «Изучение возможностей получения рекомбинантных штаммов онколитических вирусов с опухоль-специфической репликацией и экспрессией иммуномодулирующих белков»).

Вклад авторов: П. О. Воробьев, Д. В. Кочестков, К. В. Василенко, А. В. Липатова внесли равнозначный вклад в проведение лабораторных экспериментов, подготовку рисунков и интерпретацию результатов.

Соблюдение этических стандартов: исследование проведено в соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации.

Статья получена: 22.04.2022 Статья принята к печати: 30.05.2022 Опубликовано online: 23.06.2022
|

Краткосрочная экспрессия генов является одним из самых широко используемых методов в молекулярной биологии, как в исследовательских проектах, так и для решения задач биотехнологической промышленности. Несмотря на то что существующие коммерческие трансфекционные агенты позволяют добиться эффективной трансфекции и высокой экспрессии целевых генов в клетках, масштабирование производственного процесса часто затруднительно из-за высокой стоимости таких агентов. Хорошо описанные методы катионной или кальций-фосфатной трансфекции доступны и дают воспроизводимые результаты при значительно меньшей себестоимости. Целью исследования было проверить методы кальций-фосфатной трансфекции, катионной трансфекции (PEI) и коммерчески доступного реагента TurboFect на эффективность монотрансфекции и котрансфекции на панели широко используемых клеточных линий, таких как HEK293T, HUH7, BHK-21, CHO, MRC5. Эффективность трансфекции плазмидными конструкциями, несущими различные флуоресцентные белки, оценивали путем проведения проточной цитофлуориметрии. Среди всех методов кальций-фосфатная трансфекция позволяет добиться максимально эффективной доставки плазмидной ДНК во всех клеточных линиях, использованных в нашем исследовании, кроме BHK21 — для нее катионная трансфекция с использованием PEI оказалась эффективнее, и сопоставима по эффективности с кальций-фосфатным методом в клеточных линиях CHO.

Ключевые слова: лентивирусы, трансфекция, кальций-фосфатная трансфекция, полоиэтиленимин, котрансфекция

КОММЕНТАРИИ (0)