Цель исследования заключалась в сравнительном анализе витаминной обеспеченности организма городских и сельских школьников и уровней свободнорадикальных реакций в их сыворотке крови.

ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ

Были сформированы две опытные группы: в одну включили городских школьников, проживающих в г. Оренбурге (n = 250), в другую — сельских, проживающих в селах, расположенных на территории Оренбургского района (n = 200). В каждой из них выделили возрастные подгруппы: 12–14 лет (n = 150 и n = 100 среди городских и сельских школьников соответственно) и 15–17 лет (n = 100 в обеих группах). В исследование включали учащихся в возрасте 12–17 лет, без хронических заболеваний, не болевших в течение месяца до проведения исследования и проживающих на территории с одинаковой антропогенной нагрузкой (внутри группы). Критериями исключения являлось нежелание школьников или их родителей участвовать в исследовании. Исследование было одобрено этическим комитетом Оренбургского государственного медицинского университета, родители школьников дали письменное согласие на участие детей в эксперименте. Материал для исследования был получен в двух группах одновременно через три месяца после начала занятий в школе.

В качестве биологического материала для исследования использовали венозную кровь и мочу. Кровь отбирали утром натощак в объеме 10 мл в вакуумные пробирки Vacuette (BD, США) без антикоагулянта. Время доставки в лабораторию составляло 2 ч, транспортировку и хранение осуществляли при температуре 18–25 °C. Мочу отбирали утром после сна или не ранее чем через 2–3 ч. после предыдущего мочеиспускания в сухой стерильный флакон в объеме не менее 20 мл. Время транспортировки и хранения составляло 3 ч, транспортировали и хранили биоматериал при температуре 18–25 °C.

Методом индуцированной хемилюминесценции (активация железом) определяли уровень свободнорадикальных реакций в сыворотке крови. Для этого кровь школьников после забора выдерживали в течение 30 мин и затем центрифугировали при 1500 об/мин в течение 15 мин. Полученную сыворотку разводили фосфатным буфером (2,72 г KH₂PO₄ и 7,82 г КСl на 1 л дистиллированной воды, pH 7,4). Полученный раствор титровали насыщенным раствором КОН до достижения pH 7,45. Регистрацию хемилюминесценции проводили по методике Р. Р. Фархутдинова [15] на приборе «Хемилюминометр–3» («Люмэкс», Россия). Чувствительность прибора составляет ~200 фотонов/с. Калибровку прибора выполняли перед началом работы по эталонному источнику света (люминесцирующее урановое стекло ЖС–19). Определяли высоту быстрой вспышки, светосумму медленной вспышки (S) и тангенс угла наклона заднего фронта импульса излучения хемилюминесценции. Значения показателей привели в относительных единицах, рассчитав их соотношение для опытных и «холоcтых» проб.

Определяли уровень экскреции витаминов группы B и витамина С в моче и содержание витаминов А и Е — в сыворотке крови.

Анализ проб на содержание ретинола и токоферола проводили с помощью анализатора биожидкостей «Флюорат 02–АБЛФ» («Люмэкс», Россия). Пробы готовили следующим образом. В одну пробирку для центрифугирования помещали 1 мл сыворотки крови и 1 мл этанола, во вторую — 1 мл дистиллированной воды и 1 мл этанола (калибровочный образец). Обе пробирки встряхивали в аппарате Vortex в течение 30 с, затем добавляли 5 мл гексана и снова встряхивали в течение 1 мин. После встряхивания пробирки центрифугировали в течение 10 мин при 1500 об/мин. Отделившийся гексановый слой (экстракт) использовали для флуориметрического анализа. Содержание витамина А или Е (Х, мкг/мл) в сыворотке крови вычисляли по формуле, где C_изм — концентрация витамина в экстракте, мкг/мл; V_э — объем экстракта, мл; V_c — объем сыворотки крови, взятой для анализа, мл; Q — коэффициент, учитывающий разбавление экстракта.

Содержание аскорбиновой кислоты и витаминов группы В определяли по уровню их экскреции с мочой. Для витамина С использовали метод визуального титрования с реактивом Тильманса (2,6–дихлорфенолиндофенолят натрия). В две конические колбы отмеряли по 10 мл мочи, 10 мл дистиллированной воды и 1 мл 10 %-го раствора HCl. Содержимое каждой колбы перемешивали и титровали 0,001 н раствором реактива Тильманса до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30 с. Содержание витамина С (Х, мг/ч) рассчитывали по формуле, где 0,088 — коэффициент, отражающий количество аскорбиновой кислоты, эквивалентное 1 мл 0,001 н раствора 2,6–дихлорфенолиндофенолята натрия (в мг); А — средняя арифметическая результатов титрования 0,001 н раствором 2,6–дихлорфенолиндофенолята натрия двух проб мочи (в мл); Б — объем мочи, взятый для титрования (в мл); В — среднесуточное количество мочи (для мужчин — 1 500 мл, для женщин — 1 200 мл).

Экскрецию тиамина с мочой определили по методу Ванга и Харриса, рибофлавина — по методу Е. М. Масленниковой и Л. Г. Гвоздевой, пиридоксина — флоурометрическим методом [16].

Оценку фактического питания школьников проводили методом 24-часового воспроизведения питания с помощью опросника [17] с последующим определением биологической ценности рационов по таблицам химического состава пищевых продуктов И. М. Скурихина и В. А. Тутельяна [18] и сопоставлением полученных данных для каждой возрастной группы с физиологическими нормами [19].