ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
Вестник РГМУ
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Сравнительное исследование иммуногенности полноразмерной и мультиэпитопной мРНК-вакцин против M. Tuberculosis по выраженности Т-клеточного ответа у мышей
Информация об авторах
1 Научный центр трансляционной медицины, Автономная некоммерческая образовательная организация высшего образования «Научно-технологический университет «Сириус», Сириус, Россия
2 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
3 Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, Россия
Для корреспонденции: Василий Владимирович Решетников
Олимпийский пр-кт, д. 1, г. Сочи, 354340, Россия; ur.hepsuitnalat@vv.vokintehser
Информация о статье
Финансирование: исследование выполнено при поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (соглашение № 075-10-2021-113, уникальный идентификатор проекта РФ----193021X0001).
Благодарности: авторы выражают благодарность сотрудникам АНО ВО «Университет «Сириус»: И. М. Теренину за постановку транскрипции in vitro, О. В. Заборовой за формуляцию мРНК в липидные наночастицы, М. А. Гавриляк и Е. В. Головину за очистку и характеризацию белка Rv3875; Д. В. Шевыреву за постановку эксперимента по внутриклеточному окрашиванию и В. А. Ситиковой за помощь в проведении эксперимента с животными.
Вклад авторов: О. О. Васильева, В. П. Терещенко — клеточные работы, анализ данных, написание статьи, подготовка рисунков; Б. Н. Крапивин, И. И. Патеев, С. А. Рыбцов — клеточные работы, проведение эксперимента с животными, анализ данных; А. Р. Муслимов, И. С. Кукушкин — дизайн конструкций, клонирование; Р. А. Иванов, В. В. Решетников — редактирование текста, анализ данных, координация проекта.
Соблюдение этических стандартов: исследование на животных одобрено этическим комитетом ИЦиГ СО РАН (2022 г.); проведено в соответствии с руководством по уходу и использованию лабораторных животных (2010 г.), Directive 2010/63/EU of the European parliament and of the council on the protection of animals used for scientific purposes (2010 г.), «Правилами надлежащей лабораторной практики» (2016 г.).
Статья получена: 24.04.2023
Статья принята к печати: 15.06.2023
Опубликовано online: 29.06.2023
|
Рис. 1. Дизайн эксперимента. А. Схематичное представление состава мРНК-ЛНЧ-вакцины и остальных препаратов. Б. Дизайн эксперимента на мышах С57BL6/J. Мыши были иммунизированы внутримышечно двумя различными вариантами мРНК-вакцин: mRNA Rv3875 (582 нуклеотида) или mRNA mEpitope (699 нуклеотида) по 50 мкг РНК каждой. Кроме того, мышей иммунизировали полноразмерным белком Rv3875 (25 мг), в качестве адъюванта к которому были использованы липидные наночастицы не содержащие мРНК в количестве эквивалентном (±) количеству частиц в группах с РНК-вакцинами. Помимо экспериментальных групп, были образованы две контрольные группы: первая с введением липидных наночастиц без мРНК, вторая с введением фосфатного буфера. В каждой группе было по три животных. Через четыре недели после первой иммунизации животные были иммунизированы повторно теми же дозами препаратов. Забой мышей и выделение селезенки осуществляли через четыре недели после второй иммунизации. Уровень сформированного Т-клеточного ответа у вакцинированных мышей определяли по количеству спленоцитов, секретирующих IFNγ в ответ на белок туберкулеза Rv3875 с помощью метода ELISpot
Рис. 2. Оценка Т-клеточного ответа спленоцитов иммунизированных мышей. А. Результаты ELISpot. Количество клеток, секретирующих IFNγ в ответ на стимуляцию DC2.4, активированных белком Rv3875. Данные представлены как среднее ± ошибка среднего. По три животных в группе. * — p < 0,05 по сравнению с группой PBS; # — p < 0,05 по сравнению с группой LNP; & — p < 0,05 по сравнению с группой Rv3875 + LNP. Б. Репрезентативные данные по внутриклеточному окрашиванию CD3+-Т-лимфоцитов (CD8+ и СD8‒ ), продуцирующих IFNγ. Цифры показывают процент клеток от общего пула CD3+CD8+- и CD3+СD8‒ -Т-лимфоцитов, которые продуцируют IFNγ
