Оригинальное исследование Влияние эндовитреальной иллюминации на оксидативные процессы в крови кроликов
Р. Р. Ямгутдинов, Т. Р. Мухамадеев, Р. Р. Ахмадеев, К. С. Мочалов
Актуальной проблемой офтальмологии является исследование механизмов фотоповреждений сетчатки, происходящих во время витреоретинальных вмешательств. Цель исследования — оценить влияние эндоиллюминации различной интенсивности и продолжительности на изменение оксидативных процессов в крови кроликов. Эксперимент проводили на 16 кроликах, сетчатку которых подвергали воздействию эндоиллюминации разной продолжительности (30 и 60 мин) и интенсивности (8 и 16 кд/м2). Образцы крови из ушной вены кролика забирали до и после светового воздействия. Для оценки оксидативных процессов измеряли биохемилюминесценцию в цельной крови и сыворотке крови. Данные анализировали с использованием U-теста Манна–Уитни, а результаты считали достоверными при p ≤ 0,05. При 30-минутной световой экспозиции в цельной крови было зафиксировано статистически значимое увеличение биохемилюминесценции: в 1,5 раза при интенсивности 8 кд/м2 и в 2,5 раза при интенсивности 16 кд/м2 по сравнению с контрольными показателями (p < 0,05), что отражает усиление генерации активных форм кислорода клетками крови. В сыворотке, напротив, выявлено достоверное снижение уровней биохемилюминесценции: в 1,2 раза при интенсивности 8 кд/м2 и в 2 раза при интенсивности 16 кд/м2 относительно контроля (p < 0,05), что, очевидно, может свидетельствовать о компенсаторном увеличении антиокислительной активности в ответ на гиперактивацию свободнорадикальных процессов. При 60-минутной экспозиции изменения биохемилюминесценции имели более выраженный характер: усиление в цельной крови в 3 и 7 раз, и снижение в сыворотке крови в 2 и 3 раза соответственно. Таким образом, при интенсивном  световом воздействии отмечено изменение оксидативных процессов, определяемое временем и длительностью воздействия.
Статья получена: 30.09.2024
Опубликовано online: 15.11.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.049
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 299
Мнение Дисбиоз кишечника и колоректальный рак: от гипотез онкогенеза к неинвазивной диагностике
Е. В. Глазунова, А. С. Курносов, О. А. Злобовская
Колоректальный рак (КРР) — одно из самых распространенных злокачественных новообразований, занимающее лидирующие позиции по смертности от рака. Основная проблема КРР — диагностика заболевания на поздних стадиях (около 50% случаев выявляют на III и IV стадиях), что приводит к высокой летальности. Одним из ключевых факторов риска КРР являются дисбиотические нарушения кишечной микробиоты. С целью объяснить взаимосвязь дисбиоза и канцерогенеза были сформулированы три гипотезы возникновения КРР: «Alpha-bug», «Keystone pathogen hypothesis» и «DriverPassenger». Модель «Driver-Passenger» наиболее перспективна и разделяет бактерии на «драйверы» рака, запускающие воспаление и повреждение клеток, и «бактерии-пассажиры», моделирующие микроокружение опухоли, усиливающие ее рост и усугубляющие дисбиоз. Драйверы и пассажиры могут выступать маркерами различных стадий онкогенеза. Колоноскопия поверхности прямой и ободочной кишки — наиболее эффективный метод для обнаружения КРР, в том числе на ранних стадиях заболевания. Однако повсеместное применение данной процедуры ограничивается связанным с ней дискомфортом для пациентов и риском возможных последствий. Неинвазивное исследование микробиоты на основе модели «Driver-Passenger» может стать безопасной и доступной альтернативой инвазивной диагностике в ходе профилактического скрининга, позволяя повысить выживаемость за счет вовлечения большего числа пациентов.
Статья получена: 15.10.2024
Опубликовано online: 31.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.046
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 423
Оригинальное исследование Получение и оценка биологической активности экзогенной мРНК, кодирующей белок MxA человека
М. А. Плотникова, Д. Е. Бобков, С. А. Клотченко
Индуцируемый интерферонами типа I и типа III человеческий белок MxA является важным медиатором врожденного иммунитета и проявляет антивирусную активность в отношении широкого спектра РНК- и ДНК-содержащих вирусов. По последним данным, сверхэкспрессия белка MxA повышает чувствительность к проводимой химиотерапии и является одним из факторов благоприятного прогноза для пациентов с раком молочной железы. Экзогенная мРНК, способная к внутриклеточной продукции белка MxA, не только обладает потенциалом для лечения респираторных вирусных инфекций, но и может стать важным инструментом для фундаментальных исследований. Целью работы было сконструировать и получить методом in vitro транскрипции (IVT) экзогенную мРНК, кодирующую функциональный цитоплазматический белок MxA человека; изучить ее трансляционные свойства; оценить и выявить закономерности в экспрессии некоторых генов системы интерферонов в ответ на введение этой экзогенной мРНК в клетки. В результате работы были успешно сконструированы и получены методом IVT экзогенные мРНК (в количествах до 200 мкг), способные к эффективной трансляции (до 20 нг/мл белка со 100 нг мРНК в лунке 96-луночного планшета) в эукариотических клеточных системах; подтверждено диффузное внутриклеточное распределение белка MxA в клетках MDCK; выявлены достоверные изменения экспрессии интерферон-стимулируемых генов, таких как OAS1, PKR (EIF2AK2), MDA5, RIG-I. Наши дальнейшие исследования будут посвящены оценке терапевтического потенциала разработанных экзогенных мРНК в отношении вирусов гриппа А и В, респираторно-синцитиального вируса и коронавируса SARS-CoV-2.
Статья получена: 30.09.2024
Опубликовано online: 30.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.048
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 414
Мнение Выбор метода количественной оценки микробиоты кишечника: сравнительный анализ 16S NGS и ПЦР-РВ
О. А. Злобовская, А. С. Курносов, А. Ф. Шептулина, Е. В. Глазунова
В последнее время наблюдается значительная коммерциализация услуг по количественной оценке микробиоты кишечника с целью диагностики дисбиоза — нарушения микробного баланса. В условиях растущего интереса к персонализированным подходам в медицине и профилактической терапии диагностика дисбиоза приобретает все большее значение. Результаты подобного скрининга используют для рекомендаций по корректировке питания, изменению образа жизни или, при необходимости, назначения медикаментозного лечения. Для подобной оценки необходим надежный и точный метод оценки микробиоты, поскольку от качества полученных данных зависит корректность последующих рекомендаций и терапевтических вмешательств. В статье рассмотрены основные аспекты двух подходов, применяемых для количественной оценки микробиоты, — высокопроизводительного секвенирования гена 16S рРНК (16S NGS) и ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ), а также представлены их сильные, на наш взгляд, и слабые стороны.
Статья получена: 15.10.2024
Опубликовано online: 30.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.047
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 446
Оригинальное исследование Зависимость иммуногенности и реактогенности кандидатной мРНК вакцины против туберкулеза от пола животных и дозы препарата
В. В. Решетников, Г. С. Шепелькова, А. В. Рыбакова, А. П. Трашков, В. В. Еремеев, Р. А. Иванов
мРНК-вакцины показали высокую эффективность в борьбе с пандемией COVID-19 и другими вирусными инфекциями. Несмотря на интенсивное изучение мРНК-вакцин в последние пять лет, вопрос о безопасности их применения все еще остается актуальным. Целью работы было оценить иммуногенность противотуберкулезной мРНК вакцины в двух дозах у самок и самцов крыс через 2 и 4 недели после вакцинации. В эти же сроки определяли гематологические и биохимические показатели крови. Подтверждена дозозависимость иммуногенности мРНК вакцин как у самок, так и у самцов. Вакцинация привела к умеренной лимфоцитопении и нейтрофилии у самцов крыс, а также к выраженным дозо- и гендерзависимым изменениям в биохимических параметрах крови в различных временных точках. Полученные результаты свидетельствуют об умеренной токсичности противотуберкулезной мРНК вакцины и важности исследования ее токсических действий в различных временных точках у животных обоих полов.
Статья получена: 16.09.2024
Опубликовано online: 30.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.045
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 418
Оригинальное исследование Генетические портреты хантов и манси по гаплогруппам Y-хромосомы в контексте генофондов России
Г. Ю. Пономарев, А. Т. Агджоян, А. Ю. Потанина, Д. С. Адамов, Е. В. Балановская
Ханты и манси — коренные малочисленные народы Западной Сибири с уникальными культурными, антропологическими и лингвистическими особенностями. Изучение их генофонда позволяет реконструировать генетическую структуру населения, говорившего на угорских языках, от которого в современности сохранились только ханты, манси, а также венгры, в чьем генофонде присутствуют следы средневековой миграции угроязычных мадьяр. Детальная характеристика генофонда хантов и манси важна для реконструкции угорских популяций и генетической истории региона. Целью исследования было изучить репрезентативные выборки хантов (n = 83) и манси (n = 74) на основе базовой панели из 60 SNP-маркеров и углубленной панели 74 SNPмаркеров Y-хромосомы статистическими и картографическими методами в контексте коренного народонаселения Урала и Западной Сибири. Выявлены различия генофондов хантов и манси и по базовой панели гаплогрупп Y-хромосомы, и по ветвям гаплогрупп N2 и N3a4. Основная часть генофонда хантов равномерно распределена между N2-Y3195 (26%), N2-VL67 (23%) и N3a4-Z1936 (23%). В генофонде манси резко преобладает «западная» ветвь N2-Y3195 (69%). В многомерном генетическом пространстве манси тяготеют к популяциям Урало-Поволжья. Ханты по базовой панели Y-гаплогрупп сближаются с популяциями Западной и Южной Сибири. Анализ ветвей N3a4 показал, что ханты занимают промежуточное положение между «уральским» и «сибирским» кластерами: при движении предков хантов из Приуралья на северо-восток они включили оба генетических компонента. Геногеографические карты 10 ветвей гаплогруппы N3a4 в популяциях Урала и Западной Сибири отражают динамику генофонда в период от 4 до 2 тыс. лет назад.
Статья получена: 09.09.2024
Опубликовано online: 28.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.044
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 657
Оригинальное исследование Новый рекомбинантный ингибитор РНКаз LoRI для применения in vitro
Д. А. Сухов, И. В. Холошенко, Т. В. Петрова, Г. А. Романенко, М. Ю. Мышкин, В. Ю. Кост, Д. Ю. Трофимов, Н. Ю. Усман, Е. В. Барсова
Ингибиторы РНКазы давно используют в биотехнологии и лабораторной диагностике. Целью работы было получить и охарактеризовать новый рекомбинантный ингибитор РНКаз LoRI. Полученный новый ингибитор рибонуклеаз LoRI представляет собой рекомбинантный белок массой 63 кДа, оптимизированный для высокопроизводительной экспрессии в E. coli и очистки с помощью металлохелатной аффинной хроматографии (IMAC). Продукт получен за счет N-концевого слияния полипептидной последовательности плацентарного ингибитора РНКаз мыши с тиоредоксиновым модулем. Целесообразность данной модификации с точки зрения структуры и функции белка подтверждена in silico. Выход очищенного растворимого рекомбинантного продукта в лабораторных условиях составил около 12 мг на 1 л экспрессионной бактериальной культуры. По активности in vitro продукт сопоставим с коммерческим аналогом или превосходит его. Кинетические данные соответствуют модели Лайнуивера–Берка.
Статья получена: 02.09.2024
Опубликовано online: 28.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.043
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 398
Оригинальное исследование Изменение бактериального фитнеса в ходе экспериментальной адаптации Pseudomonas aeruginosa к колистину
Н. А. Маянский, Е. А. Бржозовская, Г. А. Скворцов-Игралов, С. В. Чаусова, И. В. Чеботарь
Оппортунистический патоген Pseudomonas aeruginosa занимает одно из ведущих мест в структуре возбудителей нозокомиальных инфекций, что связано с высоким адаптивным потенциалом и способностью быстро формировать устойчивость к антимикробным препаратам. Целью работы было оценить влияние адаптации P. aeruginosa к колистину на бактериальный фитнес. В исследование включили 9 изолятов, полученных в ходе экспериментальной эволюции штамма P. aeruginosa (лабораторный номер 1202) в условиях возрастающей концентрации колистина, кинетику роста которых сравнивали с родительским штаммом; у всех изолятов провели полногеномное секвенирование и определили минимальную подавляющую концентрацию колистина. Темпы роста оценивали при помощи многофункционального ридера Varioskan LUX (Thermo Scientific, США) в течение 18 ч при 37 °С, каждые 15 мин измеряя оптическую плотность (ОП) при λ = 600 нм. Учитывали максимальную скорость роста (СРmax, т. е. максимальное изменение ОП в течение 1 ч) и время, необходимое для достижения 50% от максимальной ОП, зарегистрированной при росте родительского штамма Ра_1202_0 (Т_ОП50%). Изоляты клона с мутациями в генах phoQ, lptA и prs отличались низкими показателями фитнеса от родительских штаммов. Например, СРmax изолята Ра_1202_43 составила 0,029 ОП/ч против 0,182 ОП/ч у исходного изолята Ра_1202_0, а ОП50% он достигал на 4,6 ч позже. Ростовые характеристики клона с мутациями в lpxL и lptB, а также клона, несущего мутированный pmrB, в целом были сопоставимы с показателями родительского штамма. Таким образом, модификации генома, наблюдавшиеся в ходе адаптации P. aeruginosa к колистину, оказывают неоднозначное влияние на бактериальный фитнес.
Статья получена: 22.08.2024
Опубликовано online: 19.10.2024
DOI: 10.24075/vrgmu.2024.042
Комментарии 0
ПРОСМОТРЫ 421