Изучению циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) в последнее время уделяют большое внимание. Это обусловлено их ведущей ролью в формировании отдаленных метастазов и, как следствие, в неблагоприятных исходах онкологических заболеваний. В настоящий момент имеются данные об их субпопуляционном составе [1], стволовых свойствах [2], эпителиально-мезенхимальном переходе (ЭМП) [3], резистентности к проводимой химиотерапии [4], а также опубликованы данные их геномного профилирования [5]. Кроме того, показано значение экспрессии интегринов на ЦОК для метастазирования при раке молочной железы (РМЖ), а интегриновый интерфейс ЦОК может быть связан с локализацией отдаленных метастазов [6–7]. Представлены также данные о связи количества этих клеток в периферической крови с выживаемостью и риском развития отдаленных метастазов при РМЖ [8], легкого [9], яичников [10], колоректального рака [11] и др. Так, в 2019 г. было показано, что наличие ЦОК с признаками стволовости и частичного ЭМП ассоциировано с неблагоприятным исходом заболевания и снижением общей выживаемости. Клетки с тем же фенотипом показали себя резистентными к химиотерапии [12].

При изучении различных популяций ЦОК нами были обнаружены необычные клетки с одновременной экспрессией лейкоцитарного маркера CD45 и эпителиального маркера CD326 (EpCAM). Оказалось, что другие исследователи получали схожие результаты. Так, в крови пациенток с РМЖ были обнаружены клетки с фенотипом CD45⁺CK⁺EpCAM⁺, среди которых в 90% случаев была отмечена и экспрессия маркера макрофагов CD68 [13]. Клетки с фенотипом CD45⁺EpCAM⁺ были обнаружены в первичной опухоли и плевральном выпоте у всех обследованных пациентов с немелкоклеточным раком легкого, причем большее процентное содержание таких клеток было ассоциировано с плохим прогнозом [14].

Наиболее вероятным механизмом образования клеток с одновременной экспрессией лейкоцитарных и эпителиальных маркеров является гибридизация (межклеточное слияние) опухолевых клеток с макрофагами или лейкоцитами. Образование гибридных клеток отмечено при многих физиологических процессах организма, таких как образование мышечной и костной ткани, заживление ран [15]. Физиологическую роль CD45⁺EpCAM⁺-клеток подтверждает их обнаружение в крови у здоровых доноров. Однако биологическое значение этих клеток, а также их роль в физиологических и патологических процессах до сих пор не ясны.

В связи с малоизученностью клеток с одновременной экспрессией лейкоцитарных и эпителиальных маркеров и данных об их возможной роли в опухолевой прогрессии и резистентности к химиотерапии [16] целью нашего исследования было изучить субпопуляции клеток с гибридным эпителиально-лейкоцитарным фенотипом, а также оценить признаки стволовости, ЭМП и интегриновый интерфейс, обусловливающие их возможные метастатические свойства при РМЖ.

ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ

Пациенты

В работу включены результаты исследования 128 пациентов. Критерии включения в исследование: наличие инвазивной карциномы неспецифического типа молочной железы; возраст от 29 до 76 лет (средний возраст: 52,56 ± 11,57; T1-4N0-3M0-1), проходивших лечение в клиниках НИИ онкологии Томского НИМЦ в период с 2015 по 2020 гг., включительно. Критерии исключения: наличие других гистологических типов рака молочной железы; наличие первично множественных злокачественных опухолей; наличие хронических воспалительных заболеваний в стадии обострения. Для оценки популяционного состава и метастатических характеристик циркулирующих клеток с гибридным фенотипом венозную кровь забирали у 108 пациентов до проведения неоадъювантной химиотерапии (НАХТ). Оценку ассоциации клеток с гибридным фенотипом с наличием лимфогенных и гематогенных метастазов проводили в группе пациентов, которым не проводили НАХТ (n = 79). Для оценки свойств популяций клеток с гибридным фенотипом первичной опухоли проводили исследование операционного материала, полученного у 35 пациентов в результате хирургического лечения (радикальной мастэктомии или секторальной резекции ткани первичной опухоли молочной железы). Неоадъювантную терапию указанным пациентам не назначали. Основные клиникоморфологические параметры представлены в табл. 1.

Подготовка образцов для проточной цитометрии

Венозную кровь брали у больных до проведения курсов НАХТ и хирургического этапа лечения утром натощак в объеме 12 мл в вакуумные пробирки с ЭДТА. Из всего объема крови готовили клеточный концентрат путем отстаивания при 37 °С в течение 90 мин под углом в 45° с последующим сбором белого кольца с клетками на границе осадка эритроцитов и отделившейся плазмы крови, а также всего надосадка, согласно методике Р. А. Поспеловой [17].

Свежие образцы опухоли подвергали механической дезагрегации с использованием BD Medimachine System (BD; США) для получения клеточных суспензий. Общую клеточность полученных суспензий определяли с помощью счетчика клеток Luna-II (Logos Biosystems; Корея).

Проточная цитометрия образцов и обработка данных

После Fc-блокирования раствором Human TruStain FcX™ Fc Receptor Blocking Solution (Biolegend; США) в клеточный концентрат и/или суспензию клеток первичной опухоли добавляли по 5 мкл моноклональных антител BV570 anti-human CD45 (клон HI30; Sony Biotechnology, США), BV650 anti-human CD326 (EpCAM) (клон 9C4; Sony Biotechnology, США), BV510 anti-human CD44 (клон G44-26; BD Horizon, США), PerCP/Cy5.5 anti-human CD24 (клон ML5; Sony Biotechnology, США), PE/Cy7 anti-human N-Cadherin (клон 8C11; Sony Biotechnology, США) и 7-AAD Viability Staining Solution (Sony Biotechnology; США) и инкубировали в темноте, при комнатной температуре 20 мин. В клеточный концентрат добавляли также по 5 мкл моноклональных антител BV 421-anti-β3 integrin (клон VI-PL2; BD Biosciences, США), Alexa Fluor 488-anti-β4 integrin (клон 422325; R&D Systems, США), BV Alexa Fluor 750-antiαVβ5 integrin (клон P5H9; R&D Systems, США). Параллельно ставили неокрашенный контроль. После инкубации для лизирования эритроцитов к образцам добавляли 500 мкл буфера OptiLyse C (Beckman Coulter; Франция) и отмывали в 2 мл раствора CellWASH (BD Biosciences; США) в течение 10 мин при 300 g с последующим удалением надосадка. На этапе внутриклеточного окрашивания к каждому неокрашенному и окрашенному образцу добавляли 250 мкл раствора BD Cytofix/Cytoperm (BD Biosciences; США) и инкубировали в темноте 30 мин при 4 °С, затем дважды отмывали в 1 мл буфера BD Perm/Wash (BD Biosciences; США), центрифугируя при 300 g 6 мин. К пробам добавляли 50 мкл буфера BD Perm/Wash (BD Biosciences; США), в окрашенную пробу добавляли по 5 мкл антител AF647-anti-human CK7/8 (клон CAM5.2; BD Pharmingen, США) и инкубировали при 4 °С в течение 20 мин. Затем отмывали каждую пробу в 1 мл буфера CellWASH (BD Biosciences; США) центрифугированием при 300 g 6 мин. На заключительном этапе к осадку добавляли 500 мкл Cell Staining Buffer (Sony Biotechnology; США) и ресуспендировали образец.

Контроль неспецифического окрашивания проводили с помощью соответствующих изотипических антител. В качестве положительного контроля для антител к эпителиальным маркерам EpCAM и CK7/8 и отрицательного контроля для CD45 использовали клеточную линию РМЖ MCF-7. В качестве отрицательного контроля антител к вышеуказанным эпителиальным маркерам и положительного контроля для CD45 использовали клеточную линию гистиоцитарной лимфомы U937.

Анализ образцов осуществляли на проточном цитометре Novocyte 3000 (ACEA Biosciences; США) с помощью NovoExpress 1.3.0 (ACEA Biosciences; США). Концентрацию циркулирующих клеток рассчитывали на 1 мл крови, концентрацию клеток первичной опухоли — на 1000 опухолевых клеток. При гейтировании клеток с гибридным фенотипом клетки сначала анализировали в режиме FSC vs SSC, затем выделяли синглеты в режиме FSC-A vs FSC-H, далее выделяли жизнеспособные клетки по негативному окрашиванию 7-AAD, затем анализировали параметры флюоресценции клеток в соответствующих каналах. Стратегия гейтирования клеток с гибридным фенотипом представлена на рис. 1.

Статистический анализ данных

Статистическую обработку данных проводили с помощью программ IBM SPSS Statistics 22 (Armonk; USA) и GraphPad Prism 8.3.1 (GraphPad Software; США). Все исследуемые параметры были проверены на соответствие нормальному закону распределения с помощью критерия Шапиро– Уилка. Параметры описывали с помощью медианы (Ме) и интерквартильного интервала (Q₁–Q₃). Оценку различий параметров осуществляли при помощи критериев Манна–Уитни и Уилкоксона. Для оценки различий частот встречаемости признаков использовали точный критерий Фишера. Для определения взаимосвязи между признаками рассчитывали коэффициент корреляции Спирмена. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05 (5%).

В качестве многофакторного метода для оценки взаимосвязи признаков, а также построения прогностических моделей использовали метод логистической регрессии. Пороговый уровень показателей для построения математических моделей определяли с помощью ROC-анализа. Вероятность развития события рассчитывали по формуле: Р = е^Y/(1 + е^Y), где Р — значение вероятности развития признака; Y — значение уравнения регрессии; е — математическая константа, равная 2,72. При вероятности Р ≥ 50% риск развития события считали высоким, при вероятности Р < 50% — низким. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05 (5%).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Субпопуляционный состав клеток с гибридным фенотипом 

С помощью метода проточной цитометрии была проведена оценка экспрессии лейкоцитарного маркера CD45 и эпителиальных маркеров EpCAM и CK7/8 в циркулирующих клетках и клетках первичной опухоли. Популяции CD45⁺клеток с коэкспрессией двух эпителиальных маркеров (CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺) и моноэкспрессией одного из эпителиальных маркеров (CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^–, CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺) были обнаружены в крови и первичной опухоли большинства пациентов (табл. 2). 

Самая часто встречающаяся и многочисленная популяция и в крови, и в первичной опухоли была представлена клетками с фенотипом CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^– (табл. 2; рис. 2А).

Статистически значимых корреляционных взаимосвязей количества клеток с гибридным фенотипом в крови и первичной опухоли больных РМЖ обнаружено не было.

Оценка метастатических характеристик клеток с гибридным фенотипом

Приобретение опухолевыми клетками, в том числе и ЦОК, признаков стволовости и ЭМП ассоциировано с их способностью к самообновлению, резистентности к противоопухолевой терапии и увеличению их метастатического потенциала [3, 12, 18]. Кроме того, экспрессия интегринов в ЦОК играет значимую роль в метастазировании и, вероятно, способствует нацеливанию этих клеток в отдаленные органы, определяя тем самым локализацию будущих метастазов [6–7]. Аналогичными свойствами могут обладать и ЦОК с гибридным фенотипом. В связи с этим мы провели анализ метастатического потенциала клеток с гибридным фенотипом, циркулирующих в крови, и клеток первичной опухоли путем оценки признаков стволовости, ЭМП и экспрессии интегриновых рецепторов.

Оценка признаков стволовости

Результаты анализа признаков стволовости в популяциях клеток с гибридным фенотипом в крови и первичной опухоли методом проточной цитометрии представлены в табл. 3 и на рис. 2Б. Установлено, что признаки стволовости встречались во всех популяциях клеток с гибридным фенотипом, как в крови, так и в первичной опухоли. Однако достоверных различий в частотах встречаемости клеток со стволовыми свойствами и без таковых обнаружено не было. Клетки с фенотипом CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^–CD44⁺CD24^– и CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺CD44⁺CD24^– в первичной опухоли встречались реже, чем в крови (р = 0,0126 и р = 0,0081 соответственно) (табл. 3).

При количественной оценке популяций клеток с гибридным фенотипом было установлено, что в крови преобладали клетки с моноэкспрессией эпителиального маркера EpCAM без признаков стволовости CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^–CD44^–CD24^– (р = 0,0306), в опухоли среди CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺-клеток было достоверно больше гибридов со стволовыми свойствами (р = 0,0233) (рис. 2Б).

Оценка признаков ЭМП

Оценку признаков ЭМП в популяциях клеток с гибридным фенотипом проводили путем детекции в них N-кадгерина методом проточной цитометрии (табл. 4; рис. 2В).

Экспрессия N-кадгерина встречалась во всех популяциях клеток с гибридным фенотипом и в крови, и в первичной опухоли. Однако частота встречаемости N-кадгерин-позитивных клеток была достоверно ниже, чем N-кадгерин-негативных клеток (табл. 4).

При количественной оценке клеток с признаками ЭМП было установлено, что и в крови, и в первичной опухоли клеток с гибридным фенотипом, экспрессирующих N-кадгерин, было меньше, чем клеток без его экспрессии (рис. 2В).

Оценка интегринового интерфейса

Результаты анализа экспрессии интегриновых молекул β3, β4 и αVβ5 в циркулирующих клетках с гибридным фенотипом методом проточной цитометрии представлены в табл. 5 и на рис. 3. При оценке частоты встречаемости изучаемых клеток было установлено, что реже всего обнаруживаются клетки с фенотипом β3⁺β4⁺αVβ5⁺ (р = 0,0003) (табл. 5).

Количество циркулирующих клеток с гибридным фенотипом и экспрессией β3- и/или β4- и/или αVβ5интегриновых рецепторов (ITG⁺) было достоверно выше (р = 0,0002), чем клеток без экспрессии указанных молекул (ITG^–) (рис. 3).

Ассоциация метастатических характеристик клеток с гибридным фенотипом с наличием лимфогенных метастазов

Сравнительный анализ метастатических характеристик клеток с гибридным фенотипом позволил выявить ассоциацию клеток с признаками стволовости и экспрессией интегриновых молекул с наличием лимфогенных метастазов (ЛМ).

Так, количество «стволовых» CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^– CD44⁺CD24^–-клеток оказалось достоверно выше (р = 0,0422) в крови пациенток с ЛМ, чем у пациенток без такового (рис. 4).

У пациенток без ЛМ количество клеток ITG^– и ITG⁺ с гибридным фенотипом было достоверно выше, чем у пациенток с наличием ЛМ (р = 0,0103 и р = 0,0031 соответственно) (рис. 4). В то же время у больных с ЛМ отмечалось достоверно большее количество ITG⁺ клеток (р = 0,0002), по сравнению с количеством ITG^–-клеток. Также было обнаружено увеличение количества β3⁺β4⁺αVβ5⁺-клеток (р = 0,0338) в крови пациенток с ЛМ по сравнению с пациентками без метастазов (рис. 4).

Математические модели, построенные с помощью метода логистической регрессии, подтверждают роль клеток с гибридным фенотипом в процессах лимфогенного метастазирования.

Так, риск развития ЛМ у больных РМЖ оказался связан с наличием в крови клеток с фенотипом CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺ и CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺ с признаками стволовости. Математическая модель имеет следующий вид:

Y = – 2,4 + 2,7X₁ – 1,0X₂,

где Y — значение уравнения регрессии; –2,4 — значение коэффициента регрессии свободного члена; X₁ — значение уровня CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺-гибридных клеток в крови (X₁ = 1 при количестве менее 14,94 клеток в 1 мл крови, X₁ = 2 при количестве более 14,94 клеток в 1 мл крови); 2,7 — значение коэффициента регрессии этого признака; X₂ — значение уровня CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺CD44⁺CD24^–клеток в крови (X₂ = 1 при количестве более 2,49 клеток в 1 мл крови, Х₂ = 2 при количестве менее 2,49 клеток в 1 мл крови); –1,0 — значение коэффициента регрессии этого признака.   

Чувствительность модели составляет 79%, специфичность — 85% (χ² = 18,49; р = 0,0001).

Таким образом, исследование показало наличие у клеток с гибридным фенотипом свойств стволовости и коэкспрессии β3-, β4- и αVβ5-интегринов, которые, вероятно, вносят вклад в механизмы формирования лимфогенных метастазов при РМЖ.

Ассоциация метастатических характеристик клеток с гибридным фенотипом с наличием гематогенных метастазов

При сравнительном анализе метастатических характеристик клеток с гибридным фенотипом было обнаружено, что с наличием гематогенных метастазов (ГМ) у больных ассоциированы клетки без признаков ЭМП и стволовости.

Так, у пациенток с ГМ отмечено достоверное увеличение количества клеток CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^–Ncadh^– и CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺N-cadh^– (р = 0,021 и р = 0,033 соответственно) по сравнению с больными без ГМ и снижение количества клеток CD45⁺EpCAM⁺CK7/8–N-cadh⁺ и CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺N-cadh⁺ (р = 0,0079 и р = 0,0079 соответственно) по сравнению с N-кадгерин-негативными клетками (рис. 5).

Количество CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺CD44⁺CD24^–-клеток при ГМ было достоверно ниже, чем CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺CD44^–CD24^–-клеток (р = 0,015) (рис. 5).

Достоверных различий между количеством клеток с гибридным фенотипом, имеющих и не имеющих признаки стволовости и ЭМП, в первичной опухоли при ГМ обнаружено не было.

Сравнительный анализ свойств циркулирующих клеток с гибридным фенотипом при ГМ показал изменение количества клеток с экспрессией интегриновых молекул (рис. 6).

У пациенток без ГМ и с наличием такового количество ITG^–-клеток с гибридным фенотипом было достоверно ниже, чем количество ITG⁺-клеток (р = 0,0100 и р = 0,0009 соответственно) (рис. 6). Было также обнаружено снижение количества β3^–β4⁺αVβ5^–-циркулирующих клеток (р = 0,0394) при ГМ по сравнению с его отсутствием (рис. 6).

Риск развития ГМ у больных РМЖ оказался связан с наличием в крови CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺-клеток независимо от наличия признаков стволовости и ЭМП и CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺-клеток с признаками стволовости. Математическая модель имеет вид:

Y = 63,5 – 31,8X₁ – 30,0X₂, 

где Y — значение уравнения регрессии; 63,5 — значение коэффициента регрессии свободного члена; X₁ — значение количества CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺-гибридных клеток в крови (X₁ = 1 при количестве менее 14,94 клеток в 1 мл крови, X₁ = 2 при количестве более 14,53 клеток в 1 мл крови); –31,8 — значение коэффициента регрессии этого признака; X₂ — количество CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺CD44⁺CD24^–-клеток в крови (X₂ = 1 при количестве более 2,49 клеток в 1 мл крови, X₂ = 2 при количестве менее 2,49 клеток в 1 мл крови); –30,0 — значение коэффициента регрессии этого признака.

Чувствительность модели составляет 100,0%, специфичность — 98,3% (χ² = 29,52; р = 0,0000004).

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Биологический феномен гибридизации при опухолевых процессах по-прежнему является причиной для дискуссий и споров. Несмотря на многочисленные исследования in vitro и in vivo за последние десятилетия, все еще не получены твердые доказательства того, что опухолевые гибридные клетки могут приводить к прогрессии опухоли.

Одним из наиболее вероятных механизмов образования гибридных клеток считают межклеточное слияние нормальных клеток с опухолевыми. Так, в ходе исследований in vitro было отмечено спонтанное слияние между клетками нормального эпителия молочной железы и опухолевыми клетками, между самими опухолевыми клетками, между опухолевыми эпителиальными клетками и эндотелиальными клетками, между опухолевыми эпителиальными клетками и стромальными клетками [19]. Замечено также, что процессы межклеточного слияния и образования гибридных клеток усиливаются после применения радио- и химиотерапии, что вызвано формированием локального воспаления в опухолевом микроокружении и процессами тканевой регенерации [20–21]. В настоящее время выяснение биологической природы клеток с гибридным фенотипом остается актуальной задачей.

Субпопуляционный анализ клеток с гибридным фенотипом показал, что эти клетки могут экспрессировать как один из эпителиальных маркеров EpCAM или CK7/8, так и оба. Согласно современным представлениям, маркеры EpCAM и CK7/8 экспрессируются преимущественно эпителиальными клетками [22]. Однако имеются данные о наличии экспрессии EpCAM в клетках-предшественниках костномозгового происхождения, например, в ранних эритроидных предшественниках [23]. В физиологических условиях клетки-предшественники рекрутируются из костного мозга в процессе репаративной регенерации по мере необходимости [24]. При опухолевом процессе они участвуют в формировании и поддержании опухолевой и преметастатических ниш и, следовательно, способствуют возникновению метастатического очага в отдаленных органах [25].

Таким образом, вероятнее всего, клетки с экспрессией CK7/8 и CD45 (CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺ и CD45⁺EpCAM^– CK7/8⁺) являются гибридами лейкоцитов или макрофагов и эпителиальных опухолевых клеток, в то время как популяция CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^–-клеток может быть представлена как лейкоцитарно-эпителиальными гибридами, так и гемопоэтическими клеткамипредшественниками костномозгового происхождения.

При оценке метастатических характеристик клеток с гибридным фенотипом установлено, что эти клетки принимают участие в механизмах ЛМ и ГМ. Так, по данным метода логистической регрессии при обоих видах метастазирования имеют место одни и те же закономерности: увеличение количества циркулирующих CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺-клеток и снижение количества CD45⁺EpCAM^–CK7/8⁺-клеток с признаками стволовости. Кроме того, при ЛМ в крови увеличивается количество CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^‒-клеток с признаками стволовости и CD45⁺EpCAM⁺-клеток с коэкспрессией β3-, β4- и αVβ5- интегринов. При ГМ повышается количество CD45⁺EpCAM⁺CK7/8^‒- и CD45⁺EpCAM⁺CK7/8⁺-клеток без признаков ЭМП и снижается количество этих же клеток с признаками ЭМП, а также CD45⁺EpCAM⁺-клеток с моноэкспрессией интегрина β4.

Приобретение гибридными клетками стволовых свойств может, по аналогии с ЦОК, способствовать их резистентности к противоопухолевой терапии и усилению метастатического потенциала. Увеличение количества β3-, β4- и αVβ5-экспрессирующих клеток с гибридным фенотипом при ЛМ тоже свидетельствует об усилении их метастатического потенциала. Интегрин β3 экспрессируется преимущественно тромбоцитами, гемопоэтическими клетками и ангиогенными эндотелиальными клетками и выполняет адгезивные функции при гемостазе, заживлении ран и ангиогенезе. Показана ассоциация интегрина β3 с опухолевым ростом, инвазией, возникновением метастазов в лимфоузлах и костном мозге и снижением выживаемости пациентов [26]. Интегрин β4 экспрессируют преимущественно эпителиальные клетки. При РМЖ интегрин β4 способствует опухолевой инвазии, повышает жизнеспособность опухолевых клеток и способствует ангиогенезу [27]. Интегрин αvβ5 является позитивным регулятором стволовости опухолевых клеток, способствует их росту и инвазии [28]. Ранее нами было установлено, что ЦОК экспрессируют промиграторный маркер CXCR4 [29]. Повышенный уровень экспрессии CXCR4 и интегриновых молекул в гибридных клетках может обеспечивать их высокий миграционный потенциал и способствовать диссеминации в различные органы, в результате гибридные клетки могут приобретать необходимые свойства для формирования метастазов [30].

На данный момент не известно, могут ли гибриды лейкоцитов и эпителиальных опухолевых клеток неограниченно делиться, формируя опухоль в дистантном органе, т. е. выполнять роль опухолевых клеток-семян. Не известно, способны ли гибридные циркулирующие клетки выполнять нишеобразующую роль. Однако уже сейчас можно утверждать, что гибридные клетки опухоли и периферической крови ассоциированы как с ЛМ, так и ГМ.

ВЫВОДЫ

Таким образом, в популяции клеток с гибридным фенотипом, так же, как и ЦОК, отмечается высокая степень гетерогенности, включая комбинацию признаков стволовости, ЭМП и разнообразный интегриновый интерфейс. Клетки с гибридным фенотипом принимают участие в процессах лимфогенного и гематогенного метастазирования. Наличие ЛМ ассоциировано с такими метастатическими характеристиками циркулирующих клеток с гибридным фенотипом, как признаки стволовости и коэкспрессия β3-, β4- и αVβ5-интегринов. При наличии ГМ метастатические характеристики клеток с гибридным фенотипом обусловлены признаками стволовости, но не признаками ЭМП и экспрессией интегринов. Понимание механизма участия клеток с гибридным фенотипом в метастазировании может быть полезным для совершенствования противометастатической терапии.