Статья размещена в открытом доступе и распространяется на условиях лицензии Creative Commons Attribution (CC BY).
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Модифицированные микропробирки — перспективная основа для иммобилизации антител иммунозахвата на примере SARS-CoV-2
1 Астраханский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации, Астрахань, Россия
2 Российский университет медицины Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия
3 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г. Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, Россия
4 Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия
5 Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва, Россия
6 Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия
Для корреспонденции: Евгений Олегович Рубальский
ул. Бакинская, д. 121, г. Астрахань, 414000, Россия; moc.liamg@ykslabur.o.e orp.egahp@ykslabur
Финансирование: исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 23-15-20035, https://rscf.ru/project/23-15-20035/
Вклад авторов: Е. О. Рубальский, Р. А. Абдрахманова, Г. Р. Баева, Т. С. Рубальская — экспериментальная часть с модифицированными микропробирками; Д. В. Щебляков, И. А. Фаворская — подготовка моноклональных антител; Е.О. Рубальский, М. В. Лазько, С. В. Поройский, В. А. Гущин — дизайн исследования. Все авторы внесли равный вклад в поиск и анализ информации, подготовку проекта и редактирование рукописи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России (протокол № 7 от 22 февраля 2023 г.)
Иммунозахват антителами на твердой фазе является важным инструментом в иммунологических исследованиях, но традиционные полистироловые планшеты подвержены деформации при термоциклировании и перекрестной контаминации образцов, что снижает точность и воспроизводимость при включении в исследование молекулярно-генетических методов. Разработка альтернативных решений, таких как модифицированные полипропиленовые пробирки с полистироловым покрытием, позволяет устранить эти ограничения. Целью исследования было создать и оценить эффективность нового подхода к иммунозахвату SARS-CoV-2 с использованием модифицированных пробирок. Для анализа использовали моноклональные антитела P2C5 и R107, а также инактивированные штаммы ГК2020/1 (Ухань) и hCoV-19/Russia/MOW-PMVL-51/2021 (Омикрон). Иммобилизацию антител, сорбцию вирусных частиц и выделение РНК проводили с применением модифицированных пробирок, стандартных планшетов и пробирок без покрытия. Основные результаты показали, что модифицированные пробирки с полистироловым покрытием обеспечивали лучший иммунозахват по сравнению с планшетами (p < 0,0001), особенно при использовании антител P2C5, эффективных против различных генетических линий SARS-CoV-2, включая Омикрон. Антитела R107 продемонстрировали ограниченную специфичность, не превышающую уровень контрольной группы с бычьим сывороточным альбумином. Анализ перекрестной контаминации выявил ее наличие в 14 из 288 образцов в планшетах, тогда как в модифицированных пробирках контаминации образцов не было. Таким образом, использованные для высокоточных молекулярных исследований модифицированные пробирки имеют преимущества, так как обеспечивают снижение риска перекрестной контаминации и улучшение эффективности иммунозахвата.
Ключевые слова: моноклональные антитела, SARS-CoV-2, иммунозахват, ОТ-ПЦР, модифицированная поверхность, перекрестная контаминация