Рис. 1. Схематичные карты векторов для наработки ингибитора рибонуклеаз с вспомогательными полипептидами, повышающими растворимость рекомбинантных белков в E. Coli, для вариантов на основе вектора pET28a с промотором Т7 (А), для вариантов на основе вектора pSol с промотором PRha (Б). RNH1 — ген, кодирующий человеческий ингибитор рибонуклеазы; hPP — ген, кодирующий один из хелперных полипептидов (MBP, TIG, TSF, FH8, PpiB, YrhB, SUMO, TRX, GST). Остов вектора pET28a (pET28_backbone) содержит в себе ген устойчивости к канамицину, ориджин репликации pBR322, а также последовательность, кодирующую репрессор lacI. Остов вектора pSol (pSOL_backbone) содержит в себе ген устойчивости к канамицину, ориджин репликации pUC, промотор PRha, индуцируемый рамнозой и терминатор транскрипции

Рис. 2. Влияние вспомогательных полипептидов на растворимость ингибитора рибонуклеаз для вариантов на основе вектора pET28a с промотором Т7 (А), для вариантов на основе вектора pSol с промотором PRha (Б) при наработке в штамме E. coli BL21 (DE3) на 16 °С. Относительный уровень нерастворимой фракции (IS) обозначен красным цветом. Синим показан уровень наработки ингибитора рибонуклеаз в растворимой форме (SO). ОЕ плотности — относительные единицы измерения при денситометрии результатов ПААГ

Рис. 3. Выбор оптимального штамма E. coli для наработки рекомбинантного ингибитора рибонуклеаз в растворимой форме, c использованием векторов, кодирующих химерный белок, состоящий из комбинаций ингибитора рибонуклеаз с двумя вспомогательными полипептидами (MBP, TIG). Относительный уровень нерастворимой фракции (IS) обозначен красным цветом. Синим показан уровень наработки ингибитора рибонуклеаз в растворимой форме (SO). ОЕ плотности — относительные единицы измерения при денситометрии результатов ПААГ

Рис. 4. Влияние дополнительной коэкспрессии генов клеточных шаперонов dnaK, dnaJ, grpE (на рисунке обозначены как KJE), groES и groEL (обозначены как ELS) на наработку рекомбинантного ингибитора рибонуклеаз в штамме E. coli KRX при 16 °С. Относительный уровень нерастворимой фракции (IS) обозначен красным цветом. Синим показан уровень наработки ингибитора рибонуклеаз в растворимой форме (SO). ОЕ плотности — относительные единицы измерения при денситометрии результатов ПААГ