Митохондриальная дисфункция является ключевым драйвером развития нейродегенерации. Целью исследования было оценить протективный потенциал стимуляции EPOR/CD131, гетеродимерного рецептора эритропоэтина (EPO), при нейродегенерации, вызванной нарушением функции митохондрий. В качестве агонистов EPOR/CD131 были использованы EPO или pHBSP, эффективность которых оценивали в условиях in vivo и in vitro. В модели ротенон-индуцированной ретинопатии однократная инъекция 10 мкг/кг EPO или 5 мкг/кг pHBSP привела к значительному снижению дегенерации ганглионарных клеток сетчатки (p < 0,05). Кроме того, инкубация в 500 нМ растворах EPO и pHBSP резко увеличила выживаемость первичной мышиной нейроглиальной культуры, обработанной ротеноном (p < 0,005). Примечательно, что применение агонистов EPOR/CD131 привело к увеличению экспрессии мРНК LC3A, ATG7, Beclin-1, Паркина и BNIP3, что свидетельствует об активации аутофагии и митофагии как потенциальном механизме митопротективного действия.
ПРОСМОТРЫ 392
Изучение регуляции иммунного ответа на фоне терапии блокаторами TNF при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК) у детей остается актуальной проблемой. Целью исследования было изучить экспрессию CD39/CD73 в субпопуляциях лимфоцитов (регуляторных Т-клеток (Treg) — CD4+CD127lowCD25high; активированных Т-клеток (Tact) — CD4+CD25+CD127high; Th17-лимфоцитов — CD4+CD161+CD3+) периферической крови у детей с ВЗК (с болезнью Крона (БК), n = 34; с язвенным колитом — n = 33), принимавших блокаторы TNF,  и у 45 условно здоровых детей. Результаты представлены в виде медианы (Me) и квартилей (Q25–Q75). С помощью многоцветной цитометрии показано, что у детей с ВЗК наибольшее количество CD39+ выявлено в популяции Treg — 31% (15–38), наименьшее — в Tact 4% (1–7), а наибольшее количество CD73+ — в Tact 13% (8–21). Соотношение экспрессии CD39 и CD73 у пациентов с ВЗК, так же как и в группе сравнения, зависело от популяции клеток. Экспрессия CD39 в Treg, Tact и Th17 у пациентов с ВЗК не зависела от возраста ребенка. В группе детей с БК в обострении относительно группы сравнения получено снижение экспрессии CD39 в Treg (12% (9–23) против 35% (28–39), р = 0,000001). У детей в ремиссии БК экспрессия CD39 в Treg достоверно выше, чем при обострении (31% (27–40) против 12% (9–23); р = 0,000094)). Между группой пациентов в ремиссии и группой сравнения достоверных различий выявлено не было, за исключением снижения экспрессии CD73 в Treg при БК. Полученные результаты показывают, что экспрессия CD39 и CD73 в популяциях CD4+-лимфоцитов в значительной степени связана с течением заболевания, с обострением или ремиссией, и, соответственно, с эффективностью проводимой анти-TNF-терапии.
ПРОСМОТРЫ 366
Основной проблемой при гипоксической ишемической энцефалопатии новорожденных (ГИЭ) являются ранняя дифференциальная диагностика, прогнозирование и классификация заболевания, от результатов которых напрямую зависит дальнейший метод терапии, в частности, назначение терапевтической гипотермии. Существует прямая зависимость времени начала терапевтической гипотермии и долгосрочного неврологического исхода: чем раньше начата терапевтическая гипотермия, тем лучше прогноз для пациента. В обзоре проанализированы последние достижения в области системной биологии, направленные на раннюю дифференциальную диагностику ГИЭ в дополнение к клиническим: применение протеомных и метаболомных биомаркеров, а также внеклеточных везикул, для которых установлена связь с тяжестью ГИЭ и прогнозом исхода. Выявление селективных маркеров повреждения головного мозга у новорожденных в первые часы жизни затруднено из-за системного влияния гипоксии на весь организм. Особый интерес представляют метаболомные исследования крови новорожденных с использованием хромато-масс-спектрометрии, позволяющие анализировать сотни метаболитов на небольшом количестве биологического образца и определять паттерны, соответствующие повреждению мозга, что будет способствовать более точной и своевременной постановке диагноза ГИЭ для назначения терапевтической гипотермии.
ПРОСМОТРЫ 399
Поиск эффективных фармакофоров для лечения ишемического инсульта актуален в связи с высокой распространенностью и смертностью от этого заболевания. Оптимизация сценариев доклинических исследований перспективных нейопротекторов средствами математического моделирования с использованием информационно-компьютерных технологий представляет собой отдельную актуальную задачу. Целью исследования было разработать препаратоориентированную математическую модель в виде системы ОДУ, реализовать ее in silico в виде программного кода на языке MATLAB и адаптировать к экспериментальным данным, полученным in vivo на крысах. В работе проведено исследование in silico фармакокинетики порфиринфуллереновых нанокатионитов, высвобождающих 25Mg2+ типа РМС16. Разработана пятикомпартментная математическая модель, которую можно использовать для прогнозирования распределения наночастиц в органах и тканях, расчета оптимальных дозировок, периодичности введения и т. д. Представлены расчетные кривые распределения РМС16 в мозге, печени и сердце. Достигнуто хорошее соответствие полученных in silico фармакокинетических кривых c результатами экспериментов in vivo на крысах, у которых моделировали инсульт. Доказано преодоление наночастицами РМС16 гематоэнцефалического барьера. 
ПРОСМОТРЫ 417
Причины неэффективности гормональной терапии пролиферативных процессов эндометрия (ППЭ) в постменопаузе остаются неясными. Влияние гормональной терапии ППЭ на активность иммунной системы достаточно не изучено. Целью работы было на основании результатов исследования экспрессии генов рецепторов эстрадиола и прогестерона в ткани эндометрия, клетках мононуклеарной фракции периферической крови (МНФК) определить целесообразность и возможность назначения гормональной терапии ППЭ у пациенток в постменопаузе. Обследовали 92 пациентки в постменопаузе с ППЭ: с железисто-фиброзными полипами — 37; с гиперплазией без атипии (ГЭ) — 7; атипической гиперплазией (АГЭ) — 8; умереннодифференцированной аденокарциномой — 31; высокодифференцированной аденокарциномой — 9. В МНФК и образцах ткани эндометрия исследовали экспрессию ER⍺, ERß, mER, PRA, PRB, mPR, PGRmC1 методом РТ-ПЦР. В эксперименте определяли изменение рецепторного профиля МНФК после инкубации клеток с прогестероном и мифепристоном у пациенток с полипами эндометрия и здоровых женщин. При анализе результатов в ткани ГЭ обнаружен высокий уровень ERα, ERβ, PRA, PRB, mPR, PGRmC1. В МНФК при АГЭ выявлен высокий уровень mER, ER⍺, PRA. Это может свидетельствовать о подавлении функции моноцитов, макрофагов, Т-лимфоцитов и натуральных киллеров. При аденокарциноме эндометрия рецепторный транскриптом в МНФК не нарушен, что может означать развитие автономности опухоли. В исследовании in vitro мифепристон снижает экспрессию ER⍺, ERß, mPR, PGRmC1, PRA, PRB в МНФК у пациенток с полипами эндометрия. На наш взгляд, это нивелирует негативное действие половых стероидных гормонов на иммунокомпетентные клетки.
ПРОСМОТРЫ 487
Способность инфицировать и размножаться в непрофессиональных фагоцитах лежит в основе вирулентности грамположительной бактерии Listeria monocytogenes. В процессе протекания инфекции захваченные клетками системы мононуклеарных фагоцитов листерии устойчивы к перевариванию и могут размножаться внутри макрофагов. Один из ключевых факторов патогенности L. monocytogenes белок интерналин В (InlB) взаимодействует с рецепторами клеток млекопитающих c-Met и gC1qR. При его взаимодействии с рецепторами, находящимися на поверхности эпителиальных клеток, происходит активация рецепторов, перестройки цитоскелета и, как результат, активная инвазия бактерий внутрь непрофессиональных фагоцитов. На сегодняшний день ничего неизвестно о влиянии InlB на взаимодействие L. monocytogenes с макрофагами, в то время как оба таргетных рецептора экспрессируются на поверхности макрофагов и вовлечены в развитие иммунных реакций. Целью работы было определить потенциальное влияние InlB на взаимодействие L. monocytogenes с макрофагами. Установлено, что 1) наличие InlB в 3,5 раза достоверно улучшает поглощение L. monocytogenes макрофагами; 2) через 24 ч штаммы EGDe∆inlB, EGDe и EGDe∆inlB::pInlB увеличили свою численность внутри макрофагов в 182,5 ± 16,7, 96 ± 12 и 13,3 ± 3 раз соответственно; 3) Штамм EGDe∆inlB::pInlB, комплементированный плазмидной копией гена inlB, продуцировал InlB в 3,3 раза лучше, чем штамм EGDe. Таким образом мы предполагаем, что InlB влияет на выживаемость листерий внутри макрофагов. Полученные результаты углубляют понимание процессов взаимодействия возбудителя с макрофагами.
ПРОСМОТРЫ 707
У подавляющего числа пациентов, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения, выявляются остаточные явления, из них у 50% — когнитивные нарушения, ограничивающие самообслуживание в быту, трудовую деятельность и социальную адаптацию в целом и приводящие к инвалидности даже при отсутствии значительных двигательных нарушений. Целью исследования было подобрать наиболее эффективную продолжительность ингаляции ксенона с 0,5 МАК (максимальной альвеолярной концентрацией) для снижения выраженности неврологических и когнитивных нарушений при экспериментальном инсульте. На 70 крысах смоделирована фокальная ишемия-реперфузия по методу Лонга с последующей ингаляцией ксенона 0,5 МАК в течение 30, 60 или 120 мин. Неврологический дефицит оценивали с помощью серии из семи тестов «Постановка конечности на опору», когнитивные функции — тестом «Водный лабиринт Морриса». Экспозиция ксенона 0,5 МАК в течение 30 мин приводила к росту числа баллов в тесте «Постановка конечности на опору» на 40% (р = 0,055) и уменьшению латентного времени в тесте «Водный лабиринт Морриса» на 17,6% (р = 0,08) по сравнению с контрольной группой, экспозиция в течение 60 мин — в 2 раза (р = 0,01) и на 44,4% (р = 0,04), в течение 120 мин — тоже в 2 раза (р = 0,01) в обоих тестах соответственно. Сделан вывод, что ингаляция ксенона 0,5 МАК при экспозиции 30 мин не приводит к значительному улучшению состояния животных и их способности к обучению, о чем свидетельствует отсутствие статистически значимых различий. Экспозиция же ксенона в течение 60 мин значительно уменьшает неврологический и когнитивный дефицит в группе исследования, а увеличение времени экспозиции ксенона до 120 мин оказывает сопоставимый эффект.
ПРОСМОТРЫ 466
Краткосрочная экспрессия генов является одним из самых широко используемых методов в молекулярной биологии, как в исследовательских проектах, так и для решения задач биотехнологической промышленности. Несмотря на то что существующие коммерческие трансфекционные агенты позволяют добиться эффективной трансфекции и высокой экспрессии целевых генов в клетках, масштабирование производственного процесса часто затруднительно из-за высокой стоимости таких агентов. Хорошо описанные методы катионной или кальций-фосфатной трансфекции доступны и дают воспроизводимые результаты при значительно меньшей себестоимости. Целью исследования было проверить методы кальций-фосфатной трансфекции, катионной трансфекции (PEI) и коммерчески доступного реагента TurboFect на эффективность монотрансфекции и котрансфекции на панели широко используемых клеточных линий, таких как HEK293T, HUH7, BHK-21, CHO, MRC5. Эффективность трансфекции плазмидными конструкциями, несущими различные флуоресцентные белки, оценивали путем проведения проточной цитофлуориметрии. Среди всех методов кальций-фосфатная трансфекция позволяет добиться максимально эффективной доставки плазмидной ДНК во всех клеточных линиях, использованных в нашем исследовании, кроме BHK21 — для нее катионная трансфекция с использованием PEI оказалась эффективнее, и сопоставима по эффективности с кальций-фосфатным методом в клеточных линиях CHO.
ПРОСМОТРЫ 445