ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Влияние модуляции активности р53 на взаимодействие членов семейства р53 в процессе дифференцировки кератиноцитов линии НаСаТ

А. Л. Русанов1, П. М. Кожин1,2, Д. Д. Ромашин1, М. Н. Карагяур1, Н. Г. Лузгина1
Информация об авторах

1 Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В. Н. Ореховича, Москва, Россия

2 ООО НПО «Перспектива», Новосибирск, Россия

Для корреспонденции: Александр Леонидович Русанов
ул. Погодинская, д. 10, стр. 8, г. Москва, 119121; moc.liamg@vonasur.l.rednaxela

Информация о статье

Финансирование: работа, включающая нокдаун гена р53, ИФА и ПЦР-исследования, выполнена в рамках Программы фундаментальных научных исследований государственных академий наук на 2013–2020 годы; эксперименты с применением Nutlin-3a были проведены на базе ООО НПО «Перспектива» при поддержке РФФИ, научно-исследовательский проект 18-44-540031/19.

Вклад авторов: Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов — концепция исследования; Д. Д. Ромашин, П. М. Кожин, Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов — дизайн исследования и анализ литературы; Д. Д. Ромашин, П. М. Кожин, М. Н. Карагяур — планирование и проведение исследования; П. М. Кожин, Д. Д. Ромашин, Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов — анализ и интерпретация данных; П. М. Кожин, Д. Д. Ромашин — подготовка текста статьи; П. М. Кожин, Д. Д. Ромашин, М. Н. Карагяур, Н. Г. Лузгина, А. Л. Русанов — редактирование рукописи, подготовка финального варианта статьи.

Соблюдение этических стандартов: исследование проведено в соответствии с требованиями Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации.

Статья получена: 27.11.2020 Статья принята к печати: 14.12.2020 Опубликовано online: 25.12.2020
|

Клетки линии HaCaT являются распространенной моделью для исследования нормальных кератиноцитов человека. Однако для клеток этой линии характерны мутации в гене TP53, что существенно сказывается на функциях кодируемого белка. Особенности данного регуляторного контура необходимо учитывать при использовании клеток HaСaT в качестве объекта исследований физиологии и патологии кожи человека in vitro. Целью исследования было изучить особенности реализации программы дифференцировки в клетках линии HaCaT в условиях модуляции активности белка р53. Снижения уровня экспрессии р53 добивались нокдауном гена ТР53 с помощью shRNA (в 2,2 раза, p < 0,05), и, напротив, увеличения концентрации активных форм данного белка в клетках достигали за счет воздействия на клетки Nutlin-3a — ингибитора MDM2, основного негативного регулятора р53. Установлено, что регуляция как минимум трех маркеров дифференцировки, СASP14, IVL (увеличение экспрессии в 3,9 и 3,7 раза соответственно при нокдауне p53, p < 0,05) и TGM1 (уменьшение экспрессии вдвое при нокдауне TР53 и увеличение в 1,7 раза при воздействии на клетки Nutlin-3a, p < 0,05), в клетках HaCaT зависит от активности p53. При этом в отношении экспрессии TGM1 и p53 отмечена прямая зависимость, которая, возможно, реализуется опосредованно, через изменение экспрессии ΔNp63. В то же время модуляция активности p53 не приводит к значительным изменениям экспрессии цитокератинов.

Ключевые слова: нокдаун, HaCaT, дифференцировка кератиноцитов, р53, р63, ΔNp63, TAp63, Nutlin-3a, shRNA

КОММЕНТАРИИ (0)