ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Новый рекомбинантный ингибитор РНКаз LoRI для применения in vitro

Д. А. Сухов1,2,3, И. В. Холошенко1,4, Т. В. Петрова1, Г. А. Романенко1,2, М. Ю. Мышкин3, В. Ю. Кост3, Д. Ю. Трофимов1, Н. Ю. Усман5, Е. В. Барсова3,5
Информация об авторах

1 ООО «ДНК-Технология», Москва, Россия

2 МИРЭА — Российский технологический университет, Москва, Россия

3 Институт биоорганической химии имени М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова, Москва, Россия

4 Московский государственный технический университет имени Н. Э. Баумана, Москва, Россия

5 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия

Для корреспонденции: Наталья Юрьевна Усман
ул. Островитянова, д. 1/1, г. Москва, 117997, Россия; ur.relbmar@namsu_n

Информация о статье

Финансирование: исследование выполнено при финансовой поддержке ООО «ДНК-Технология».

Вклад авторов: Д. А. Сухов, Г. А. Романенко — инженерия, экспрессия и очистка белков; И. В. Холошенко, Т. В. Петрова — характеризация продукта, написание статьи; М. Ю. Мышкин — анализ структуры белка; В. Ю. Кост — дизайн исследования; Д. Ю. Трофимов — руководство проектом; Н. Ю. Усман — написание статьи; Е. В. Барсова — координация проекта, написание статьи.

Статья получена: 02.09.2024 Статья принята к печати: 09.10.2024 Опубликовано online: 28.10.2024
|

Ингибиторы РНКазы давно используют в биотехнологии и лабораторной диагностике. Целью работы было получить и охарактеризовать новый рекомбинантный ингибитор РНКаз LoRI. Полученный новый ингибитор рибонуклеаз LoRI представляет собой рекомбинантный белок массой 63 кДа, оптимизированный для высокопроизводительной экспрессии в E. coli и очистки с помощью металлохелатной аффинной хроматографии (IMAC). Продукт получен за счет N-концевого слияния полипептидной последовательности плацентарного ингибитора РНКаз мыши с тиоредоксиновым модулем. Целесообразность данной модификации с точки зрения структуры и функции белка подтверждена in silico. Выход очищенного растворимого рекомбинантного продукта в лабораторных условиях составил около 12 мг на 1 л экспрессионной бактериальной культуры. По активности in vitro продукт сопоставим с коммерческим аналогом или превосходит его. Кинетические данные соответствуют модели Лайнуивера–Берка.

Ключевые слова: ингибитор рибонуклеаз, тиоредоксин, металлохелатная аффинная хроматография (IMAC), модель Лайнуивера–Берка

КОММЕНТАРИИ (0)