ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Сравнение онколитической активности рекомбинантных штаммов вируса осповакцины LIVP-RFP и MVA-RFP в отношении солидных опухолей
Информация об авторах
1 Институт молекулярной биологии имени Энгельгардта, Российской академии наук, Москва, Россия
2 Московский физико-технический институт, Долгопрудный, Россия
3 Федеральный научно-клинический центр специализированных видов медицинской помощи и медицинских технологий Федерального медико-биологического агентства, Москва, Россия
Для корреспонденции: Анастасия Валерьевна Липатова
ул. Вавилова, д. 32, г. Москва, 119991, Россия; moc.liamg@vnaavotapil
Информация о статье
Финансирование: разработка онколитических вирусов и эксперименты in vitro были выполнены при поддержке Российского научного фонда (грант РНФ № 20-75-10157); эксперименты in vivo также выполнены при поддержке Российского научного фонда (грант РНФ № 22-64-00057).
Вклад авторов: Я. Шакиба — анализ литературы, выполнение преаналитического этапа работы, проведение экспериментов in vitro и in vivo, анализ и интерпретация данных, подготовка рисунков и графиков; Е. Р. Набережная — проведение экспериментов in vitro, анализ и интерпретация данных; Д. В. Кочетков — уход за животными, интерпретация данных, Г. М. Юсубалева — визуализация данных, редактирование рукописи; П. О. Воробьев — наработка препаративных количеств вируса для in vivo исследований; В. П. Баклаушев — планирование исследования, выполнение преаналитического этапа работы, анализ данных; А. В. Липатова — руководство исследованием, разработка дизайна, создание рекомбинантных штаммов, интерпретация данных, редактирование рукописи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ИМБ РАН (протокол № 3 от 27 октября 2022 г.). Эксперименты проводили в соответствии с директивой Европейского парламента и Совета Европейского союза 2010/63/ЕС о защите животных, используемых для исследований.
Статья получена: 20.02.2023
Статья принята к печати: 02.04.2023
Опубликовано online: 28.04.2023
|
Рис. 1. Характеристика рекомбинантных штаммов LIVP-RFP и MVA-RFP in vitro. А. Схема плазмидного вектора, используемого при разработке штаммов LIVP-RFP и MVA-RFP. Б, В. Флуоресцентная микроскопия клеток HEK293T, инфицированных рекомбинантным штаммом LIVP-RFP. Г, Д. Флуоресцентная микроскопия HEK293T, инфицированных MVA-RFP (увеличение ×100)
Рис. 2. Цитотоксичность рекомбинантных штаммов LIVP-RFP и MVA-RFP в различных культурах опухолевых клеток. Клетки BHK-21, B16, CT26 и 4T1 инфицировали с MOI 1 и 10 вирусами LIVP-RFP и MVA-RFP и оценивали жизнеспособность клеток с использованием МТТ-анализа в течение 24, 48 и 72 ч после заражения. Статистический анализ проводили с помощью t-теста; * — p < 0,05, * * — p < 0,01
Рис. 3. Эффективность репликации вирусных штаммов в клеточных линиях BHK-21, B16, CT26, 4T1, инфицированных MOI 1 и 10 LIVP-RFP и MVA-RFP на основе результатов проточной цитофлуорометрии через 24 и 48 ч. По оси ординат отложено число клеток в процентах, экспрессирующих RFP. Статистический анализ проводили с помощью t-теста; * — p < 0,05
Рис. 4. Динамика изменения объема опухоли у мышей с аллографтами карциномы толстой кишки CT26, карциномы молочной железы 4T1 и меланомы В16 после терапии рекомбинантными штаммами LIVP-RFP или MVA-RFP. Измерение опухоли проводили каждые два дня после лечения. Символ † указывает на эвтаназию животного. Статистический анализ проводили с помощью t-теста; * — p < 0,05, ns — отсутствие статистически достоверных различий
Рис. 5. Кривые выживания Каплана–Мейера в экспериментальных подгруппах мышей с аллографтами аденокарцином CT26, 4T1 и меланомы В16 после двухкратной внутриопухолевой инъекции рекомбинантных вирусов LIVP-RFP или MVA-RFP. Таким образом, как в экспериментах in vitro, так и in vivo получены данные, подтверждающие онколитическую активность рекомбинантного штамма LIVP-RFP в отношении модели аденокарциномы молочной железы 4Т1
