
Статья размещена в открытом доступе и распространяется на условиях лицензии Creative Commons Attribution (CC BY).
МЕТОД
Сравнительный анализ биохимических маркеров клеточных органелл сперматозоида человека при помощи конфокальной рамановской спектроскопии
1 ООО «Клиника профессора Здановского», Москва, Россия
2 Институт проблем технологии микроэлектроники и особо чистых материалов, Российской академии наук, Черноголовка, Россия
3 Российский университет медицины, Москва, Россия
Для корреспонденции: Руслан Вадимович Назаренко
moc.liamg@davsurzan
Вклад авторов: Р. В. Назаренко — сбор и анализ данных, написание текста статьи; А. В. Иржак — сбор и анализ данных; Б. Р. Гвасалия, Д. Ю. Пушкарь — редактирование статьи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ АГП им. В. И. Кулакова» (протокол № 10 от 28 октября 2021 г.).
Несмотря на широкое распространение методов исследования структуры и функциональной активности сперматозоидов, их практическое применение в программах экстракорпорального оплодотворения на сегодняшнем этапе достаточно ограничено. Прежде всего, ограничение связано с деструктивным характером методов. Целью работы было исследование возможности конфокальной рамановской спектроскопии в анализе биохимических маркеров клеточных органелл сперматозоида человека. Анализ 176 спектров сперматозоидов, полученных от здоровых доноров спермы в возрасте 18–35 лет, выполняли на конфокальном рамановском микроскопе Senterra фирмы Bruker (Германия). Спектры снимали с акросомы, ядра и шейки сперматозоида. Дополнительно суспензию сперматозоидов подвергали воздействию фокусированного пучка рентгеновского излучения. В результате были выделены пики, присущие ДНК ядра сперматозоида — 1092 см–1 и 780 см–1, характерные для шейки — 748 см–1 (маркер митохондриальной ДНК), для спектров с акросомы характерно изменение формы тройного пика 1420 см–1, 1445 см–1 и 1486 см–1 с преобладанием средней части в области 1445 см–1. Различий в основных рамановских пиках, присущих клеткам после повреждения ДНК при воздействии рентгеновского излучения в течение 5 и 10 мин, по сравнению с интактными образцами отмечено не было. Конфокальная рамановская спектроскопия является перспективным неинвазивным методом исследования ультраструктуры и биохимических процессов сперматозоида.
Ключевые слова: метаболомика, конфокальная рамановская спектроскопия, сперматозоид, фрагментация ДНК, биохимический профиль