Рис. 1. Стратегия анализа клеток брюшной полости мышей методом проточной цитофлуориметрии. При анализе проводили последовательное выделение популяций: лейкоцитов по параметрам прямого (FSC-A) и бокового (SSC-A) светорассеяния (Р1) (А); одиночных клеток по показателям FSC-H против FSC-A (Р2) (Б); живых клеток, негативных по окрашиванию Yellow Dead Cell Stain (Р3) (В); клеток EL-4 и лейкоцитов реципиента по анализу ко-экспрессии маркеров Kb и CD3: Kb⁺СD3⁺-клетки EL-4 (Kb⁺), Kb^–СD3⁺-клетки реципиента (Kb^–) (Г). Д. В популяции Kb^–СD3⁺-клеток (Kb-) выделяли Т-клетки (CD3⁺) по ко-экспрессии CD3 и CD8 (CD3⁺CD8⁺-клетки). Е. В популяции CD3⁺-клеток выделяли цитотоксические CD8⁺ Т-клетки (CD8⁺). Ж. В популяции CD8⁺ Т-клеток выделяли клетки, экспрессирующие эндогенные β-цепи Т-клеточного рецептора (ТКРβ) (Vb8.3^–), и клетки с трансгенной ТКРβ (Vb8.3⁺). З. Индивидуально для популяции Vb8.3^– и Vb8.3⁺ CD8⁺ Т-клеток анализировали ко-экспрессию маркеров CD44 и CD62L и определяли долю (%) эффекторов (CD62L^–CD44⁺)

Рис. 2. Особенности развития аллогенной лимфомы EL-4 в трансгенных мышах 7В. Трансгенным мышам 7В (H-2^k) трансплантировали внутрибрюшинно клетки аллогенной лимфомы EL-4 (H-2K^b) (TG⁺EL-4). В качестве контроля использовали нетрансгенных сибсов (WT⁺EL-4). На 12 день после трансплантации EL-4 анализировали клетки брюшной полости методом проточной цитофлуориметрии. А. Абсолютное количество (log) клеток. * * — р ≤ 0,01 (ANOVA, posthoc-тест Тьюки). Б. Относительное количество (%) опухолевых клеток EL-4 (Kb⁺). * * — р ≤ 0,01 (непарный t-критерий Стьюдента). Представлены данные двух независимых экспериментов (n = 4^–6)

Рис. 3. Кривые выживаемости трансгенных мышей 7В после трансплантации лимфомы EL-4. В качестве контроля использовали мышей родительской линии CBA/Lac (WT) и мышей C57BL/6, для которых EL-4 является сингенной опухолью. Представлены данные одного репрезентативного эксперимента (n = 4)

Рис. 4. Анализ иммунного ответа мышей 7В на аллогенную опухоль in vivo. Трансгенным мышам 7В (TG⁺EL-4) и нетрансгенным сибсам (WT⁺EL-4) трансплантировали внутрибрюшинно клетки аллогенной лимфомы EL-4. На 12 день после трансплантации EL-4 анализировали клетки брюшной полости методом проточной цитофлуориметрии. В качестве контроля использовали интактных (неиммунизированных) животных родительской линии CBA/Lac (WT) и трансгенной линии 7В (TG). А, Б. Относительное количество (%) Т-клеток (CD3⁺). В, Г. Относительное количество (%) цитотоксических CD8⁺ Т-клеток. Д, Е. Относительное количество (%) CD8⁺ Т-клеток с трансгенной β-цепью Т-клеточного рецептора (ТКРβ) (Vb8.3⁺) и CD8⁺ Т-клеток с эндогенно реаранжированными ТКРβ (Vb8.3-). А, В, Д. Представлены данные одного репрезентативного окрашивания. Б, Г, Е. Представлены данные двух экспериментов как среднее ± стандартная ошибка среднего (n = 4^–6). * — р ≤ 0,05; * * — р ≤ 0,01, ANOVA, post-hoc-тест Тьюки

Рис. 5. Анализ пула цитотоксических эффекторных Т-клеток трансгенных мышей 7B в ответе на аллогенную лимфому EL-4 in vivo. Анализ эффекторных CD44⁺CD62L^– CD8⁺ Т-клеток в брюшной полости трансгенных мышей 7В (TG⁺EL-4) и нетрансгенных сибсов (WT⁺EL-4) на 12 день после трансплантации EL-4. В качестве контроля использовали интактных (неиммунизированных) животных родительской линии CBA/Lac (WT) и трансгенной линии 7В (TG). А, Б. Относительное количество (%) эффекторных Т-клеток с трансгенной ТКРβ (Vb8.3⁺). В, Г. Относительное количество (%) эффекторных Т-клеток с эндогенно реаранжированными ТКРβ (Vb8.3^–). А, В. Представлены данные одного репрезентативного окрашивания. Б, Г. Представлены данные двух экспериментов как среднее ± стандартная ошибка среднего (n = 4^–6). * — р ≤ 0,05; * * — р ≤ 0,01, ANOVA, post-hoc-тест Тьюки