ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Модели митохондриальной дисфункции с индуцируемой экспрессией мутантного варианта гена Polg
Информация об авторах
1 Институт биологии гена, Москва, Россия
2 Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н. Н. Блохина, Москва, Россия
Для корреспонденции: Марина Владиславовна Кубекина
Бескудниковский бульвар, д. 32, корпус 1, г. Москва, 127474, Россия; moc.liamg@ymukyram
Информация о статье
Финансирование: исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта 19-34-90073.
Вклад авторов: М. В. Кубекина — анализ литературы, проведение всех экспериментов, анализ и интерпретация результатов, подбор олигонуклеотидов, написание рукописи; А. А. Калинина, Д. С. Коршунова — проведение экспериментов; А. В. Брутер — анализ литературы, планирование исследования, анализ и интерпретация результатов; Ю. Ю. Силаева — анализ литературы, планирование исследования, анализ и интерпретация результатов, научное редактирование рукописи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ИБГ РАН (протокол № от 5 декабря 2021 г.) и проведено в строгом соответствии с положениями Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Статья получена: 14.04.2022
Статья принята к печати: 28.04.2022
Опубликовано online: 27.04.2022
|
Рис. 1. Результаты генотипирования выбранных для экспериментов культур MEF, а также экспрессии мутантного гена Polg и определение ММП. А. Генотипирование на STOP-кассету (292 п.н.) и терминатор (417 п.н.). Б. Генотипирование на CMV (100 п.н.) и внутренний контроль (324 п.н.). В. Экспрессия мутантного гена Polg в культурах MEF Polg*Cre-CMV, Polg, CMV-Cre и WT. Измерения всех контрольных культур Polg, CMV-Cre и WT усреднены между собой. Экспрессия мутантного гена Polg в культурах Polg*Cre-CMV принята за единицу, относительно нее посчитана экспрессия в контрольных культурах. Г. Определение ММП в MEF в течение 5 недель. Измерения всех контрольных культур Polg, CMV-Cre и WT усреднены между собой и приняты за единицу, относительно нее посчитаны значения ММП экспериментальных культур Polg*Cre-CMV. * — различия достоверны
Рис. 2. Экспрессия генов Pink1 (А), Parkin (Б), Map1lc3a (В), Nix (Г) и Lamp2 (Д) в течение 5 недель культивирования MEF
Рис. 3. Результаты тестов на выносливость мышей линии Polg*Cre-CMV (обозначены темно-серым цветом) и дикого типа (обозначены светло-серым цветом). А. Тест «Натянутая проволока». Б. Тест на силу хвата. * — различия достоверны
Рис. 4. Снижение экспрессии генов Cd3ε, Cd3δ и Tcr-α в смешанной культуре спленоцитов мышей Polg*Cre-CMV по сравнению с мышами дикого типа. * — различия достоверны
Рис. 5. Профиль экспрессии маркеров CD4 и CD8 живыми одиночными клетками тимуса трансгенных животных Polg*Cre-CMV (Б) по сравнению с животными дикого типа (А), а также подсчет клеток тимуса (В). * — различия достоверны
Таблица. Последовательности праймеров, используемых в работе
