Статья размещена в открытом доступе и распространяется на условиях лицензии Creative Commons Attribution (CC BY).
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Сравнительная визуализация связывания тетрапептидов HAEE-CY5 и ЕЕАН-СУ5 c агрегатами Aβ на клетках SH-SY5Y
1 Научно-исследовательский институт трансляционной медицины, Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия
2 Институт биомедицинской инженерии, Университет науки и технологий МИСИС, Москва, Россия
Для корреспонденции: Анна Валерьевна Иванова
ул. Островитянова, д. 1, стр.1, г. Москва, 117513, Россия; ur.xednay@tirofsof.repus
Финансирование: работы выполнены в рамках Государственного задания «Создание радиофармацевтического лекарственного препарата для диагностики болезни Альцгеймера с использованием тетрапептида HAEE в качестве векторной молекулы», регистрационный номер ЕГИСУ НИОКТР 1024110600012-8-3.2.25;3.2.26;3.2.12.
Вклад авторов: А. В. Иванова — обзор литературы, подготовка рукописи; Н. С. Чмелюк — фиксация, подготовка клеточных образцов для съемки на микроскопе, получение и анализ изображений на конфокальном микроскопе; И. А. Кузьмичев — синтез флуоресцентных пептидов Ac-HAEEGGGGK(εCy5)-NH2 и Ac-EEAHGGGGK(ε-Cy5)-NH2; М. И. Шиляева — подготовка образцов клеток; М. А. Абакумов — постановка цели, разработка дизайна исследования, подготовка рукописи; все авторы внесли равнозначный вклад в подготовку публикации, подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE.
В связи с высокой диагностической значимостью β-амилоидных агрегатов при болезни Альцгеймера особый интерес представляют целевые лиганды, способные к специфическому связыванию с патологическими агрегатами Aβ. Целью исследования было провести методом конфокальной микроскопии сравнительную характеристику связывающей способности тетрапептидов HAEE-Сy5 (Ac-His-Ala-Glu-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Lys(ε-Cy5)-NH2) и EEAH-Cy5 (Ac-Glu-Glu-Ala-His-Gly-Gly-Gly-Gly-Lys(ε-Cy5)-NH2) с агрегатами Aβ на клеточной линии нейробластомы человека SH-SY5Y. Показано, что тетрапептид HAEECy5 демонстрирует специфическое связывание с образованием характерных цитоплазматических скоплений и четкой колокализации с амилоидными агрегатами, в то время как пептид EEAH-Cy5 с обращенной последовательностью полностью утрачивает способность к связыванию. Количественный анализ подтвердил высокую специфичность связывания HAEE-Cy5 с агрегатами Aβ (коэффициент колокализации Мандерса 0.58 ± 0.03). Установлено, что N-концевое положение гистидина является критическим детерминантом специфичности взаимодействия. Результаты работы открывают перспективы применения пептида HAEE в качестве платформы для разработки целевых диагностических систем визуализации амилоидной патологии.
Ключевые слова: болезнь Альцгеймера, пептид HAEE, пептид EEAH, агрегаты Aβ, SH-SY5Y