Оригинальное исследование Модифицированные микропробирки — перспективная основа для иммобилизации антител иммунозахвата на примере SARS-CoV-2
Е. О. Рубальский, Р. А. Абдрахманова, Г. Р. Баева, Т. С. Рубальская, М. В. Лазько, С. В. Поройский, Д. В. Щебляков, И. В. Фаворская, В. А. Гущин
Иммунозахват антителами на твердой фазе является важным инструментом в иммунологических исследованиях, но традиционные полистироловые планшеты подвержены деформации при термоциклировании и перекрестной контаминации образцов, что снижает точность и воспроизводимость при включении в исследование молекулярно-генетических методов. Разработка альтернативных решений, таких как модифицированные полипропиленовые пробирки с полистироловым покрытием, позволяет устранить эти ограничения. Целью исследования было создать и оценить эффективность нового подхода к иммунозахвату SARS-CoV-2 с использованием модифицированных пробирок. Для анализа использовали моноклональные антитела P2C5 и R107, а также инактивированные штаммы ГК2020/1 (Ухань) и hCoV-19/Russia/MOW-PMVL-51/2021 (Омикрон). Иммобилизацию антител, сорбцию вирусных частиц и выделение РНК проводили с применением модифицированных пробирок, стандартных планшетов и пробирок без покрытия. Основные результаты показали, что модифицированные пробирки с полистироловым покрытием обеспечивали лучший иммунозахват по сравнению с планшетами (p < 0,0001), особенно при использовании антител P2C5, эффективных против различных генетических линий SARS-CoV-2, включая Омикрон. Антитела R107 продемонстрировали ограниченную специфичность, не превышающую уровень контрольной группы с бычьим сывороточным альбумином. Анализ перекрестной контаминации выявил ее наличие в 14 из 288 образцов в планшетах, тогда как в модифицированных пробирках контаминации образцов не было. Таким образом, использованные для высокоточных молекулярных исследований модифицированные пробирки имеют преимущества, так как обеспечивают снижение риска перекрестной контаминации и улучшение эффективности иммунозахвата.
Статья получена: 29.11.2024
Опубликовано online: 28.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.068
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 714
Оригинальное исследование Влияние опухоли на клеточный цикл и дифференцировку гемопоэтических стволовых клеток
А. А. Актанова, М. В. Быкова, И. П. Скачков, В. В. Денисова, Е. А. Пашкина
На сегодняшний день существует теория о том, что пролиферативный потенциал гемопоэтических стволовых клеток истощается, а баланс коммитированных предшественников смещается в сторону супрессоров в ходе развития онкологии, однако дифференцировка гемопоэтических стволовых клеток может варьироваться в зависимости от типа, локализации и специфики микроокружения опухоли. Целью исследования было оценить влияние опухолей различного генеза на CD34+-гемопоэтические стволовые клетки (n = 10). С помощью метода проточной цитометрии проводили анализ клеточного цикла и дифференцировки клеток как через прямой контакт с опухолью, так и через обмен только гуморальными факторами в трансвеллах. В ко-культуре с К562 количество ГСК, находящихся в синтетической фазе, составило 2,1%, в контроле — 11,2% (p = 0,01); в ко-культуре с SK-mel37 количество клеток, находящихся в фазе G2–M клеточного цикла, снижалось до 0,3% (p < 0,05). 1301 и К562 направляли дифференцировку ГСК в сторону гранулоцитарно- макрофагальных предшественников (p <0,05), а 1301 и SK-mel37 в сторону общих мультипотентных предшественников. Интересно, что после инкубации с К562 в трансвеллах статистически значимо увеличивалось количество плюрипотентных гемопоэтических стволовых клеток в два раза по сравнению с контролем (24,17% и 10,19% соответственно). Таким образом, свойства гемопоэтических клеток могут меняться как от вида опухоли, так и от способа взаимодействия с ними.
Статья получена: 02.12.2024
Опубликовано online: 27.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.065
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 805
Оригинальное исследование Опыт внедрения протокола у детей с риском инвазивного микоза ECMM EQUAL Scores
У. В. Лукаш, А. В. Власова, В. В. Горев, О. А. Тиганова, А. А. Быстрова, М. М. Каменев, К. А. Хасанова, Н. П. Денисенко, Д. А. Сычев
Для улучшения качества лечения инвазивных микозов и оценки соблюдения диагностического алгоритма в 2018 г. предложен метод ECMM (EQUAL Scores). Практический опыт применения у детей в настоящее время не представлен. Целью работы было оценить распространенность инвазивного микоза в детском стационаре, атрибутивную летальность у детей с инвазивным микозом и проанализировать динамику потребления противогрибковых препаратов. Разнонаправленное наблюдательное исследование выполнено в течение двух лет: ретроспективная часть в период с 01.01.2022 по 31.12.2022 и проспективная — с 01.01.2023 по 31.08.2024. Оценку соответствия противогрибковой профилактики и эмпирической терапии инвазивного микоза установленной группе риска пациента проводили методом ECMM (EQUAL Scores), оценку потребления противогрибковых препаратов — методом ATC/DDD-анализа. За период наблюдения в течение 20 месяцев выжили 78 детей, умерли — 20, наблюдение продолжается. Атрибутивная летальность составила 25,6%. Средневзвешенная абс. оценка по методу ECMM (EQUAL Scores) для кандидоза составила 8,4 (38%), для аспергиллеза — 6,6 (24%) и для мукормикоза — 9,85 (31%) от допустимой. Изучена динамика потребления противогрибковых препаратов методом ATC/DDD-анализа за 2022 и 2023 г. «до» и «после». Сделан вывод, что внедрение метода ECMM для диагностики инвазивного микоза привело к значительному увеличению числа выявленных случаев с 5 случаев в год до 98 случаев в год со снижением атрибутивной летальности с 60% до 25,6% соответственно. Индекс NNT при использовании метода ECMM составил 2,9. До внедрения метода ECMM потребление противогрибковых препаратов в 2022 г. составляло 30,3 ЧДТ (в стандартизованной суточной дозе) на 100 койко-дней, после внедрения в 2023 г. — 54,7 ЧДТ (в стандартизованной суточной дозе) на 100 койко-дней.
Статья получена: 15.11.2024
Опубликовано online: 26.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.067
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 656
Оригинальное исследование Оценка эффективности этиотропной терапии линезолидом и бактериофагом на мышиной модели стафилококковой инфекции
М. А. Корниенко, В. В. Кузин, Н. К. Абдраймова, Р. Б. Городничев, Е. А. Шитиков
Staphylococcus aureus — возбудитель широкого спектра инфекций, включая тяжелые системные заболевания, и часто характеризуется множественной лекарственной устойчивостью. В условиях растущей антибиотикорезистентности перспективным методом лечения стафилококковых инфекций является применение бактериофагов, особенно в сочетании с антибиотиками. Целью работы было оценить синергетический эффект линезолида и бактериофага vB_SauM-515A1 при лечении системной инфекции у мышей BALB/c. С использованием 36 животных были подобраны оптимальный способ введения и инфицирующая доза микроорганизма (внутривенно 5 × 108 КОЕ/мышь), а также установлены пороговые концентрации антимикробных агентов при монотерапии. Оценку проводили по результатам исследования обсемененности внутренних органов (почки, селезенка) и крови. Для оценки комбинированного эффекта этиотропного действия линезолида (10 мг/кг массы животного) и фага (2 × 107 БОЕ/мышь) эксперимент проводили на контрольной и экспериментальных группах (по 12 особей в группе), получавших внутрибрюшинно монотерапию и комбинированное лечение через 2, 8, 18, 24 ч после заражения. Комбинированная терапия продемонстрировала более выраженный эффект: снижение бактериальной нагрузки в почках на два–три порядка по сравнению с монотерапией в первые сутки терапии. Таким образом, совместное использование линезолида и бактериофагов перспективно для лечения инфекций, вызванных S. aureus, и может повысить эффективность лечения и снизить риск побочных эффектов применения высоких доз антибиотиков.
Статья получена: 06.11.2024
Опубликовано online: 25.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.062
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 711
Оригинальное исследование Воздействие литических бактериофагов семейств Herelleviridae и Rountreeviridae на биопленки Staphylococcus aureus
Н. К. Абдраймова, Е. А. Шитиков, М. В. Малахова, Р. Б. Городничев, М. А. Корниенко
Staphylococcus aureus вызывает широкий спектр инфекций и часто характеризуется множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ). Лечение стафилококковых инфекций дополнительно осложнено способностью бактерии формировать биопленку, которая защищает ее от антимикробных агентов и иммунной системы. Одной из перспективных стратегий борьбы с бактериями, обладающими МЛУ и биопленкообразующей активностью, является применение бактериофагов. Целью исследования было оценить влияние литических фагов vB_SauM-515A1 (род Kayvirus, семейство Herelleviridae) и vB_SauP-436A (род Rosenblumvirus, семейство Rountreeviridae) на биопленки клинических штаммов S. aureus. Исследование включало 20 штаммов восьми сиквенс-типов, из которых 45% (9/20) относились к MRSA, а 35% (7/20) обладали МЛУ. Все штаммы продемонстрировали способность к биопленкообразованию, причем 65% (13/20) являлись сильными продуцентами биопленки. В геномах всех образцов обнаружены гены icaADBC-оперона, ответственного за синтез полисахаридного межклеточного адгезина. Воздействие бактериофагов на планктонные клетки бактерий показало, что 70% (14/20) штаммов были чувствительны к фагу vB_SauM-515A1, а 50% (10/20) — к фагу vB_SauP-436A. При этом 24-часовая обработка биопленок чувствительных штаммов фагом vB_SauM-515A1 в 64,3% (9/14) случаев приводила к увеличению биомассы биопленки, тогда как фаг vB_SauP-436A, напротив, достоверно снижал количество биопленки у 40% (4/10) штаммов. Полученные результаты подчеркивают неоднозначность взаимодействия бактериофагов с биопленками S. aureus и указывают на необходимость дальнейших исследований для оптимизации фаговой терапии в отношении биопленкообразующих штаммов.
Статья получена: 14.11.2024
Опубликовано online: 24.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.061
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 702
Оригинальное исследование Комплексное антибактериальное действие ферментов на биопленки Staphylococcus aureus
А. А. Загоскин, Р. А. Авакова, Л. Ф. Резвых, М. В. Захарова, Э. К. Мубаракшина, Р. А. Иванов, М. О. Нагорных
Широкое использование антибиотиков в медицине и сельском хозяйстве значительно ускорило темпы возникновения бактерий со множественной устойчивостью к антибиотикам. Поскольку к традиционным антибиотикам довольно быстро возникает резистентность, одним из перспективных направлений является разработка альтернативных антимикробных препаратов, обладающих иными механизмами действия на бактерии. Ферменты c бактерицидным действием могут быть одним из вариантов таких антибактериальных средств. Целью работы было получить комбинированные препараты рекомбинантных белков, активных в отношении бактерий и их биопленок. С помощью подходов генной инженерии были получены растворимые формы пяти рекомбинантных белков. Два из них обладают бактериолитическим эффектом (эндолизины LysK и PM9 из бактериофагов Staphylococcus aureus), остальные способны разрушать внеклеточный ДНК-матрикс у биопленок (две неспецифические нуклеазы NucA, а также ДНК-специфичная дезоксирибонуклеаза I). Показано, что природный эндолизин PM9 с усеченным каталитическим доменом обладает меньшей в 4 раза бактериолитической эффективностью по сравнению с полноразмерным вариантом LysK. С помощью сравнительного анализа выявлена в 1,5–2 раза большая эффективность неспецифических нуклеаз для разрушения бактериальных биопленок по сравнению с ДНК-специфичной дезоксирибонуклеазой I. Продемонстрировано, что одновременное использование эндолизинов и нуклеаз оказывает синергичное антибактериальное действие и разрушает биопленки патогенной бактерии Staphylococcus aureus. Полученные результаты показывают перспективность разработки антибактериальных препаратов на основе рекомбинантных белков.
Статья получена: 25.11.2024
Опубликовано online: 23.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.064
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 851
Оригинальное исследование Динамика маркеров воспаления на начальных стадиях хронической болезни почек при сахарном диабете 1-го типа
М. В. Осиков, Л. А. Эфрос, Л. Ю. Журавлева, А. А. Федосов
Сахарный диабет (СД) — один из основных факторов, способствующих развитию и усугублению хронической болезни почек (ХБП). Точные и удобные маркеры для раннего выявления, оценки прогрессирования и надлежащего контроля терапии ХБП у лиц с СД ограничены показателями скорости клубочковой фильтрации (СКФ) и альбуминурией. В связи с ролью хронического воспаления в патогенезе СД и ХБП целью работы было изучить показатели воспалительного процесса и их взаимосвязь с СКФ у больных СД 1-го типа (СД1) при ранних стадиях ХБП. В исследовании участвовали здоровые люди (n = 14), больные СД1 без признаков ХБП (n = 30), а также больные СД1 с 1-й стадией ХБП (n = 60), 2-й стадией ХБП (n = 38) и 3-й стадией ХБП (n = 31). СКФ рассчитывали по формуле СКD-ЕРI (рСКФ), в сыворотке иммуноферментным методом определяли концентрацию IL1β и TNFα, С-реактивного белка (С-РБ), а также концентрацию церулоплазмина (ЦП), рассчитывали индекс нейтрофилы/лимфоциты, лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ). Установлено, что в сыворотке повышается концентрация IL1β, TNFα, С-РБ и ЦП, увеличивается ЛИИ, индекс нейтрофилы/ лимфоциты. Выраженность воспалительного процесса и острофазового ответа прогрессирует и максимальна при 3б стадии ХБП, когда концентрация в сыворотке IL1β увеличивается в 2,4 раза (р = 0,042), TNFα — на 34% (р = 0,005), С-РБ — в 33 раза (р < 0,000), ЦП — на 73% (р = 0,008), ЛИИ — в 8,4 раза (р < 0,000), индекс нейтрофилы/лимфоциты — в 5 раз (р = 0,013). Интегральный показатель функции почек рСКФ снижается по мере увеличения содержания в сыворотке вышеперечисленных показателей. Таким образом IL1β, TNFα, С-РБ, ЦП, ЛИИ и индекс нейтрофилы/лимфоциты можно считать доступными и информативными показателями оценки воспалительного процесса, возрастающими по мере прогрессирования начальных стадий ХБП у больных СД1.
Статья получена: 24.10.2024
Опубликовано online: 23.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.060
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 798
Оригинальное исследование Сравнительный анализ способов расчета торической интраокулярной линзы у пациентов после сквозной кератопластики
М. В. Синицын, А. А. Воскресенская, Н. А. Поздеева
Расчет торической интраокулярной линзы (тИОЛ) у пациентов после сквозной кератопластики (СКП) вызывает ряд сложностей. Целью исследования было провести сравнительный ретроспективный анализ различных способов расчета тИОЛ при факоэмульсификации катаракты (ФЭК) у пациентов после СКП. Был проведен анализ историй болезни 36 глаз (36 пациентов) после СКП, на которых была выполнена ФЭК с имплантацией тИОЛ. Все тИОЛ были пересчитаны четырьмя способами. В  группе 1 расчет тИОЛ проводили с применением данных кератометрии передней поверхности роговичного трансплантата, измеренных при помощи кератотопографа, и задней поверхности роговичного трансплантата — при помощи оптической когерентной томографии роговицы или шаймпфлюг-кератотопографа). В группе 2 измерение кератометрии обеих поверхностей роговичного трансплантата выполняли при помощи шаймпфлюг-кератотопографа, в группе 3 — на ОКТ роговицы, в группе 4 — при помощи кератотопографа. Для расчета тИОЛ в группах 1–3 применяли онлайн-калькулятор Barrett True — K Toric Calculator, в группе 4 — The Kane Formula. Была отмечена статистически значимая разница по значениям сферического и цилиндрического компонентов рефракции между исследуемыми группами (p < 0,05). Наибольшая предсказуемость расчета тИОЛ обнаружена в группе 1: попадание в послеоперационную рефракцию по сферическому компоненту в пределах ±0,5 дптр — в 58% глаз и в пределах ±1,0 дптр — в 67% глаз, по цилиндрическому компоненту — в пределах –0,5 дптр — в 56% глаз и в пределах –1,0 дптр — в 89% глаз. Таким образом, наибольшая предсказуемость расчета тИОЛ была отмечена у пациентов группы 1.
Статья получена: 11.11.2024
Опубликовано online: 22.12.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.063
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 953