ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
Вестник РГМУ
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Сравнительный анализ эффективности общедоступных методов трансфекции модельных клеточных линий для задач биотехнологии
Информация об авторах
1 Институт молекулярной биологии имени В. А. Энгельгардта, Москва, Россия
2 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия
Для корреспонденции: Анастасия Валерьевна Липатова
ул. Вавилова, д. 32/1, г. Москва, 119991, Россия; moc.liamg@vnaavotapil
Информация о статье
Финансирование: проект был поддержан Российским научным фондом (Соглашение № 20-75-10157 от 14 августа 2020 г. «Изучение возможностей получения рекомбинантных штаммов онколитических вирусов с опухоль-специфической репликацией и экспрессией иммуномодулирующих белков»).
Вклад авторов: П. О. Воробьев, Д. В. Кочестков, К. В. Василенко, А. В. Липатова внесли равнозначный вклад в проведение лабораторных экспериментов, подготовку рисунков и интерпретацию результатов.
Соблюдение этических стандартов: исследование проведено в соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации.
Статья получена: 22.04.2022
Статья принята к печати: 30.05.2022
Опубликовано online: 23.06.2022
|
Рис. 1. Оценка жизнеспособности клеточных линий после проведения трансфекции с PEI, Turbofect или КФТ в сравнении с нетрансфецированными клетками методом МТТ-анализа
Рис. 2. Оценка эффективности КФТ и трансфекции PEI плазмидной конструкцией, несущей флуоресцентный белок Katushka, на различных модельных клеточных линиях: HEK293T (А), BHK-21 (Б), CHO DG-44 (В), CHO K-1 (Г), HUH7 (Д), MRC5 (Е). КФТ 6 ч — кальций-фосфатная трансфекция 6 ч инкубации; КФТ 14 ч — 14 ч инкубации
Рис. 3. Оценка эффективности котрансфекции двумя плазмидными конструкциями (eGFP/Katushka) (А) и тремя плазмидными конструкциями (BFP/eGFP/Katushka) (Б) на различных модельных клеточных линиях
Рис. 4. Микрофотографии КФТ двумя генетическими конструкциями, кодирующими флуоресцентные белки (eGFP и Katushka). А. Светлое поле. Б. Katushka. В. eGFP. Г. Совмещенное изображение (увеличение ×40)
Рис. 5. Данные проточной цитометрии для клеточных линий HEK293T (А) и HUH7 (Б), светлый контур — нетрансфецированный контроль, темный — КФТ. Выделены популяции, положительные по флуоресценции соответствующих экспрессируемых белков (eGFP, Katushka, BFP), а также положительные по трем флуоресцентным меткам (Q2)
Рис. 6. Концентрация лентивирусных стоков, полученные на клетках HEK293T после трансфекции различными реагентами
Таблица 1. Состав 2× hepes buffer saline (HBS)
Таблица 2. Количественная оценка доли клеток, трансфецированных двумя плазмидными конструкциями через 48 ч после трансфекции различными методами (выделены лучшие методы из использованных)
Таблица 3. Количественная оценка доли клеток, трансфецированных тремя плазмидными конструкциями через 48 ч после трансфекции различными методами (выделены лучшие методы из использованных)
Примечание: ns — незначимо.
