ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Экспрессия фактора ATOH1 индуцирует быструю дифференцировку иПСК в нейронном направлении
1 Сколковский институт науки и технологии, Центр молекулярной и клеточной биологии, Москва, Россия
2 Институт биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Москва, Россия
3 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия
4 Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва, Россия
Для корреспонденции: Надежда Георгиевна Гурская
ул. Островитянова, д. 1, стр. 1, г. Москва, 117997, Россия; ur.liam@ayaksrugn
Финансирование: работа была поддержана грантом РНФ № 22-14-00141.
Вклад авторов: А. И. Степанов — проведение эксперимента; Л. В. Путляева — планирование эксперимента, написание статьи; Д. А. Дидыч — дизайн и молекулярное клонирование элементов лентивирусной плазмиды, обработка рисунков; А. А. Галиакберова — культивирование клеток; Н. Г. Гурская — концепция и дизайн работы с ИПСК; К. А. Лукьянов — общее руководство исследованием.
Изучение индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (иПСК) и создание технологий их практического использования — одно из самых наукоемких направлений современных биомедицинских исследований. Несмотря на потенциал применения иПСК в персонализированной медицине и в создании клеточных моделей заболеваний различной этиологии, использование иПСК остается крайне сложным. Так, межклеточная гетерогенность иПСК при отсутствии эффективных способов определения идентичности и оценки существенно затрудняет воспроизводимость подобных исследований. Целью работы было создать линию иПСК, несущую ген транскрипционного фактора ATOH1 под контролем системы индукции экспрессии Tet-One, ген флуоресцентного белка TagBFP и ген устойчивости к пуромицину для селекции клеток. В работе использовали методы молекулярного клонирования, лентивирусную трансдукцию, культивирование клеток, иммунофлуоресцентное окрашивание и флуоресцентную микроскопию. Созданная клеточная модель позволит анализировать состояние единичных клеток и, следовательно, имеет большой практический потенциал как для лабораторных, так и для медицинских исследований.
Ключевые слова: иПСК, ATOH1, лентивирус, нейронная дифференцировка