ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Трансгенные мыши для изучения киназа-независимых механизмов действия циклин-зависимых киназ CDK8/19
1 Институт биологии гена Российской академии наук, Москва, Россия
2 Центр высокоточного редактирования и генетических технологий для биомедицины, Институт биологии гена Российской академии наук, Москва, Россия
Для корреспонденции: Леонид Альбертович Ильчук
проспект Мира, д. 124, г. Москва, 129164, Россия; moc.liamg@21kuhcel
Финансирование: Грант РНФ № 22-15-00227.
Вклад авторов: Н. И. Ставская ― проведение экспериментов, работа с животными; Л. А. Ильчук ― написание рукописи, разработка систем генотипирования, анализ результатов; Ю. Д. Окулова ― с эмбрионами; М. В. Кубекина ― подготовка генно-инженерной конструкции, проведение экспериментов; Е. А. Варламова ― проведение экспериментов; Ю. Ю. Силаева ― анализ литературы, планирование исследования; А. В. Брутер ― анализ литературы, планирование исследования, анализ и интерпретация результатов, редактирование рукописи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ИБГ РАН (протокол № 1 от 10 ноября 2021 г.) и проведено в строгом соответствии с положениями Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Циклин-зависимая транскрипционная киназа CDK8 и ее менее изученный паралог CDK19 регулируют экспрессию зависимых генов посредством нескольких механизмов. CDK8/19 могут напрямую фосфорилировать некоторые транскрипционные факторы (ICN, STAT1), но в то же время в составе медиаторного комплекса эти киназы регулируют транскрипцию за счет взаимодействия с хроматином в области промоторов и энхансеров соответствующих генов. В последнее время появляются работы, демонстрирующие путем сравнения эффектов генетической инактивации и химического ингибирования киназной активности наличие у CDK8/19 киназа-независимых механизмов действия. Целью работы было получить трансгенных мышей, способных к индуцируемой и тканеспецифичной экспрессии киназнонегативной (лишенной фосфорилирующей активности) формы CDK8 — CDK8(D173A), которых впоследствии можно будет использовать для изучения киназа-независимых механизмов действия CDK8 in vivo. Методом случайного трансгенеза в результате микроинъекций линейной ДНК в пронуклеус нами получены четыре трансгенных особи F0, две из которых стали родоначальниками отдельных линий. Для всех F0 и полученных линий измерена копийность интегрировавшейся конструкции. Данная модель может быть использована для изучения киназа-независимых свойств белков CDK8/19.
Ключевые слова: трансгенез, регуляция транскрипции, Cdk8, киназа медиатора, киназа-независимые функции