Оригинальное исследование Однодоменное антитело для связывания консервативного эпитопа рецептор-связывающего домена белка Spike коронавируса SARS-CoV-2
П. О. Воробьев, С. В. Тиллиб
В последние три года с помощью разных технологий были разработаны несколько вакцин против COVID-19, а также получено большое число вируснейтрализующих антител к коронавирусу SARS-CoV-2 с целью борьбы с пандемией. Однако применение этих препаратов для профилактики и потенциального лечения сталкивается с существенными проблемами из-за появления новых мутантных вариантов вируса, как более контагиозных, так и ускользающих от иммунной нейтрализации, что постоянно требует обновления вакцин и разработки новых терапевтических антител. Целью данного исследования было использовать технологию создания однодоменных антител (нанотел) для таргетирования наиболее консервативных эпитопов рецептор-связывающего домена (RBD) поверхностного S-белка (шипа, Spike) широкого спектра вариантов SARS-CoV-2. Рекомбинантные белки, соответствующие RBD трех актуальных штаммов SARS-СoV-2, а также полноразмерному S-белку (Wuhan), были использованы в качестве антигенов для иммунизации верблюда с целью индукции образования соответствующих антител и/или в качестве иммобилизуемых белков для последующих перекрестных процедур селекции клонов нанотел с заданной специфичностью методом фагового дисплея. Из генерированной иммунной библиотеки было отобрано нанотело, обладающее свойством эффективно узнавать консервативный участок RBD S-белка широкого спектра вариантов пандемического коронавируса  SARS-CoV-2, включая омикрон. Помимо традиционного использования в иммуноанализе и диагностике, полученное нанотело  потенциально может быть использовано в качестве модуля мишень-специфичного связывания для задержки коронавируса в верхних дыхательных путях человека при разработке новых комбинированных противовирусных препаратов.
Статья получена: 19.12.2022
Опубликовано online: 24.02.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.005
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1438
Оригинальное исследование Адипокины и миокины как индикаторы фенотипов ожирения и их связь с показателями разнообразия микробиома кишечника
А. В. Шестопалов, Л. А. Ганенко, Т. В. Григорьева, А. В. Лайков, И. Ю. Васильев, И. М. Колесникова, Ю. Л. Набока, Н. И. Волкова, С. А. Румянцев
В настоящее время выделяют метаболически здоровое ожирение (МЗО) и метаболически нездоровое ожирение (МНЗО). Жировая и мышечная ткани могут определять фенотип ожирения за счет выработки адипокинов и миокинов. В формировании МЗО участвует и микробное сообщество кишечника. Целью работы было изучить уровни адипокинов и миокинов и их связь с альфа-разнообразием микробиома кишечника при МЗО и МНЗО. Из 265 обследуемых сформированы две группы: здоровые лица и пациенты с ожирением. Последние были разделены на две подгруппы: пациенты с МЗО и пациенты с МНЗО. У обследуемых определяли индекс массы тела, окружность талии, индекс HOMA-IR, уровень адипокинов и миокинов, таксономический состав микробиома кишечника и индексы альфа-разнообразия, оценивали липидный и углеводный обмен. Выявлены статистически значимые различия уровней адипокинов и миокинов, а также их взаимосвязь с показателями разнообразия микробиома кишечника у пациентов с разными фенотипами ожирения. При МЗО и МНЗО уровень адипонектина был значимо ниже (р < 0,05), а лептина и аспросина — выше (р < 0,05) по сравнению со здоровыми лицами. Пациенты с МНЗО имели уровни адипонектина и лептина более низкие (p < 0,05), чем пациенты с МЗО. При МНЗО статистически значимо выше уровень FGF21. Массовый корреляционный анализ при МЗО показал связь между уровнем глюкозы с индексами разнообразия микробиома кишечника, которая отсутствовала при МНЗО, что указывает на утрату влияния микробиоты кишечника на регуляцию уровня глюкозы крови при МНЗО и о различной регуляторной роли микробиоты кишечника в оси «микробиом кишечника — печень — жировая и мышечная ткани» при МЗО и МНЗО. Полученные данные указывают на взаимосвязь между разнообразием микробиома кишечника и фенотипом ожирения.
Статья получена: 19.12.2022
Опубликовано online: 17.02.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.004
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1609
Метод Подход к кластеризации пациентов по микрочиповым данным внутри отдельных локусов с использованием комбинаций вариантов
Л. Н. Юльметова, Н. А. Кулемин, Е. И. Шарова
Дистрофия роговицы Фукса является социально значимым наследственным заболеванием. Более половины случаев в европейской популяции вызваны увеличением числа тринуклеотидных повторов в гене TCF4. Целью исследования было разработать и проверить подход разделения пациентов на группы на основе результатов чип-генотипирования и полногеномного ассоциативного исследования (GWAS). В качестве исходных данных использовали датасеты FECD Genetics Multi-center Study и проекта AREDs в количестве 1721 клинических случаев и 2408 контрольных пациентов. При анализе результатов GWAS было проведено разделение пациентов и группы контроля на две группы методом иерархической кластеризации с учетом предположения, что пациенты с увеличенным числом повторов в гене TCF4 имеют определенные сочетания геномных вариантов (гаплотипов). Показано, что одиночные варианты не могут быть использованы для молекулярно-генетической классификации пациентов с увеличенным числом повторов в гене TCF4 из-за рассогласованности результатов по вариантам. При этом гаплотипный подход превзошел анализируемые варианты по параметру отношения шансов, перекрывая 95%-й доверительный интервал выборок двух экспериментальных исследований. Предложенный метод позволяет продолжать поиск биологически обоснованных сочетаний  геномных вариантов.
Статья получена: 12.12.2022
Опубликовано online: 12.02.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.001
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1278
Оригинальное исследование Выживаемость клеток человека в биомедицинских клеточных продуктах при хранении при комнатной температуре
О. С. Роговая, Е. В. Алпеева, Е. С. Ручко, А. В. Еремеев, Е. А. Воротеляк
Биомедицинские клеточные продукты (БМКП) — дермальный эквивалент кожи (ДЭК) и биологический эквивалент кожи (БЭК) — это аллогенные эквиваленты дермы и кожи человека, применяемые для лечения в случаях критической потери кожи. Одним из важных вопросов разработки БМКП является подбор условий хранения, способствующих увеличению срока их годности для расширения возможностей логистики и использования. Целью исследования было определить срок годности ДЭК и БЭК путем оценки морфологии и жизнеспособности клеток в их составе и уровней секреции ими фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в процессе хранения в физиологическом растворе при комнатной температуре. Используя МТТ-тест и окраску витальным красителем, мы установили, что при хранении обоих видов БМКП в физиологическом растворе снижение жизнеспособности и метаболической активности клеток более чем на 50% происходило к 3–4 суткам хранения, причем в ДЭК быстрее, чем в БЭК. Морфология клеток, выделенных из ДЭК и БЭК после 3 суток хранения, оставалась неизменной. После помещения БМКП в физиологический раствор мезенхимные стволовые клетки в их составе продолжали синтезировать VEGF (показано методом ИФА), что может свидетельствовать о сохранении ими необходимой секреторной активности.
Статья получена: 16.12.2022
Опубликовано online: 30.01.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.003
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1673
Оригинальное исследование Исследование влияния микродиссекции блестящей оболочки эмбрионов млекопитающих на ее толщину
Д. С. Ситников, И. В. Ильина, М. А. Филатов, Ю. Ю. Силаева
Блестящая оболочка (zona pellucida, ZP) — динамически меняющийся объект, играющий важную роль на преимплантационной стадии развития эмбриона. Ее толщина может оказывать влияние на успешность имплантации и частоту наступления беременности, в ряде исследований ее рассматривают как прогностический критерий. Целью работы было исследовать динамику толщины блестящей оболочки эмбриона мыши в результате процедуры вспомогательного лазерного хетчинга (ВЛХ), когда нарушение целостности ZP проводят на стадии бластоцисты. Для микрохирургии оболочки использовали импульсы излучения фемтосекундной длительности. Измерение толщины оболочки проводили как на стадии микрохирургии бластоцисты (~Е3.5, т. е. 3,5 дня эмбрионального развития), так и на стадии вылупления (~Е5). Обнаружены статистически значимые различия толщины ZP эмбрионов в контрольной группе — с 6,21 мкм (Е3.5) до 5,4 мкм (Е5). В группе, подвергавшейся ВЛХ, изменения толщины с 6,6 мкм (Е3.5) до 6,2 мкм (Е5) оказались статистически не значимыми. Отслеживание толщины ZP индивидуального эмбриона от стадии бластоцисты до стадии вылупления позволило оценить коэффициент истончения для контрольной и экспериментальной групп. Полученные данные свидетельствуют о снижении предела прочности оболочки при проведении ВЛХ и могут служить базисом для последующих исследований ее свойств в случае применения протоколов криоконсервации эмбрионов.
Статья получена: 09.11.2022
Опубликовано online: 27.01.2023
DOI: 10.24075/vrgmu.2023.002
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1375
Оригинальное исследование Обоснование использования несъемных ретейнеров на основании анализа размеров коронок резцов и клыков
М. А. Постников, А. В. Бутвиловский, А. А. М. Алшарифи, А. В. Мадатян, И. С. Копецкий, Д. А. Еремин
При планировании стоматологического лечения необходимо учитывать анатомические особенности зубов. Необходимость постоянного мониторинга изменчивости зубочелюстной системы определяет актуальность данной работы. Целью работы было оценить размеры коронок фронтальной группы зубов с помощью одонтометрии. Получены двухслойные одноэтапные оттиски и отлиты диагностические модели переднего участка челюстей у 50 мужчин и 50 женщин в возрасте 18‒24 лет. Определены абсолютные значения размеров коронок резцов и клыков. Для оценки редукции латеральных резцов вычислен межрезцовый индекс (Ii) по зубам 22 и 21, половой диморфизм определен по формуле Garn‒Lewis. Установлено, что различия мезиодистальных размеров коронок одноименных зубов правой и левой стороны отсутствуют (р > 0,05). Мезиодистальные размеры коронок статистически значимо убывают в ряду: верхние центральные резцы → верхние клыки → нижние клыки и верхние латеральные резцы → нижние латеральные резцы → нижние центральные резцы. Степень выраженности редукции латеральных резцов низка (Ii = 74,9) и более выражена у мужчин, чем у женщин. У обследованных пациентов среди передних зубов наибольшая высота коронки свойственна верхним центральным резцам и нижним клыкам, меньшая ― верхним клыкам, а наименьшая ― верхним латеральным резцам, нижним центральным и латеральным резцам. У мужчин высота коронок нижних клыков, верхних резцов и клыков статистически значимо (р < 0,001) больше, чем у женщин. Полученные параметры коронок свидетельствуют об их достаточной высоте и мезиодистальных размерах, что в совокупности с низкой степенью выраженности редукции латеральных резцов обосновывает возможность изготовления несъемных ретейнеров прямым методом. Данные могут быть использованы и на этапе планирования стоматологического лечения.
Статья получена: 11.11.2022
Опубликовано online: 31.12.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.069
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1523
Оригинальное исследование Эффективность фавипиравира и молнупиравира против новых вариантов SARS-CoV-2 в системах in vitro и in vivo
А. Э. Синявин, Л. И. Руссу, Д. В. Васина, Е. В. Шидловская, Н. А. Кузнецова, В. А. Гущин, А. Л. Гинцбург
Пандемия заболевания COVID-19 остается важной глобальной проблемой общественного здравоохранения, которая приводит к сотням миллионов случаев заболевания и миллионам летальных исходов. По всему миру активно идут разработка и исследования специфичных ингибиторов SARS-CoV-2 для лечения данной инфекции. Такие препараты, как фавипиравир и молнупиравир, проявлящие специфичную противовирусную активность против SARS-CoV-2, уже применяют для лечения пациентов. Однако имеются ограниченные данные об их эффективности, особенно против новых генетических вариантов возбудителя COVID-19. Целью исследования было изучить пртивовирусный эффект этих препаратов с использованием экспериментальной модели инфекции SARS-CoV-2 на культуре клеток Vero E6 in vitro и животной модели инфекции с использованием сирийских хомячков. Установлено, что молнупиравир оказывает выраженное ингибирующее действие против различных вариантов вируса SARS-CoV-2 со значениями IC50 от 16,51 до 7,88 μМ in vitro и снижает инфекционный титр вируса в легких животных на ~1,5 Log10 in vivo, в то время как фавипиравир проявляет более низкую активность и выраженную токсичность. Полученные результаты указывают на необходимость дальнейших исследований в направлении подбора дозировок и кратности применения.
Статья получена: 05.12.2022
Опубликовано online: 31.12.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.071
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1663
Оригинальное исследование Прямое масс-спектрометрическое профилирование менингиом: интраоперационный мониторинг на основе онкометаболитов
Д. С. Бормотов, М. А. Шамраева, А. А. Кузин, E. В. Шамарина, В. А. Елиферов, С. В. Силкин, Е. В. Жданова, С. И. Пеков, И. А. Попов
Основным методом лечения менингиом на первом этапе является нейрохирургическое вмешательство с максимальной радикальностью. Для повышения полноты резекции в настоящее время разрабатывают различные подходы интраоперационной диагностики, в частности, опирающиеся на принципы молекулярного профилирования. Основанные на масс-спектрометрии с прямой ионизацией, подобные методы демонстрируют свою эффективность на различных видах опухолей, однако особенности молекулярного строения и механические характеристики менингиом не позволяют напрямую транслировать протоколы, разработанные для других нозологий. Целью работы было провести сравнение возможностей применения трех методов прямой ионизации для исследования образцов менингиом: метода прямого спрея с ткани, метод картриджной экстракции и метода ионизации с поверхности сферического пробоотборника. Для этого анализировали липидный и метаболический профиль тканей менингиом, иссеченных в ходе планового нейрохирургического вмешательства. Было показано, что для анализа липидных компонент молекулярного профиля оптимальным для клинического применения оказывается метод картриджной экстракции, отличающийся наиболее простой реализацией и максимальной информативностью. Для анализа онкометаболитов с малой молекулярной массой лучшим выбором является метод ионизации с поверхности сферического пробоотборника, обеспечивающий высокую чувствительность и наилучшую производительность масс-спектрометрического комплекса.
Статья получена: 27.11.2022
Опубликовано online: 30.12.2022
DOI: 10.24075/vrgmu.2022.072
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 1339