ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Исследование теплового воздействия фемтосекундных лазерных импульсов на эмбрионы мыши в рамках процедуры вспомогательного хетчинга
Информация об авторах
1 Институт биологии гена Российской академии наук, Москва, Россия
2 Объединенный институт высоких температур Российской академии наук, Москва, Россия
Для корреспонденции: Марина Владиславовна Кубекина
ул. Вавилова, д. 34/5, 119334, г. Москва, Россия; moc.liamg@ymukyram
Информация о статье
Финансирование: работы по проведению манипуляций с эмбрионами при помощи лазера и оценка уровней экспрессии генов, ответственных за синтез белков теплового шока, выполнены при финансовой поддержке РНФ в рамках научного проекта 23-19-00424 на оборудовании УНУ «Лазерный тераваттный фемтосекундный комплекс», входящей в состав ЦКП «Лазерный фемтосекундный комплекс» ОИВТ РАН. Работы по получению эмбрионов были выполнены при финансовой поддержке гранта номер 075-15-2021-668 (от 29.07.2021) УНУ Трансгенбанк.
Вклад авторов: М. В. Кубекина — проведение иммунофлуоресцентного окрашивания и определение уровня экспрессии белков теплового шока, написание статьи; М. А. Филатов — работа с эмбрионами, статистические методы обработки, написание статьи; Ю. Ю. Силаева — общее руководство экспериментом; Д. С. Ситников — проведение лазерной микрохирургии, обработка результатов, написание статьи; все авторы — обсуждение и редактирование статьи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ИБГ РАН (протокол № 1 от 25 сентября 2023 г.) и проведено в строгом соответствии с положениями Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Статья получена: 07.11.2023
Статья принята к печати: 07.12.2023
Опубликовано online: 26.12.2023
|
Рис. 1. Схема фемтосекундного лазерного скальпеля. 1 — фс-лазер, 2 — узел ослабления, 3 — кристал ГВГ, 4 — стеклянная пластина, 5 — фотодиод, 6 — узел телескопа, 7 — механический прерыватель лазерного излучения, 8 — зеркала на длину волны лазерного излучения, 9 — микрообъектив, 10 — моторизованный предметный столик, 11 — чашка Петри с эмбрионами, 12 — конденсор микроскопа, 13 — осветитель, 14 — видеокамера, 15 — инвертированный микроскоп
Рис. 2. Фотографии эмбриона до проведения микрохирургии оболочки (А) и после (Б). Масштабный отрезок — 20 мкм
Рис. 3. Флуоресцентное окрашивание эмбрионов разных групп. Жизнеспособные эмбрионы окрашивались красителем Calcein-AM, нежизнеспособные — Propidium Iodide, ядра жизнеспособных и нежизнеспособных эмбрионов — Hoechst 33342
Рис. 4. Графическое изображение уровня экспрессии генов белков теплового шока в группах отрицательного и положительного контроля, а также в экспериментальной группе эмбрионов. Экспрессия генов белков теплового шока Hsp90aa1 (А) и Hspa5 (Б)
Рис. 5. Радиальные профили температур T(r,z = 0) в различные моменты времени для импульса (А) миллисекундной и (Б) фемтосекундной длительности. Стрелками отмечен размер лазерного пучка по уровню 1/е. Время t отсчитывают от начала действия импульса
Таблица. Праймеры, использованные в исследовании (последовательности указаны в направлении от 5’ к 3’)
