ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Цепецентричность Т-клеточных рецепторов у первично активированных эффекторов и рестимулированных клеток памяти
1 Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н. Н. Блохина, Москва, Россия
2 Центр высокоточного редактирования и генетических технологий для биомедицины, Институт биологии гена, Москва, Россия
Для корреспонденции: Дмитрий Борисович Казанский
Каширское ш., д. 24, стр. 15, г. Москва, 115478, Россия; ur.xednay@1yksnazak
Финансирование: работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 22-15-00342 (2022–2024).
Благодарности: авторы благодарят О. Британову (ИБХ РАН) и К. Лупырь (Сколковский институт науки и технологий) за получение и биоинформатический анализ библиотек α-цепей ТКР мыши.
Вклад авторов: А. А. Калинина — планирование исследования, анализ литературы, проведение экспериментов, анализ и интерпретация результатов, написание статьи; М. В. Кубекина — клонирование; Н. А. Персиянцева — проведение трансфекций; А. В. Брутер — подбор олигонуклеотидов, клонирование; Л. М. Хромых — планирование исследования, анализ литературы, редактирование статьи; Д. Б. Казанский — планирование исследования, анализ литературы, анализ и интерпретация результатов, редактирование статьи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России (протокол № 3П-10.06.2022 от 10 июня 2022 г.), проведено в строгом соответствии с положениями Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского cоюза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Т-клетки, эффекторы адаптивного иммунитета, оснащены антигенраспознающим Т-клеточным рецептором (ТКР), который представляет собой αβ-гетеродимер. Для ряда ТКР было показано функциональное доминирование одной цепи, и эта особенность рецептора получила название цепецентричности. В настоящее время неизвестно, является ли цепецентричность врожденным свойством некоторых ТКР и каков механизм ее формирования. Целью работы было установить частоту встречаемости подобных рецепторов в репертуаре эффекторов и рестимулированных клеток памяти мыши, специфичных к антигенам аллогенной опухоли. Сформированные в ходе первичного иммунного ответа in vivo долгоживущие клетки памяти рестимулировали клетками иммунизирующей опухоли in vitro. Первичные эффекторы получали в культуре in vitro путем стимуляции Т-клеток неиммунизированных мышей клетками этой же аллогенной опухоли. Методом NGS-секвенирования были созданы библиотеки ТКР эффекторов, вовлеченных в первичный и вторичный иммунный ответ. Для идентификации цепецентрических рецепторов были отобраны по 10 вариантов ТКРα из каждого репертуара. Путем трансдукции Т-клетки интактных мышей модифицировали индивидуальными вариантами α-цепей ТКР с последующей оценкой уровня их пролиферации в присутствии специфических аллогенных стимуляторов. В ходе скрининга in vitro выявлено 10% цепецентрических рецепторов в пуле первичных эффекторов, при этом доля таких ТКР в репертуаре реактивированных клеток памяти составила 30%. Таким образом, цепецентричность является исходно присущим свойством некоторых ТКР, но вторичная антигенная стимуляция может быть фактором селекции клонотипов с такими рецепторами.
Ключевые слова: Т-клетки памяти, Т-клеточный рецептор, цепецентричность, доминантно-активная α-цепь, первично активированные эффекторы