Статья размещена в открытом доступе и распространяется на условиях лицензии Creative Commons Attribution (CC BY).
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Выявление микроглии и макрофагов с использованием антител к различным последовательностям белка Iba-1
Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия
Для корреспонденции: Валерия Алексеевна Разенкова
ул. Акад. Павлова, д. 12, г. Санкт-Петербург, 197376, Россия; ur.xednay@zar.ayirelav
Финансирование: исследование выполнено при финансовой поддержке Российского Научного Фонда, проект № 24-15-00032, https://rscf.ru/project/24-15-00032/
Вклад авторов: В. А. Разенкова — анализ литературы, интерпретация результатов, подготовка рукописи; О. В. Кирик — анализ результатов, редактирование текста, работа с иллюстрациями; В. С. Павлова — гистологическая проводка биологического материала, постановка иммуногистохимических реакций; Д. Э. Коржевский — концепция, планирование исследования, редактирование текста.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ФГБНУ «ИЭМ» (протокол № 2/24 от 25 апреля 2024 г.), проведено в полном соответствии с положениями Хельсинкской декларации (2013 г.).
Белок Iba-1 традиционно считают высокоселективным маркером микроглии благодаря специфической экспрессии гена именно в этой популяции клеток ЦНС. В результате альтернативного сплайсинга формируется несколько изоформ белка Iba-1, что может служить причиной расхождений результатов иммуногистохомических реакций в зависимости от того, к каким эпитопам иммуногена выработаны выбранные для исследования антитела. В связи с этим, а также с необходимостью определения надежных вариантов антител к Iba-1, доступных для исследователей в Российской Федерации, целью работы было оценить результаты выявления микроглии и макрофагов с использованием антител к различным последовательностям белка, выпускаемых разными производителями. Материалом для исследования служили образцы головного мозга и семенника половозрелых (3–5 месяцев) крыс-самцов Wistar (n = 8). В качестве первичных реагентов использовали поликлональные и моноклональные (клон JM36-62) антитела к Iba-1. Установлено, что моноклональные антитела клона JM36-62 позволяют добиться более высокой селективности выявления антигена при лучшем соотношении сигнал/фон и пригодны для замены реагентов, не доступных в настоящее время к приобретению. Использование поликлональных антител привело не только к иммуноспецифичной визуализации микроглии и макрофагов, но и к выявлению клеток эпителио-сперматогенного слоя семенника. Предполагается, что в клетках эпителио-сперматогенного слоя присутствует изоформа Iba-1, лишенная эпитопа, соответствующего последовательности иммуногенного для антител клона JM36-62 фрагмента нативного белка. Функциональное значение различных изоформ Iba-1 на настоящий момент остается неясным и требует дальнейших исследований.
Ключевые слова: иммуногистохимия, микроглия, макрофаги, Iba-1, AIF-1