ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Создание генетически кодируемого светоиндуцируемого сенсора для визуализации ядрышка
Сколковский институт науки и технологий, Центр молекулярной и клеточной биологии, Москва, Россия
Для корреспонденции: Лидия Викторовна Путляева
Большой бульвар, д. 30, стр. 1, Москва, Россия, 121205; ur.liam@avoliahkim.aidil
Финансирование: работа была поддержана грантом РНФ № 22-24-01109.
Ядрышки участвуют в усилении продукции рРНК и поддержании биогенеза рибосом в опухолевых клетках, что делает их желанной мишенью в генетических и онкологических исследованиях. Наиболее удобным методом визуализации ядрышка благодаря своей эффективности и доступности является флуоресцентная микроскопия. В настоящее время методы визуализации ядрышек либо неточны, либо непригодны для живых клеток, либо требуют постоянного окрашивания для живого мониторинга. Целью исследования было создать генетически кодируемую систему фотоиндуцируемых сенсоров (light-activated nucleolus sensor, LANS) для визуализации ядрышка в реальном времени. Комбинация домена eMag для светоиндуцируемой димеризации и ридерного домена белка DPF3 позволяет системе LANS эффективно осуществлять направленное перемещение целевого белка в ядрышко посредством облучения клетки короткими импульсами синего света, не влияя на морфологию клеток. Данная система позволяет увеличить представленность пробы LANS2 в ядрышке в 1,5 раза относительно значений интенсивности флуоресценции, полученных до облучения ядрышка. Созданная система сенсоров LANS позволит ускорить поиск новых лекарств и улучшить первичный скрининг лекарственных соединений в моделях in vivo.
Ключевые слова: эпигенетика, оптогенетика, флуоресцентные белки, eMags, ядрышко