ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Цепецентричность Т-клеточных рецепторов у первично активированных эффекторов и рестимулированных клеток памяти
Информация об авторах
1 Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н. Н. Блохина, Москва, Россия
2 Центр высокоточного редактирования и генетических технологий для биомедицины, Институт биологии гена, Москва, Россия
Для корреспонденции: Дмитрий Борисович Казанский
Каширское ш., д. 24, стр. 15, г. Москва, 115478, Россия; ur.xednay@1yksnazak
Информация о статье
Финансирование: работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 22-15-00342 (2022–2024).
Благодарности: авторы благодарят О. Британову (ИБХ РАН) и К. Лупырь (Сколковский институт науки и технологий) за получение и биоинформатический анализ библиотек α-цепей ТКР мыши.
Вклад авторов: А. А. Калинина — планирование исследования, анализ литературы, проведение экспериментов, анализ и интерпретация результатов, написание статьи; М. В. Кубекина — клонирование; Н. А. Персиянцева — проведение трансфекций; А. В. Брутер — подбор олигонуклеотидов, клонирование; Л. М. Хромых — планирование исследования, анализ литературы, редактирование статьи; Д. Б. Казанский — планирование исследования, анализ литературы, анализ и интерпретация результатов, редактирование статьи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России (протокол № 3П-10.06.2022 от 10 июня 2022 г.), проведено в строгом соответствии с положениями Директивы 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского cоюза от 22 сентября 2010 г. по охране животных, используемых в научных целях.
Статья получена: 09.10.2024
Статья принята к печати: 30.10.2024
Опубликовано online: 30.11.2024
|
Рис. 1. Анализ Т-клеток селезенки мышей после in vivo иммунизации клетками аллогенной опухоли. Мышей C57BL/6 (n = 9) иммунизировали внутрибрюшинно клетками аллогенной мастоцитомы Р815. Через 2 месяца после иммунизации клетки селезенки животных анализировали методом проточной цитофлуориметрии. В качестве контроля использовали спленоциты интактных (без иммунизации P815) мышей C57BL/6 (n = 6). А) Относительное количество (%) Т-клеток (CD3+). Б) Доля (%) цитотоксических CD8+ Т-клеток. В) Доля (%) CD8+ Т-клеток с фенотипом наивных клеток (CD44–CD62L+), центральных клеток памяти (CD44+CD62L+) и эффекторных клеток памяти (CD44+CD62L–). Данные представлены как m ± SEM (n = 6-9). *р ≤ 0,05 по сравнению с интактным контролем (t-критерий Стьюдента)
Рис. 2. Уровень антиген-индуцированной пролиферации in vitro Т-клеток при первичном и вторичном иммунном ответе на клетки аллогенной опухоли. Клетки селезенки интактных (без иммунизации P815) и Р815-иммунизированных мышей C57BL/6 культивировали в присутствии аллогенной мастоцитомы Р815 в течение 72 ч. Спленоциты, аналогично культивированные без антигенной стимуляции, использовали для оценки фоновой пролиферации. Индекс антиген-индуцированного пролиферативного ответа на аллоантигены рассчитывали, как описано в Материалах и методах. Данные представлены как m ± SEM (n = 6–9). * *р ≤ 0,01 (t-критерий Стьюдента)
Рис. 3. Варианты α-цепей Т-клеточного рецептора, отобранные для скрининга in vitro. Частота встречаемости клонотипа α-цепи Т-клеточного рецептора в репертуаре эффекторов, вовлеченных в первичный иммунный ответ, (А) и рестимулированных Т-клеток памяти (Б)
Рис. 4. Уровень антиген-индуцированной пролиферации in vitro Т-клеток, трансдуцированных индивидуальными вариантами α-цепи Т-клеточного рецептора (ТКР). Активированные Т-лимфоциты интактной мыши C57BL/6 трансдуцировали α-цепями ТКР из репертуара первично активированных эффекторов (А) или рестимулированных клеток памяти (Б). Модифицированные лимфоциты помещали в культуру с сингенными стимуляторами (клетки лимфомы EL-4) или аллогенными специфическими стимуляторами (клетки мастоцитомы Р815) на 72 ч. Для оценки уровня фоновой пролиферации трансдуцированные Т-клетки культивировали без опухолевых клеток (фон). В качестве контроля использовали нетрансдуцированные активированные лимфоциты (НТЛ) и Т-клетки, модифицированные GFP. Представлены данные одного из двух репрезентативных экспериментов как m ± SEM для трех технических повторов. *р ≤ 0,05 (t-критерий Стьюдента)
